Завод эльком: Эльком (Briswik) — производим в России с 2005 года.

Содержание

Электротехнический завод Эльком. Кнопки, переключатели, ПКУ, контакты.

Прайс КЕ, ПЕ, КМЕ, КПЕ, посты ПКУ, ПКТмет

Продукция

Наше предприятие является одним из немногих в России производителем
— кнопок КЕ,
— кнопок КМЕ,
— переключателей ПЕ,
— переключателей КПЕ,
— постов управления ПКУ,
а также
— контактов с серебром заклепочного типа.
Осуществляются поставки по всей России, в Беларусь и Казахстан.

ЗНАЧИТЕЛЬНОЕ СНИЖЕНИЕ ЦЕНЫ! 

Модернизированные кнопке КЕ и переключатели ПЕ (диаметр 30мм)
Аналоги кнопок и переключателей ВК 50-21, ВК 14-21, КУ, Harmony9001k/sk(Schneider) и др.

НОВАЯ ПРОДУКЦИЯ — ИМПОРТОЗАМЕЩЕНИЕ! 

Полный цикл производства на предприятии, Российские материалы, контакты с серебром ! Кнопочные выключатели КМЕм, переключатели КПЕ (диаметр 22мм)
Аналоги кнопок КМЕ, КЕА (Украина), ВК43-21, ВК21, XB4, XB5 (Schneider), АВВ и других аналогичных кнопок европейского и китайского производства. Подберем аналоги!

По вашему заказу выполним надписи на пластике и металле методом лазерной маркировки.

Сертификаты качества 

Мы постоянно контролируем качество наших изделий.
Выключатели КЕ, КМЕ, ПЕ, КПЕ, ПКУ имеют сертификат качества ЕАС.
Их производство полностью соответствует ТУ и ГОСТам.

Используем качественные материалы

Корпуса и внутренние детали выключателей исполнены из негорючего, ударопрочного пластика! Наши изделия оснащены контактами с серебром, что значительно повышает их износостойкость, коммутационные параметры, а так же искробезопасность!

Наши партнеры

За эти годы клиентами нашей компании стали энергетические службы электростанций, метрополитена (Москва), речных и морских портов, РЖД, МАЗ(Белоруссия), МТЗ(Белоруссия), ОАО Северсталь (Череповец), Северский трубный завод, Магнитогорский металлургический комбинат  и т.д. Круг клиентов нашей компании очень широк от границ стран СНГ до Дальнего Востока. У нашей компании сложились крепкие отношения с надежными поставщиками. Поэтому мы можем гарантировать только качественную продукцию.

Доставка

Отгрузка продукции производится с офис-склада в городе Москве (ООО ТД Эльком), транспортной компанией «Деловые Линии». Доставка до транспортной компании бесплатно.

Продукция может быть отправлена с места производства (в г.Череповец) транспортными компаниями: «Деловые Линии», «ПЭК», «Желдорэкспедиция». Доставка до транспортной компании бесплатно.

НАШ ДЕВИЗ

Качество и уважение к КЛИЕНТУ!


Наша продукция в разделе Кнопки на Energoportal.ru  

Электротехнический завод Эльком ООО — Профсектор

Адрес: 162603, Россия, Вологодская область, Череповец, ул. Краснодонцев, 3Б

Сайт организации: pg-elcom.ru/

Электронная почта организации: [email protected]

Телефон организации: (8202) 28-39-83

Факс организации: (8202) 20-10-94

ИНН: 3528167638

ЕГРЮЛ СБИС Контур фокус

Код поставщика: SE307

Описание

Наше предприятие является одним из немногих в России производителем
— кнопок КЕ,
— кнопок КМЕ,
— переключателей ПЕ,
— переключателей КПЕ,
— постов управления ПКУ,
а также
— контактов с серебром заклепочного типа.
Осуществляются поставки по всей России, в Беларусь и Казахстан

Компания поставляет следующие классы обрудования:
  • Низковольтная аппаратура (НВА)
  • Аппаратура управления и индикации
  • Корпуса электротехнические и аксессуары к ним
Компания поставляет продукцию следующих производителей:
Логотип
Название производителя
Сертификаты
Schneider Electric

ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ», г. Череповец, ИНН 3528167638, контакты, реквизиты, финансовая отчётность и выписка из ЕГРЮЛ


Контактная информация неактуальна?


Юридический адрес

162603, Вологодская область, г. Череповец, ул. Краснодонцев, д. 3, литер Б

Показать на карте
Код ОКОГУ4210014

Организации, учрежденные юридическими лицами или гражданами, или юридическими лицами и гражданами совместно

Код ОКОПФ12300

Общества с ограниченной ответственностью

Код ОКФС 16

Частная собственность

Код ОКАТО19430000000

Череповец

Код ОКТМО19730000001

г Череповец

Регистрация в ФНС

Регистрационный номер 1103528005283 от 15 июня 2010 года

Межрайонная инспекция Федеральной налоговой службы №11 по Вологодской области

Регистрация в ПФР

Регистрационный номер 045027098212 от 17 июня 2010 года

Государственное учреждение — Управление Пенсионного фонда Российской Федерации в г. Череповце и Череповецком районе Вологодской области

Регистрация в ФСС

Регистрационный номер 350160372735011 от 16 июня 2010 года

Филиал №1 Государственного учреждения — Вологодского регионального отделения Фонда социального страхования Российской Федерации

  • Юридические лица 1
+ ещё 21

Финансовая отчётность ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ» согласно данным ФНС и Росстата за 2011–2021 годы

  • Выручка
  • Чистая прибыль
  • Капитал

Финансовые результаты за 2021 год
ВыручкаЧистая прибыльКапитал

132,6 млн ₽

58%

19 млн ₽

300%

20,7 млн ₽

41%
Бухгалтерская отчётность за все доступные периоды

Показатели финансового состояния за 2021 год

Финансовая устойчивость
  • Коэффициент автономии (финансовой независимости) 0.39
  • Коэффициент обеспеченности собственными оборотными средствами —
  • Коэффициент покрытия инвестиций 0.39
Ликвидность
  • Коэффициент текущей ликвидности —
  • Коэффициент быстрой ликвидности —
  • Коэффициент абсолютной ликвидности —
Рентабельность
  • Рентабельность продаж 14.3%
  • Рентабельность активов 35.6%
  • Рентабельность собственного капитала 91.5%
Сравнительный финансовый анализ за 2020 годНОВОЕ

Уплаченные ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ» – ИНН 3528167638 – налоги и сборы за 2020 год

Страховые взносы на обязательное социальное страхование на случай временной нетрудоспособности и в связи с материнством122,1 тыс. ₽
Налог на прибыль1 млн ₽
Страховые взносы на обязательное медицинское страхование работающего населения, зачисляемые в бюджет Федерального фонда обязательного медицинского страхования425,5 тыс. ₽
Страховые и другие взносы на обязательное пенсионное страхование, зачисляемые в Пенсионный фонд Российской Федерации1,4 млн ₽
Налог на добавленную стоимость1,6 млн ₽
Итого4,6 млн ₽
  • По учредителю 1

Учредитель ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ» также является руководителем или учредителем 1 другой организации

Компания ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ» не опубликовала ни одного сообщения, но является участником 1 сообщения на Федресурсе

  • Заказчик 0
  • Поставщик 5
ТипКоличествоОбщая сумма
94-ФЗ
44-ФЗ
223-ФЗ
ТипКоличествоОбщая сумма
94-ФЗ
44-ФЗ
223-ФЗ518 млн ₽

02.06.2015

Сдана финансовая отчётность за 2014 год

28.11.2015

Юридический адрес изменен с 162603, Вологодская область, г. Череповец, ул. Краснодонцев, д. 3, б на 162603, Вологодская область, г. Череповец, ул. Краснодонцев, д. 3, литер Б

02.06.2016

Сдана финансовая отчётность за 2015 год

01.08.2016

Регистрация в Едином реестре субъектов малого и среднего предпринимательства

25.02.2020

Сдана финансовая отчётность за 2019 год

16.07.2020

31.01.2021

Сдана финансовая отчётность за 2020 год

Похожие компании

Внимание! Основной сайт находится по адресу http://pg-elcom.ru/

На вашем компьютере есть гарнитура?
Тогда звоните нам прямо С САЙТА БЕСПЛАТНО!(в рабочее время)—ПОЗВОНИТЬ!—


ТЕЛЕФОНЫ:
(499)686-00-19, (495) 926-90-71, т/ф (495)926-90-72

НОВОСТИ:


НОВОЕ В ПРОДАЖЕ:
ТОЛЬКО У НАС! ЭД 11101, 10101 2013 года!
1. Предлагаем полный аналог — ЭД 10102М-40, 11102М-40

2. ТРАНСФОРМАТОРЫ ТОКА и НАПРЯЖЕНИЯ ТСМ, ОСМ, ТСЗИ и др.
3. ТРАНСФОРМАТОРЫ ДЛЯ ПОДОГРЕВА БЕТОНА Актуально!Строителям!
4. АВТОМАТИЧЕСКИЕ ВЫКЛЮЧАТЕЛИ
ЗАПУЩЕНО ПРОИЗВОДСТВО:

1. Переключатель ПЕ 171, ПЕ 181, ПЕ191, ПЕ 211, ПЕ 221.(ФОТО)

2. Посты ПКЕ в любой комплектации.(ФОТО)

ДЛЯ МЕТАЛЛУРГИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДСТВ!
3. Посты ПКТ в металлическом корпусе с ключом.(ФОТО)

ДЛЯ ЖЕЛЕЗНОЙ ДОРОГИ!
4. Кнопки КЕ, ПЕ с ударопрочными металлическими кольцами.(ФОТО)

ДЛЯ МЕТРОПОЛИТЕНА!
5. Кнопки КЕ, ПЕ с искробезопасными контактами из серебра.(ФОТО)

ПРАЙС-ЛИСТ от 15.06.12
Цены на муфты ЭТМ и микроперключатели уточняйте у менеджеров!

Скачайте здесь

ЗАРАБОТАЛ НОВЫЙ САЙТ

www.pg-elcom.ru

МЫ ДИЛЛЕРЫ ООО «ЭЛЕКТРОМАГНИТ»!

Заводские цены на электромагниты (с НДС) в Москве.

ПРЕЗЕНТАЦИЯ СВЕТОДИОДНЫХ СВЕТИЛЬНИКОВ

Каталог, фото, техописание.
Презентация, сравнение с обычными светильниками. Для экономных!

О КОМПАНИИ

Структура компании
ООО «Электротехнический завод Эльком» (г. Череповец).
Вид деятельности: Производство выключателей, переключателей, постов, контактов биметаллических.
ООО «ТД ЭЛЬКОМ» (г. Москва)
Вид деятельности: Оптовая торговля электрооборудованием.
Продукция
Наше предприятие является одним из немногих в России производителем
— кнопок КЕ,
— переключателей ПЕ,
— постов управления ПКУ, а также
— контактов с серебром заклепочного типа.
Осуществляются поставки по всей России, в Беларусь и Казахстан.
Сертификаты качества
Мы постоянно контролируем качество наших изделий.
— Выключатели КЕ, ПЕ имеют сертификат качества №POCC RU.ME63.B03070,
— посты ПКУ – № POCC RU.ME63.B03071.
Их производство полностью соответствует ТУ и ГОСТам.
Используем качественные материалы
Корпуса и внутренние детали выключателей исполнены из негорючего, ударопрочного пластика! Наши изделия оснащены контактами с серебром, что значительно повышает их износостойкость, коммутационные параметры, а так же искробезопасность!
Наши партнеры
За эти годы клиентами нашей компании стали энергетические службы электростанций, метрополитена (Москва), речных и морских портов, РЖД, МАЗ(Белоруссия), МТЗ(Белоруссия)и т.д. Круг клиентов нашей компании очень широк от границ стран СНГ до Дальнего Востока. У нашей компании сложились крепкие отношения с надежными поставщиками. Поэтому мы можем гарантировать только качественную продукцию.
Доставка
Отгрузка продукции производится с офис-склада в городе Москве (ООО Эльком), транспортной компанией «Автотрейдинг». Доставка до транспортной компании бесплатно. Продукция может быть отправлена с места производства (в г.Череповец) транспортными компаниями: «Автотрейдинг», «ПЭК», «Желдорэкспедиция», «Грузовозофф». Доставка до транспортной компании бесплатно.
НАШ ДЕВИЗ
Качество и уважение к КЛИЕНТУ!

ЭТЗ Эльком

Продукция:выключатели КЕ, переключатели ПЕ, посты ПКУ и биметаллические контакты.


© 2009 ООО «Электротехнический завод Эльком»


ООО «ЭЛЕКТРОТЕХНИЧЕСКИЙ ЗАВОД ЭЛЬКОМ» из Вологодской области | ИНН 3528167638, КПП 352801001

27.12

Производство электрической распределительной и регулирующей аппаратуры

22.1

Производство резиновых изделий

22.2

Производство изделий из пластмасс

24.3

Производство прочих стальных изделий первичной обработкой

24.4

Производство основных драгоценных металлов и прочих цветных металлов, производство ядерного топлива

25.5

Ковка, прессование, штамповка и профилирование; изготовление изделий методом порошковой металлургии

24.5

Литье металлов

25.61

Обработка металлов и нанесение покрытий на металлы

25.62

Обработка металлических изделий механическая

25.7

Производство ножевых изделий и столовых приборов, инструментов и универсальных скобяных изделий

25.9

Производство прочих готовых металлических изделий

27.9

Производство прочего электрического оборудования

32.1

Производство ювелирных изделий, бижутерии и подобных товаров

32.9

Производство изделий, не включенных в другие группировки

38.32.5

Обработка вторичного неметаллического сырья

38.32.2

Обработка отходов и лома драгоценных металлов

38.32.3

Обработка отходов и лома черных металлов

38.32.4

Обработка отходов и лома цветных металлов

45.3

Торговля автомобильными деталями, узлами и принадлежностями

46.1

Торговля оптовая за вознаграждение или на договорной основе

46.4

Торговля оптовая непродовольственными потребительскими товарами

46.6

Торговля оптовая прочими машинами, оборудованием и принадлежностями

46.77

Торговля оптовая отходами и ломом

46.9

Торговля оптовая неспециализированная

47.5

Торговля розничная прочими бытовыми изделиями в специализированных магазинах

52.10

Деятельность по складированию и хранению

52.2

Деятельность транспортная вспомогательная

52.24

Транспортная обработка грузов

52.29

Деятельность вспомогательная прочая, связанная с перевозками

Эльком, электротехнический завод , Череповец — телефон, адрес, время работы, отзывы

Сегодня: 9:00 — 18:00

Режим работы на неделю

Пн: 9:00 — 18:00

Вт: 9:00 — 18:00

Ср: 9:00 — 18:00

Чт: 9:00 — 18:00

Пт: 9:00 — 18:00

Сб: Выходной
Вс: Выходной

«Электротехнический завод Эльком» готов предложить импортозамещение выключателей переключателей и кнопок.

ООО «Электротехнический завод Эльком» расположен в одной из промышленных зон г. Череповца. Это уникальное предприятие для Вологодской области. Кроме того, что только здесь производятся промышленные переключатели аналогичные европейским, на заводе организован практически замкнутый цикл производства.

Небольшой, но стабильный и профессиональный коллектив освоил производство пластиковых, резиновых, металлических деталей и даже высокотехнологичную контактную группу выключателей выпускают сами.

И все материалы Российские!

Производство располагается в нескольких цехах:

-в механическом производится выпуск всех комплектующих деталей (кроме метизов и пружин). Здесь трудятся операторы прессов, термопластов, клепальщики, производится нарезка резьбы и выпуск резинотехнических изделий.
— в контактном на специальном высокоточном оборудовании выпускают контакты согласно ГОСТОВ и ТУ.
— в сборочном цехе осуществляется окончательная сборка выключателей, проверка их качества и упаковка. Здесь применяются такие современные и технологичные методы как ультрозвуковая сварка и лазерная маркировка.

В короткий срок были разработаны и внедрены аналоги европейских выключателей и переключателей, такие в России и СНГ больше никто не выпускает.

Продукция реализуется не только по всей России, но и в Казахстан и Беларусь.

Основными потребителями являются крупные промышленные предприятия, железная дорога, метрополитены. Кнопочные выключатели КЕ стоят сейчас в каждом современном трамвае. Для каждой группы покупателей разработаны свои особенные изделия. Для метро кнопки с контактами из чистого серебра, для железной дороги с прочными гайками из металла, а для моряков посты в специальных водонепроницаемых корпусах.

На этом ЭТЗ Эльком останавливаться не собирается, в планах регистрация в Морском регистре, выход на европейских покупателей.

Коллектив предприятия не боится трудностей, тем более, что государство стало обращать внимание на Российских производителей. В сентябре 2015 завод пригласили на выставку «Импортозамещение» в Москву. Многие конструкторские бюро сами обращаются с просьбами подобрать им замену таким маркам кнопок как КМЕ, КЕА (Украина), ВК43-21, ВК21, XB4 (Schneider), АВВ, LAY и других аналогичных кнопок Европейского и китайского исполнения.

В отличии от крупных предприятий ЭТЗ Эльком может принять заказ на изготовление нестандартного оборудования, например кнопочных постов и нанести на них любые надписи методом лазерной гравировки.

Хотелось бы отметить, что вся продукция получила сертификат ЕАС, имеется вся необходимая разрешительная и техническая документация, особенно пристальное внимание уделяется качеству!

ООО «Электротехнический завод Эльком»
162603, Вологодская обл, г. Череповец, ул. Краснодонцев, 3Б
(8202) 28-39-83, 20-10-94 [email protected]
www.pg-elcom.ru

Решения беспроводной связи для нефтегазовой отрасли Elcom Systems Michigan Wisconsin Upper Peninsula

Выход за рамки радио с решениями Motorola

Когда речь идет о безопасности, эффективности и производительности труда, нет ничего быстрее, чем прямо сейчас. Организации в различных энергетических сегментах — нефтегазовой, нефтехимической и горнодобывающей — в настоящее время манипулируют различными коммуникационными устройствами, и им мешают пробелы в покрытии, малое время автономной работы и хрупкое оборудование, которое не может выдерживать суровые условия окружающей среды.Мощь «сейчас» обеспечивает мгновенную связь вашим сотрудникам, потому что, когда связь замедляется, работа замедляется.

Горнодобывающая промышленность

Коммуникации в горнодобывающей промышленности, управляемые интеллектом
Рабочий на земле должен общаться с рабочим под землей. Драгоценные минералы должны быть отправлены в нужное место. Самосвалы, экскаваторы и погрузчики работают на полную мощность, создавая нежелательный шум. Push-to-Communication с помощью голоса и данных, которые мгновенно связывают людей, приложения и машины в разных шахтах для принятия более обоснованных решений.Когда вы дополняете первую в своем классе голосовую связь от Motorola Solutions с помощью Internet of Things Intelligence, вы можете подключить операции по добыче полезных ископаемых помимо повседневного разговора по нажатию для еще более оптимизированных операций.

Нефть и газ

Коммуникации в нефтегазовой отрасли на основе данных о топливе
От нефтяной вышки до морских платформ и везде между ними наличие критически важных технологий в основе нефтегазовых операций является важным первым шагом на пути к повышению безопасности и операционной эффективности.Цифровая нефтяная вышка, дополненная интеллектуальными возможностями Интернета вещей, помогает принимать более эффективные и быстрые решения, которые могут иметь решающее значение. Эффективная беспроводная передача голоса и данных помогает работникам на суше и в море безопасно связываться и быть на связи, поэтому экстренные вызовы могут быть доставлены нужному человеку сразу же после обнаружения проблемы, независимо от устройства, сети и местоположения.

Унифицированные коммуникации
Предоставление работникам унифицированных командных коммуникаций от Motorola Solutions расширяет охват далеко за пределы радио- и сотовых сетей, поэтому все устройства и сети могут быть частью одного разговора.Затем дополните это решение для унифицированных коммуникаций интеллектуальными данными, генерируемыми из Интернета вещей, чтобы машинные данные теперь могли мгновенно присоединяться к вашим критически важным обсуждениям в рабочей группе.

Унифицированные коммуникации сегодня повышают безопасность работников, эффективность и производительность для различных типов энергетических компаний, но какие решения подходят для ваших конкретных приоритетов и потребностей?

Мгновенная связь
Радиостанции Motorola Solutions разработаны для обеспечения исключительной надежности в сложных условиях и развернуты по всему миру для связи в критически важных ситуациях.

Без границ
Благодаря новым способам совместной работы с использованием любой сети и любого устройства широкополосные PTT-решения от Motorola Solutions помогут вам полностью сосредоточиться на текущей задаче.

С дополнительными интеллектуальными возможностями
Расширьте возможности своих специалистов по безопасности с помощью мощных технологий и программного обеспечения. Avigilon предлагает полный спектр решений для видеонаблюдения и контроля доступа.

С уверенностью
Повышайте безопасность, уменьшая сложность, время и затраты на управление радио и инфраструктурой.

Коммуникационные решения для повышения безопасности, эффективности и производительности труда

Двусторонняя радиосвязь

Цифровые радиостанции Motorola
Если вам нужна прямая голосовая связь и обмен данными между вашими рабочими бригадами в полевых условиях на нескольких рабочих площадках, замените свои старые аналоговые радиостанции на цифровую двустороннюю радиосеть. Цифровые радиостанции Motorola обеспечивают мгновенную и надежную связь с определенными группами или отдельными лицами с дополнительным интеллектом. Когда случается что-то плохое, нет ничего быстрее, чем «нажми и говори».

MOTOTRBO от Motorola Solutions — это комплексное комплексное решение. Обширный портфель MOTOTRBO означает, что вы можете разработать комплексное решение для своей строительной фирмы, включая радиостанции военного назначения, инфраструктуру, системы, аксессуары, приложения и услуги, разработанные с учетом того, что вам нужно сегодня и в будущем.

Цифровые рации MOTOTRBO с двусторонней связью объединяют ваши рабочие бригады с мгновенной и всегда доступной связью, где бы они ни находились. При возникновении чрезвычайных ситуаций, от травмированного члена бригады до поломки оборудования на рабочей площадке, двусторонняя радиосвязь напрямую и мгновенно связывает руководство и бригады.Ваша рабочая сила в полевых условиях больше не подвержена переполнению сотовой связи во время ненастной погоды или чрезвычайной ситуации. Это одно из ключевых преимуществ радиостанций MOTOTRBO по сравнению с сотовыми телефонами.

MOTOTRBO обеспечивает плавную интеграцию голоса и данных благодаря расширенным функциям, которые просты в использовании, включая встроенный Bluetooth® 4.0, встроенный Wi-Fi®, отслеживание местоположения по GPS, обмен текстовыми сообщениями, соответствие стандартам IP и военным спецификациям для долговечности, а также Intelligent Audio которая автоматически регулирует громкость в соответствии с громкими звуками на строительной площадке.

Переход к сертификации для опасных зон
Если вы работаете в среде, где могут присутствовать легковоспламеняющиеся или взрывоопасные газы, пары или пыль, вам следует рассмотреть возможность использования оборудования связи, сертифицированного для использования в опасных зонах, которое часто называют «HazLoc».

Радиостанции MOTOTRBO™ и аккумуляторы, сертифицированные по стандарту TIA-4950, доступны с первого квартала 2015 года. Они четко обозначены новой маркировкой UL.

Узнайте больше о MOTOTRBO

Приложения

Сделайте свои рабочие места более безопасными и эффективными, добавив приложения для настройки радиосистемы MOTOTRBO.Эти приложения предоставляют расширенные возможности и функциональные возможности, которые можно использовать как на цифровых радиостанциях двусторонней связи, так и на мобильных устройствах, чтобы улучшить работу ваших рабочих бригад.

Некоторые из наиболее популярных приложений, которые мы используем для строительства, включают:

  • Безопасность персонала
  • Местоположение
  • Текстовые сообщения и электронная почта

Узнайте больше о приложениях MOTOTRBO

Услуга WAVE PTX™ Push-To-Talk
Услуга WAVE PTX™ Push-To-Talk расширяет возможности вашей радиостанции для тех, у кого нет радиостанций.Теперь инженер связи вдали от нефтеперерабатывающего завода или ИТ-директор на конференции могут общаться на своих смартфонах или планшетах с пользователями радио.

WAVE PTX позволяет подключать смартфоны, ноутбуки, планшеты, стационарные телефоны и другие устройства к любой общедоступной или частной мобильной сети передачи данных, включая Wi-Fi. Вы получаете беспрепятственное и безопасное подключение, доступную функцию «нажми и говори» и свободу сохранять свои тарифные планы и устройства.

Узнайте больше о службе WAVE PTX™ Push-To-Talk

Системы наблюдения

Видеонаблюдение и контроль доступа
Avigilon, компания Motorola Solutions, проектирует, разрабатывает и производит видеоаналитику, программное и аппаратное обеспечение для управления сетевым видео, камеры наблюдения и решения для контроля доступа.Повышение эффективности работы коммунальных служб и унифицированных командных коммуникаций с помощью передовых систем видеонаблюдения высокой четкости поможет оптимизировать ваши процессы и обеспечить высокий уровень обслуживания. Это означает, что электроэнергетические компании могут определить, где линии электропередач были повреждены во время урагана, и принять незамедлительные меры, водоканалы могут заранее следить за чистотой городского водоснабжения, а атомные электростанции могут обеспечить более надежную защиту своего периметра, чем когда-либо. Забудьте о догадках в своих коммунальных операциях с надежными решениями для видеоаналитики.

Нефтеперерабатывающие заводы
Мониторинг процессов безопасности и соблюдения нормативных требований имеет решающее значение в повседневной работе, чтобы гарантировать, что ничего не будет упущено в критических областях предприятия. Камеры Avigilon серии h5 Pro могут охватывать большие площади с превосходной четкостью, чтобы гарантировать, что все области будут покрыты меньшим количеством камер и кабельной инфраструктуры, а видеоаналитика может помочь обнаружить критические события, чтобы избежать возможных перебоев в обслуживании.

Природный газ
Для наблюдения за многокилометровыми трубопроводами природного газа камеры Avigilon h5 Edge Solution можно легко развернуть по всей длине трубопровода с минимальными требованиями к подключению и инфраструктуре.Камеры h5-ES используют запатентованную видеоаналитику Avigilon, чтобы привлечь внимание к потенциально критическим событиям и упростить решение, объединяя все мощные инструменты управления видео локально со встроенной памятью камеры, предоставляя пользователям максимальную интеллектуальную информацию на периферии.

Исследования по распространению, идентификации и борьбе с клещами домашней пыли в сельских домах местности Шебин Эль-Ком, Египет | Интернет-исследования в области здравоохранения и окружающей среды (HERO)

Абстрактный

Настоящее исследование было проведено в селе Элком Элахдар, Шебин Эль-Ком, мухафаза Менуфия в течение сезонов 2012 года, для расчета и определения видового состава и частоты встречаемости экстрагированных пылевых клещей, собранных с трех возрастов зданий в сельских домах, а также определить пределы токсичности различных концентраций эфирных масел трех растений в отношении двух видов семейства Pyroglyphidae, основного возбудителя аллергии у человека.Полученные результаты показали, что одиннадцать видов клещей относятся к пяти семействам (Pyroglyphidae, Chortoglyphidae, Glycyphagidae, Acaridae и Cheyletidae). Из общего количества собранных клещей (5276) самый высокий процент преобладающих видов составляли пылевые клещи: Dermatophagoides farinae (66,1%), за ними следуют D. pteronyssinus (23,3%), а процент остальных видов: Chortoglyphus arcuatus, Lepidoglyphus destructor, Glycyphagus. domesticus, Gohieria fusca, Tyrophagusputrescentiae, Caloglyphus sp, Cheyletus malaccensis, Blomia sp.и Acarus siro колебались в пределах 0,16-2,0%. Что касается влияния температурных градусов на популяцию клещей, высокие температуры более 25°С в летний сезон снижали численность D. farinae и D. pteronyssinus. Токсикологические испытания эфирных масел трех растений в отношении взрослых стадий D. farinae и D. pteronyssinus показали, что масло лемонграсса дает самый высокий токсический эффект по сравнению с маслами герани и тимьяна, где процент смертности составлял примерно около 100% при концентрации 800 частей на миллион. на обоих видах.LC50 лимонной травы составляла 228,992 и 293,615 частей на миллион по сравнению с двумя видами соответственно. По результатам исследований можно рекомендовать предпочтительнее применять противосаранчовые обработки в летний сезон, когда плотность популяции клещей наименьшая, кроме того, растительные масляные экстракты эффективно контролируют паразитарных пылевых клещей D. farinae и D. pteronyssinus и может использоваться в программах биологической борьбы, а также может играть эффективную роль в программах комплексного управления.

Научные статьи, журналы, авторы, подписчики, издатели

 
 
Как крупный международный издатель академических и исследовательских журналов, Science Alert публикует и разрабатывает игры в партнерстве с самыми престижные научные общества и издательства. Наша цель заключается в проведении высококачественных исследований в максимально широком зрительская аудитория.
   
 
 
Мы прилагаем все усилия, чтобы поддержать исследователей которые публикуются в наших журналах.Существует огромное количество информации здесь, чтобы помочь вам опубликоваться у нас, а также ценные услуги для авторов, которые уже публиковались у нас.
   
 
 
2022 цены уже доступны. Ты может получить личную / институциональную подписку на перечисленные журналы непосредственно из Science Alert. В качестве альтернативы вы возможно, вы захотите связаться с предпочитаемым агентством по подписке.Пожалуйста, направляйте заказы, платежи и запросы в службу поддержки клиентов в службу поддержки клиентов журнала Science Alert.
   
 
 
Science Alert гордится своим тесные и прозрачные отношения с обществом. В виде некоммерческий издатель, мы стремимся к самому широкому возможное распространение материалов, которые мы публикуем, и на предоставление услуг самого высокого качества нашим издательские партнеры.
   
 
 
Здесь вы найдете ответы на наиболее часто задаваемые вопросы (FAQ), которые мы получили по электронной почте или через контактную веб-форму. В соответствии с характером вопросов мы разделили часто задаваемые вопросы на разные категории.
   
 
 
Азиатский индекс научного цитирования (ASCI) обязуется предоставлять авторитетный, надежный и значимая информация путем охвата наиболее важных и влиятельные журналы для удовлетворения потребностей глобального научное сообщество.База данных ASCI также предоставляет ссылку до полнотекстовых статей до более чем 25 000 записей с ссылка на цитируемые источники.
   
 

Оценка взаимосвязи некоторых экологических параметров и распространенности цист Giardia и Entamoeba на двух водоочистных сооружениях в провинции Эль-Менуфия, Египет

Галал, М., Осман Г., Мохамед А., Абоамер М.М., А. (2015). Оценка взаимосвязей некоторых экологических параметров и распространенности цист Giardia и Entamoeba на двух водоочистных сооружениях в провинции Эль-Менуфия, Египет. Журнал Египетского академического общества экологического развития. D, Экологические исследования , 16(1), 1-11. doi: 10.21608/jades.2015.68412

Мансур Ибрагим Галал; Гамалат Осман; Азза Мохамед; Абоамер, М.М. Абоамер, М.М. «Оценка взаимосвязи некоторых экологических параметров и распространенности цист Giardia и Entamoeba на двух водоочистных сооружениях в провинции Эль-Менуфия, Египет». Журнал Египетского академического общества экологического развития. D, Экологические исследования , 16, 1, 2015, 1-11. doi: 10.21608/jades.2015.68412

Галал, М., Осман, Г., Мохамед, А., Абоамер, М.М., А. (2015). «Оценка взаимосвязи некоторых экологических параметров и распространенности цист Giardia и Entamoeba на двух водоочистных сооружениях в провинции Эль-Менуфия, Египет», Журнал Египетского академического общества по развитию окружающей среды. D, Исследования окружающей среды , 16(1), с.1-11. doi: 10.21608/jades.2015.68412

Галал М., Осман Г., Мохамед А., Абоамер М.М., А. Оценка взаимосвязей некоторых экологических параметров и распространенности цист Giardia и Entamoeba на двух водоочистных сооружениях в провинции Эль-Менуфия, Египет. Журнал Египетского академического общества экологического развития. D, экологические исследования , 2015; 16(1): 1-11. doi: 10.21608/jades.2015.68412

Статья 1 , Том 16, Выпуск 1, 2015 г., стр. 1-11
Тип документа: Оригинал статьи
DOI: 10.21608/jades.2015.68412
Авторы
Мансур Ибрагим Галал 1 ; Гамалат Осман 1 ; Азза Мохамед 1 ; Aboamer, M.M Aboamer, M.m 2 9
1 отдел зоологии, факультет науки, меньоуфия
Это исследование было проведено на двух водоочистных сооружениях в провинции Менуфия (обычный завод Шебин-Элком и завод прямой фильтрации Кафр-Рабеа) для мониторинга качества воды (физического, химического и микробиологического) помимо распространенности цист двух кишечных паразитических простейших ( Giardia и Entamoeba spp.). Доказано, что наиболее высокие значения большинства физико-химических показателей у растений «Шебин-Элком» и «Кафр-Рабеа» отмечаются осенью и зимой на разных стадиях.
Пробы сырой воды на обоих водоочистных сооружениях дали положительный результат на общую и фекальную кишечную палочку. Последующие этапы в традиционной очистной установке Шебин-Элком были свободны как от общих, так и от фекальных кишечных палочек, в то время как образцы фильтрованной и питьевой воды установки Кафр-Рабеа показали положительные результаты для этих типов кишечной палочки.Это может быть связано с неэффективностью процесса обработки и дезинфекции с использованием хлора. Кроме того, наличие кишечной палочки в пробах на выходе может быть связано с тем, что этап песочного фильтра не удаляет патогенные организмы, или из-за нехватки хлора ниже минимального уровня. Бактерии группы кишечных палочек в распределительной системе могут быть связаны с протечками труб, клапанов, соединений и уплотнений, а также с загрязнением крана конечными потребителями.
            В водной растения Шебин-Элком цисты Giardia и Entamoeba персистировали в течение периода исследования в сырой воде и достигали максимальной плотности летом и полностью отсутствовали в пробах очищенной, фильтрованной и питьевой воды, что может быть связано с полной очисткой процесс и эффект хлорирования в процессе дезинфекции.Исследования водного завода Кафр-Рабея показали, что цист Giardia и Entamoeba сохранялись в течение всего периода исследования в образцах сырой, фильтрованной и питьевой воды и достигали максимальной плотности весной и летом. Это может быть связано с тем, что этап песочных фильтров не удаляет цисты, а также с недостаточностью процесса дезинфекции хлором.
            Наконец, существует потребность в новой технологии, более эффективной в процессе дезинфекции воды, такой как использование солнечной энергии.Предварительное исследование, проведенное после этой статьи, показало, что как солнечное излучение, так и тепло при применении метода SODIS имеют синергетический эффект при разрушении цист Giardia и Entamoeba spp.
 
Ключевые слова
экологические параметры; кисты лямблий; кисты энтамеб; водоочистные сооружения; провинция Эль-Менуфия; Египет

Статистика

Просмотр статьи: 93

БСУ элком 100

Мобильные бетонные заводы МБ-100 М — Бетонные заводы МЕКА

Мобильная система подачи заполнителя.Благодаря конструкции и конструкции мобильных бетонных заводов высота бункера заполнителя достаточно большая. Чтобы снизить стоимость строительства односторонней или двусторонней загрузочной рампы, мы разработали мобильную систему подачи заполнителя, которая позволяет легко загружать заполнители без дополнительных затрат на фундамент или рампу.

Узнать больше

Бетоносмесительный завод elkom 100

Бетонный завод, также известный как бетонный завод или бетонный завод, представляет собой оборудование, которое объединяет различные ингредиенты для получения бетона.

Узнать больше

Бетонный завод в ОАЭ — Лучшая цена и послепродажное обслуживание AIMIX

Во-первых, давайте узнаем о типах бетонных заводов в ОАЭ, чтобы вы могли решить, какой тип является вашим идеальным выбором. Список бетонных заводов. AIMIX поставляет бетонные заводы в ОАЭ, основные типы: AJ-25, AJ-35, AJ-50, AJ-75, AJ-60, AJ-90, AJ-120 и AJ …

Узнать больше

MB-100W /WS Стационарные бетонные заводы — MEKA

Чиллеры:MEKA предлагает ряд систем чиллеров для использования с бетонными заводами.Посетите страницу продукта чиллеров для получения дополнительной информации. Посетите страницу продукта чиллеров для получения дополнительной информации. Весовые бункеры для льда: МЕКА предлагает бункеры для взвешивания льда для реализации льда при производстве бетона в очень жарких условиях.

Узнать больше

HYDROMIX / SAMI TECNO 3-100 Бетонный завод | Утраназз

Описание. Бетонный завод Tecno 3-100 от Utranazz не имеет себе равных среди своих конкурентов. Завод по производству сухого бетона полностью транспортабельный, полностью автоматизированный, имеет собственные гидравлические разгрузочные опоры и способен производить до 100 м3 в час (теоретическая).Компактная и простая в использовании конструкция этого бетонного завода обеспечивает его запуск и работу всего за …

Узнать больше

Бетонные заводы | SIMEM

Simem является эталонной компанией по производству бетонных заводов, поскольку благодаря широкому ассортименту продукции она отвечает потребностям каждого клиента. Многолетний опыт в сочетании с сильными технологическими инновациями позволяют продукции Simem удовлетворять потребности заводов по производству …

Узнать больше

Мобильный бетонный завод ELKON Mobile Master-100 Lion/Lion+

ELKON Mobile Master-100 LION Мобильный бетонный завод оснащен 3000/2000 л.двухвальный смеситель производит 2 м³ в каждой партии и достигает производительности 90 м³/ч вибробетона, тогда как мобильный бетонный завод ELKON Mobile Master-100 LION+ оснащен 3750/2500 л. двухвальный смеситель и достигает производительности 100 м³/ч вибрированного бетона.

Узнать больше

Оценка затрат на установку бетонного завода с

Чтобы установить завод RMC в проекте, необходимо провести технико-экономический анализ и найти преимущества установки завода RMC.Для одного из моих проектов я сделал расчет стоимости установки нового бетонного завода производительностью 100 кубометров в сутки.

Узнать больше

ELKON Бетонные заводы и бетоносмесительные установки

В 2001 году компания Elkon произвела полностью автоматический мобильный бетонный завод ELKON MOBILE MASTER-100, который является первым мобильным бетонным заводом в Турции, и экспортировала его в Мезамет, Франция. Эти исследования были усовершенствованы, и в 2002 году компания Elkon начала производство мобильной бетонной установки другой модели ELKON MOBILE MASTER-60.

Узнать больше

Новый компактный мобильный бетонный завод Rapid Launch

Этот новый мобильный бетонный завод оснащен популярным двухвальным бетоносмесителем Rapid объемом 3 м3 и способен достигать фактической рабочей производительности до 100 м3 в …

Узнать больше

Мобильный бетонный завод PROMAX PROMAX M100

Новый Мобильный бетонный завод PROMAX PROMAX M100 (100м3/ч) объявление о продаже бетонного завода из Голландии. Бетонный завод.Бетоносмесительный завод. Цена: цена по запросу. Год выпуска: 2020. Наработка: 100 ч

Подробнее

Дозирование, смешивание, транспортировка и погрузка бетона

Дозирование, смешивание, транспортировка и погрузка бетона. Рис. 10-3. Центральное перемешивание в стационарном смесителе типа опрокидывающегося барабана с подачей автобетоносмесителем, работающим на скорости перемешивания. (69926) Рис. 10-4. (вверху) Самосвалы без перемешивания используются с центральными бетонными заводами для коротких и быстрых перевозок бетона. Продается бетонный завод 100м3/ч, год выпуска — 2020.Новые и подержанные бетонные заводы на Truck1.

Узнать больше

Бетонные заводы б/у | Fesco Direct LLC Milwaukee

Бывшие в употреблении бетонные заводы Наш текущий ассортимент бывших в употреблении заводов по производству готовых смесей и сборных железобетонных изделий доступен для покупки. Если ниже нет списков, возможно, они все еще доступны, и у нас просто еще не было возможности обновить веб-сайт.

Узнать больше

Мобильный бетонный завод UMC 100 – Бетонные заводы Умман

Поскольку все части завода сконструированы для размещения на основной раме, их можно транспортировать с помощью одного тягача.Мобильные бетонные заводы UMMAN являются наиболее предпочтительным типом порта благодаря своей мобильности, быстрой установке и простоте использования на небольших площадях, высокой производительности и качеству.

Узнать больше

Гены, индуцированные дефицитом серы, влияют на накопление и состав белка в семенах при недостатке сульфата | Физиология растений

Аннотация

Белки SDI1 и SDI2, индуцированные дефицитом серы, играют фундаментальную роль в гомеостазе серы в условиях отсутствия сульфатов (-S), подавляя глюкозинолаты.Здесь мы определили, что помимо регуляции глюкозинолата под действием -S, SDI1 подавляет другой пул серы, богатые S запасные белки 2S семян в семенах Arabidopsis ( Arabidopsis thaliana ). Мы определили, что MYB28 напрямую регулирует запасные белки семян 2S, связываясь с промотором At2S 4. Мы также показали, что SDI1 подавляет запасные белки семян 2S, образуя тройной белковый комплекс с MYB28 и MYC2, другим фактором транскрипции, участвующим в регуляции запасных белков семян.Эти результаты имеют важное значение для понимания реакции растений на дефицит серы.

Введение

Запасные белки семян (SSP) считаются важным источником азота, углерода и серы во время прорастания семян, и их количество зависит от наличия питательных веществ в почве (Higashi et al., 2006). В семенах арабидопсиса существует два основных типа запасных белков: 12S-глобулины или круциферины (растворимые в солевом растворе) и 2S-альбумины или арабидины (водорастворимые; Shewry et al., 1995). SSP разных растений демонстрируют общее поведение в ответ на дефицит серы (-S). Белки, богатые серой, например, 12S-глобулины и 2S-альбумины арабидопсиса или 11S-глобулины (глицинин) сои, снижаются (Hirai et al., 1995; Higashi et al., 2006), а SSP с низким содержанием серы, такие как β-конглицинин (7S-глобулин) сои накапливается (Hirai et al., 1995). Благодаря этому механизму растения могут поддерживать источники азота для своего роста в виде белков семян даже в условиях дефицита серы (Higashi et al., 2006). До сих пор очень мало исследований изучали регуляцию SSP в ответ на -S, а лежащий в основе молекулярный механизм, участвующий в запуске дифференцированного белкового состава в семенах, плохо изучен. Сообщалось, что регуляция SSP происходит на транскрипционном и посттрансляционном уровнях при -S. Сообщалось, что ген, кодирующий β-субъединицу β-конглицинина, активируется на уровне транскрипции (Hirai et al., 1995, 2003; Kim et al., 1999). В то же время применение O -ацетилсерина (OAS), непосредственного предшественника синтеза цистеина, к незрелым семядолям сои привело к модели накопления SSP, сходной с наблюдаемой при дефиците серы (Kim et al., 1999; Хираи и др., 2003). Поэтому OAS считается регулятором экспрессии гена SSP (Hirai et al., 2003). Дефицит серы индуцирует ( SDI ) генов, SDI1 и SDI2 , давно идентифицированных как гены, реагирующие на OAS (Hubberten et al., 2012; Aarabi et al., 2015), и играют ключевую роль в подавлении S-богатых вторичных метаболитов, глюкозинолатов (GSL), в побегах и корнях арабидопсиса посредством взаимодействия с MYB28 в ядре (Aarabi et al., 2016).

Здесь мы демонстрируем, что SDI1 , который также сильно экспрессируется в семенах при дефиците серы (-S), играет дополнительную роль в модулировании профиля SSP в пользу S-бедных белков посредством взаимодействия с транскрипционными факторами MYC2 (TFs). ), о котором известно, что он участвует в этом процессе (Gao et al., 2016), и MYB28, продемонстрированный здесь. Таким образом, в семенах SDI1 координированно подавляет два основных богатых серой пула пути ассимиляции серы и метаболизма в условиях низкого содержания сульфата: GSL и SSP, богатые серой.Метаболомные данные также показывают отчетливые метаболические изменения в семенах при воздействии SDI , включая аминокислоты, органические кислоты и сахара, имитирующие реакцию, наблюдаемую при -S, подтверждая дополнительные специфические роли SDI при депривации S (Никифорова и др., 2005; Bonnot). и др., 2020). Кроме того, профили вторичных метаболитов трансгенных семян SDI выявили существенные изменения в синаповых эфирах, причем некоторые из них, как известно, обладают антипитательными свойствами в семенах Brassica napus , предназначенных для кормления животных и питания человека (Milkowski and Strack, 2010).Результаты этого исследования проливают свет на расшифровку молекулярного механизма, стимулирующего изменение состава белка и метаболома семян, и могут быть использованы в будущих исследованиях для улучшения питательных свойств зерна сельскохозяйственных культур.

Результаты

Экспрессия SDI в семенах арабидопсиса

Для анализа функции SDI и мониторинга ее экспрессии в семенах мы экстрагировали РНК из семян дикого типа (WT) на шести стадиях развития: 9-й день после цветения (DAF), представляющий стадию поздних семядолей (COT), 11-й и 13-й DAF. , представляющие зрелую зеленую (MG) стадию, 18 DAF, представляющие пост-MG (PMG) стадию, и 21 DAF и сухие семена, представляющие период высыхания.Количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (RT-qPCR) анализ экспрессии генов SDI показал, что транскриптов SDI1 и SDI2 увеличивались линейно во время созревания семян, достигали максимальных уровней экспрессии на 18 DAF и начинали снижаться после начала высыхание семян (рис. 1А). Аналогичным образом, ранее опубликованные данные микрочипов продемонстрировали пик накопления транскриптов SDI1 в начале созревания семян, в частности, в периферических (PEN), халазальных (CZE) и микропилярных (MCE) субрегионах эндосперма (дополнительный рисунок S1). ; Бельмонте и др., 2013). Предыдущие исследования показали, что -S индуцирует экспрессию SDI1 и SDI2 в развивающихся семенах арабидопсиса (Higashi et al., 2006). SDI1 в большей степени (т.е. 80-кратное увеличение) реагирует на серное голодание, чем SDI2 (т.е. 20-кратное увеличение; рис. 1B). Эти результаты предполагают, что белки SDI могут иметь функцию на поздней стадии развития семян и что при -S SDI индуцируются (Higashi et al., 2006) независимо от контроля развития.Вышеупомянутые данные экспрессии как на стадии нормального развития семян, так и при -S продемонстрировали более высокие уровни экспрессии SDI1 , чем SDI2 (рис. 1), и поэтому мы стремились более конкретно изучить роль SDI1 на метаболизм семян и разработка. Для этого мы использовали линии sdi1sdi2 с двойным нокаутом (dKO) и трансгенные линии SDI1 со сверхэкспрессией (ox), созданные под контролем конститутивного промотора CaMV 35S. Сверхэкспрессия SDI1 в развивающихся семенах бычьих линий была подтверждена с помощью RT-qPCR (рис. 1C).Линии SDI1ox1 и ox2 показали 173,3- и 206,2-кратное увеличение экспрессии SDI1 соответственно при 11 DAF в развивающихся семенах по сравнению с WT (рис. 1C). Шестинедельные растения SDI1ox , выращенные в условиях короткого или длинного дня, демонстрировали более короткие стебли соцветий, чем у WT, в то время как dKO не демонстрировали каких-либо фенотипов роста (рис. 1D).

Рисунок 1

Экспрессия SDI в семенах арабидопсиса и морфологический фенотип трансгенных линий.A, Относительная экспрессия SDI1 и SDI2 в семенах арабидопсиса на разных стадиях развития семян, определенная с помощью qRT-PCR. Звездочки демонстрируют значительные изменения по сравнению со значениями при 9 DAF (тест t ; P <0,05). Три биологические повторности и две технические повторности использовали на 9 и 13 DAF, а две биологические и две технические повторности использовали на стадиях 11, 18, 21 DAF и сухого посева. B, уровни транскриптов SDI1 и SDI2 в семенах WT Arabidopsis, выращенных в условиях +S (1.5 мМ сульфат) и –S (30 мкМ сульфат). График изображен на основе данных микрочипа от Higashi et al. (2006), основанный на одной биологической повторности. C, Уровни транскрипта SDI1 в семенах арабидопсиса линий WT и SDI1ox , количественно определенные при 11 DAF. D, фенотип роста трансгенных линий SDI , выращенных в условиях длинного дня в течение 6 недель. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение в (A) и (C).

Рисунок 1

Экспрессия SDI в семенах арабидопсиса и морфологический фенотип трансгенных линий.A, Относительная экспрессия SDI1 и SDI2 в семенах арабидопсиса на разных стадиях развития семян, определенная с помощью qRT-PCR. Звездочки демонстрируют значительные изменения по сравнению со значениями при 9 DAF (тест t ; P <0,05). Три биологические повторности и две технические повторности использовали на 9 и 13 DAF, а две биологические и две технические повторности использовали на стадиях 11, 18, 21 DAF и сухого посева. B, уровни транскриптов SDI1 и SDI2 в семенах WT Arabidopsis, выращенных в условиях +S (1.5 мМ сульфат) и –S (30 мкМ сульфат). График изображен на основе данных микрочипа от Higashi et al. (2006), основанный на одной биологической повторности. C, Уровни транскрипта SDI1 в семенах арабидопсиса линий WT и SDI1ox , количественно определенные при 11 DAF. D, фенотип роста трансгенных линий SDI , выращенных в условиях длинного дня в течение 6 недель. Столбики погрешностей указывают стандартное отклонение в (A) и (C).

Профилирование транскриптов развивающихся трансгенных семян

SDI указывает на роль SDI в модуляции генов, кодирующих SSP

Чтобы оценить, влияет ли избыточная экспрессия или нокаут SDI на глобальную транскрипцию, транскриптомы развивающихся семян трансгенных линий SDI определяли с помощью RNA-seq.Библиотеки были созданы из тотальных РНК, экстрагированных из зеленых развивающихся семян линий WT, SDI1ox и dKO в возрасте 9 DAF. Мы исследовали дифференциально экспрессируемые гены (DEG) между генотипами с помощью DESeq2. Хотя биологические повторы показали ассоциацию и сгруппированы вместе в анализе основных компонентов (PCA), генотипы не показали чрезвычайно четкого разделения (рис. 2А). Точно так же образцы тепловых карт продемонстрировали высокое сходство между генотипами, несмотря на то, что биологические реплики каждого генотипа сгруппированы вместе (рис. 2B).Это привело к тому, что между трансгенными линиями и WT было лишь небольшое количество дифференциально экспрессируемых генов, что отражено на соответствующих графиках MA (дополнительная фигура S2). Среди 229 значительно усиленных генов в линии SDI1ox по сравнению с WT (более чем в 1,5 раза, частота ложных открытий [FDR] <0,05) 141 ген экспрессировался по-разному по сравнению с dKO, что выявило значительное обогащение генов (GO) для ответов на абиотические и биотические стимулы, гормоны, организация и биогенез клеточной стенки, а также активность карбоксипептидазы серинового типа (рис. 2С).Несколько генов, кодирующих сериновые карбоксипептидазы (SCPL) ферменты (SCPL) ферментов (SCPL), были одними из значительно расширенных генов в семянах SDI1OX , в том числе SCPL8 , 10 , 11 , 13 , 39 и 51 (дополнительный Набор данных 1). Было обнаружено, что среди этих генов SCPL8 (также аннотированный как SINAPOYLGLUCOSE 1 , SNG1 ; At2g22990) отвечает за кодирование фермента синапоил-Glc:малатсинапоилтрансферазы (SMT), который катализирует превращение полисинапоил-GGLUCOSE. -малат (SinM) (Fraser et al., 2007). Также было показано, что SMT катализирует образование 1,2-дисинапоил-Glc вместе с SCPL13 (At2g22980; Fraser et al., 2007). Сообщалось, что SCPL10 (At2g23000) кодирует синапоил-Glc:антоцианин синапоилтрансферазу, которая представляет собой фермент, синтезирующий синапоилированные антоцианы у арабидопсиса (Fraser et al., 2007). Эти данные свидетельствуют о специфической функции SDI1 в метаболизме эфира синаповой кислоты в семенах арабидопсиса.

Рисунок 2

Дифференциальные эффекты сверхэкспрессии SDI1 и нокаута sdi1sdi2 на исходный транскриптом в 9 DAF.А, график PCA объясняет дисперсию нормализованного количества прочтений из трех библиотек биологических образцов, SDI1ox , dKO и WT при 9 DAF по оси PC1 или X и по оси PC2 или Y . B, Иерархическая кластеризация тепловой карты расстояний между образцами демонстрирует сходства и различия между образцами. Диаграммы Венна генов со значительным повышением и понижением экспрессии в семенах линий ox и dKO по сравнению с WT, изображенные красным (C) и синим (D) соответственно (выборка 1.5-кратный порог, FDR <0,05) и термины GO, обогащенные для SDI1ox -специфических генов с повышающей/понижающей регуляцией. Профиль транскриптов генов, кодирующих 2S-SSP, изображен на (E) и (F) и количественно определен с помощью РНК-секвенирования и qRT-PCR соответственно. Данные в F представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для шести повторов (три биологических, два технических). Звездочки демонстрируют значительные изменения, t тест, P < 0,05. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение.

Рисунок 2

Дифференциальные эффекты сверхэкспрессии SDI1 и нокаута sdi1sdi2 на исходный транскриптом в 9 DAF.А, график PCA объясняет дисперсию нормализованного количества прочтений из трех библиотек биологических образцов, SDI1ox , dKO и WT при 9 DAF по оси PC1 или X и по оси PC2 или Y . B, Иерархическая кластеризация тепловой карты расстояний между образцами демонстрирует сходства и различия между образцами. Диаграммы Венна генов со значительным повышением и понижением экспрессии в семенах линий ox и dKO по сравнению с WT, изображенные красным (C) и синим (D) соответственно (выборка 1.5-кратный порог, FDR <0,05) и термины GO, обогащенные для SDI1ox -специфических генов с повышающей/понижающей регуляцией. Профиль транскриптов генов, кодирующих 2S-SSP, изображен на (E) и (F) и количественно определен с помощью РНК-секвенирования и qRT-PCR соответственно. Данные в F представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для шести повторов (три биологических, два технических). Звездочки демонстрируют значительные изменения, t тест, P < 0,05. Столбики погрешностей указывают на стандартное отклонение.

Обогащение GO 57 SDI1 -специфических подавленных генов продемонстрировало обогащение для активности резервуара питательных веществ, включая те, которые ответственны за синтез 2S SSP, At2S2 ( SESA2 ), At2S4 ( SESA4) ( SESA5 ) и активность UTP: глюкозо-1-фосфат уридилилтрансферазы, включая те, которые отвечают за метаболический процесс уридиндифосфата (UDP)-глюкозы, UGP1 и UGP3 (рис. 2D; дополнительный набор данных 1).Среди генов 2S At2S4 продемонстрировал наиболее выраженное снижение экспрессии (примерно в пять раз), а транскрипты At2S2 и At2S5 были снижены примерно в три и два раза в семенах SDI1ox соответственно (рис. 2E; Дополнительная таблица S1). Экспрессия At2S5 также была значительно усилена в семенах dKO по сравнению с WT (рис. 2E; дополнительная таблица S1).

В совокупности данные расшифровки показывают, что возмущение SDI в семенах модулирует экспрессию некоторых генов, участвующих в специфических метаболических путях, включая эфиры синаповой кислоты, происходящие из шикиматного/фенилпропаноидного пути, и 2S-богатые SSP.

Чтобы подтвердить наблюдаемые DEG, участвующие в синтезе SSP, мы количественно определили уровни экспрессии выбранных генов, участвующих в накоплении белка семян, с помощью RT-qPCR, включая At2S1 At2S5 и At12S1 At12S4 , кодирующие 2S и 12S SSP, соответственно, и те, которые кодируют ключевые TF, участвующие в созревании семян и регуляции синтеза SSP, включая LEC1 , LEC2 , ABI3 , FUS3 и bZIP25 (дополнительная таблица 2) .RT-qPCR продемонстрировала высокую связь с данными секвенирования РНК (дополнительная таблица S2 и дополнительная фигура S3), а гены, кодирующие белки 2S, At2S2 , At2S4 и At2S5 , были значительно подавлены в SDI1ox и не значительные изменения могут наблюдаться в экспрессии других генов, ответственных за регуляцию или синтез SSP (рис. 2F; дополнительная таблица S2).

Для дальнейшего подтверждения наблюдаемых фенотипов транскриптов мы включили два других момента времени развития семян для анализа транскриптов, включая 11 DAF и 21 DAF, и исследовали две независимые линии для каждого генотипа.Подобно наблюдаемому фенотипу в 9 DAF, RT-qPCR показала, что среди генов, кодирующих 2S, At2S4 и At2S5 были значительно подавлены в линиях SDI1ox как в 11, так и в 21 DAF, а At2S2 был значительно снижен. понижен на уровне 11 DAF. Напротив, линии dKO показали значительную активацию уровней экспрессии At2S2 , At2S3, At2S4 и At2S5 (рис. 3A; дополнительная таблица S3). Среди этих генов At2S3 показали наименьшее изменение, а At2S4 и At2S5 пострадали больше всего (рис. 3A; дополнительная таблица S3).Интересно, что некоторые из генов, кодирующих SSP, регулировались по-разному по сравнению с тем, что было показано выше; Вопреки снижению экспрессии AT2S2 , 3 , 4 и 5 , и 5 в SDI1OX Линии, AT2S1 и AT12S1 , 12S2 , и 12S4 были значительно расширены в SDI1ox линиях в 11 и 21 DAF, сопровождающееся подавлением At12S4 в линиях dKO в 21 DAF (рис. 3A; дополнительная таблица S3).Кроме того, ни один из ТФ, регулирующих гены, кодирующие SSP, не регулировался по-разному между линиями SDI1ox и dKO, например, уровень экспрессии LEC1 был значительно увеличен в ~10 и ~5 раз как в линиях SDI1ox1, так и в линиях и dKO2. , соответственно, в 21 DAF (рис. 3B; дополнительная таблица S3). Аналогичная картина экспрессии наблюдалась для bZIP25 (рис. 3B; дополнительная таблица S3). Это наблюдение указывает на сложную связь между генами SDI и TF, регулирующими SSP.Однако исследование паттернов экспрессии генов SDI и TF, регулирующих SSP на разных стадиях развития в семенах WT, продемонстрировало антагонистическую связь между ними (дополнительная фигура S4).

Рисунок 3

Уровни экспрессии белка семян и генов, связанных с ассимиляцией S, в 11 и 21 DAF. Исследована относительная экспрессия генов, кодирующих белки 2S и 12S (A), ТФ, регулирующий экспрессию SSP (B), и выбор генов, участвующих в ассимиляции сульфатов и синтезе Cys (C), на двух стадиях развития, 11 и 21 DAF. с помощью qRT-PCR в семенах WT и трансгенных линиях.Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для четырех повторов (два биологических, два технических). Звездочки демонстрируют значительные изменения, t тест, P < 0,05.

Рисунок 3

Уровни экспрессии белка семян и генов, связанных с ассимиляцией S, в 11 и 21 DAF. Исследована относительная экспрессия генов, кодирующих белки 2S и 12S (A), ТФ, регулирующий экспрессию SSP (B), и выбор генов, участвующих в ассимиляции сульфатов и синтезе Cys (C), на двух стадиях развития, 11 и 21 DAF. с помощью qRT-PCR в семенах WT и трансгенных линиях.Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение для четырех повторов (два биологических, два технических). Звездочки демонстрируют значительные изменения, t тест, P < 0,05.

Поскольку гены SDI являются маркерными генами -S (Aarabi et al., 2016), уровни экспрессии некоторых генов, участвующих в ассимиляции серы и биосинтезе цистеина, таких как ATPS1 , APR3 и SERAT1; 1 были исследованы, чтобы проверить, был ли изменен транскриптом пути ассимиляции серы.Линия SDI1ox2 показала увеличение экспрессии APR3 , ATPS1 и SERAT1;1 при 11 DAF соответственно в 8,5, 1,7 и 2 раза, а линии dKO показали значительное снижение экспрессии APR3 Уровни экспрессии APR3 и ATPS1 в 21 DAF (рис. 3C). APR3 также значительно активировался в SDI1ox2 через 21 DAF (рис. 3C). Повышающая регуляция APR3 и ATPS1 в линиях SDI1ox указывала на реакцию, напоминающую реакцию ограничения серы, особенно в линии SDI1ox2 .

Влияние возмущения SDI1 на метаболом семян

Чтобы оценить влияние SDI на первичный метаболом семян, мы провели высокопроизводительный анализ газовой хроматографии-масс-спектроскопии (МС) на развивающихся и сухих семенах на 11 и 21 DAF. Метаболомика выявила серьезные изменения в уровнях аминокислот, сахаров и органических кислот как на стадии развития, так и на стадии сухих семян (рис. 4А). Мы смогли количественно определить уровни OAS в семенах только в 11 и 21 DAF, продемонстрировав, что линий SDI1ox накапливали примерно четырех-пятикратные уровни OAS (рис. 4A).OAS также накапливался в линиях dKO при 21 DAF, но в меньшей степени, чем в линиях быков (рис. 4А). Линии dKO также продемонстрировали снижение уровней Cys и Met в 11 и 21 DAF соответственно. Напротив, бычьи линии показали небольшое увеличение уровней Met в 11 DAF (рис. 4A). В сухих семенах производная Cys аминокислота, цистатионин, который является промежуточным продуктом в синтезе Met, сильно увеличилась в SDI1ox2 примерно в 18 раз, тогда как уровни Cys и Met остались почти неизменными (дополнительные наборы данных 2).Данные показали, что многие другие свободные аминокислоты значительно накапливались у линий быков, в том числе глутаминовая кислота (Glu), аспарагин (Asn) и орнитин у обеих линий быков на всех трех стадиях развития (рис. 4А). Глутамин (Gln), лейцин (Leu), изолейцин (Ileu) и гистидин значительно накапливались в обеих бычьих линиях в 11 и 21 DAF (рис. 4A). В отличие от бычьих линий, линии dKO не показали резких изменений в уровне аминокислот, и только уровни аспарагиновой кислоты (Asp) были незначительно, а уровни Asn сильно снизились на 21 DAF (рис. 4A).Кроме того, уровни экспрессии генов, участвующих в ассимиляции нитратов, NITRATE REDUCTASE1 и 2 ( NIA1 и NIA2 ) в линии SDI1ox в 9 DAF также были повышены (Mohn et al., 2019; Supplemental Data Set). 1). Это может указывать на более высокое восстановление нитратов до аммония, тем самым включение большего количества азота в аминокислоты. Кроме того, измерения ионов выявили значительное накопление нитратов в сухих семенах линий SDI1ox , в то время как сульфат оставался неизменным (дополнительный набор данных 2 и дополнительный рисунок S5).

Рисунок 4

Метаболитные профили развивающихся и сухих семян трансгенных линий SDI . A, тепловая карта показывает коэффициенты кратности изменения первичных метаболитов в семенах трансгенных линий SDI по сравнению с WT, количественно определенными в развивающихся семенах на 11 и 21 DAF и в сухих семенах. Статистически значимые различия (тест t ; P ≤ 0,05, n = 6) между WT и трансгенными линиями показаны звездочками на тепловой карте.Содержание GSL (B) и эфиры синаповой кислоты (C) в сухих семенах WT и трансгенных линиях SDI , количественное определение с помощью ЖХ-МС. На столбцах B и C и столбцах погрешностей показаны средние значения и стандартное отклонение для четырех повторов. ** P < 0,01, * P < 0,05 указывают на значительные различия, обнаруженные с помощью теста t между WT и трансгенными линиями.

Рисунок 4

Метаболитные профили развивающихся и сухих семян трансгенных линий SDI . A, тепловая карта показывает кратность изменения первичных метаболитов в семенах трансгенных линий SDI по сравнению с WT, количественно определенными в развивающихся семенах на 11 и 21 DAF и в сухих семенах.Статистически значимые различия (тест t ; P ≤ 0,05, n = 6) между WT и трансгенными линиями показаны звездочками на тепловой карте. Содержание GSL (B) и эфиры синаповой кислоты (C) в сухих семенах WT и трансгенных линиях SDI , количественное определение с помощью ЖХ-МС. На столбцах B и C и столбцах погрешностей показаны средние значения и стандартное отклонение для четырех повторов. ** P < 0,01, * P < 0,05 указывают на значительные различия, обнаруженные с помощью теста t между WT и трансгенными линиями.

SDI1ox также демонстрировали тенденцию к увеличению уровня органических кислот, из них содержание фумаровой кислоты увеличивалось примерно в 2,5 раза у SDI1ox1 при 21 DAF, а у SDI1ox2 сильно накапливалось во всех стадиях развития. этапы (рис. 4А). Почти аналогичное поведение можно было наблюдать для никотиновой кислоты, яблочной кислоты и лимонной кислоты (рис. 4А). И наоборот, линии dKO на 21 DAF показали значительно сниженные уровни фумаровой и лимонной кислоты (рис. 4А).В отличие от аминокислот и органических кислот, сахара показали общее снижение в сухих семенах бычьих линий. За исключением неизменных уровней сахарозы и фруктозы, уровни глюкозы, 1,6-ангидроглюкозы, мальтозы и гентиобиозы были заметно снижены в сухих семенах бычьих линий (дополнительный набор данных 2). Точно так же глюкоза была значительно снижена в ox2 в 11 и 21 DAF и накапливалась в линиях dKO в 21 DAF (рис. 4А). Глюкозо-1-фосфат также был заметно снижен у бычьих линий, но накапливался у линий dKO в 11 и 21 DAF (рис. 4А).

Кроме того, для оценки влияния ИПД на метаболом вторичных соединений в семенах арабидопсиса мы провели высокопроизводительную жидкостную хроматографию с тандемной масс-спектрометрией (Tohge and Fernie, 2010; Salem et al., 2016, 2017) на сухих семенах трансгенные линии SDI . Мы наблюдали метаболические изменения уровней GSL, аналогичные наблюдаемым в листьях и корнях трансгенных линий SDI (Aarabi et al., 2016). Большинство метилсульфинилалкил-GSL и некоторые метилтиоалкил-GSL значительно накапливались в dKO1 и dKO2 и восстанавливались в линиях быков SDI1 (рис. 4B; дополнительный набор данных 2).Индолил-3-метил GSL также был значительно снижен в линиях быков SDI1 (рис. 4B). Помимо наблюдаемых изменений уровней GSL, возмущение SDI повлияло на другие вторичные метаболиты в семенах, включая некоторые флавонолы и эфиры синаповой кислоты (рис. 4C; дополнительный набор данных 2). Обе линии SDI1ox показали повышенный уровень кверцетин-3-O-(2″-O-рамнозил)-глюкозид-7-O-рамнозида (Q3GR7R; дополнительный набор данных 2). Среди эфиров синаповой кислоты, в отличие от сильного снижения двух синапоил-O-глюкозидов (SinG1, синапоил-) и синапоил-O-диглюкозидов (SinGG) в линиях SDI1ox SinM сильно увеличился на 6.от 5 до 23 раз (рис. 4C). Напротив, линии dKO показали сильное снижение SinM (рис. 4C). Сильное избыточное накопление SinM за счет синапоил-глюкозидов в сухих семенах линий ox согласуется с наблюдаемой повышающей регуляцией уровня экспрессии SNG1 , кодирующего фермент, ответственный за превращение синапоил-Glc в SinM. Кроме того, общее содержание белка и липидный профиль сухих семян не показали значительных изменений между трансгенными линиями и контролями (дополнительная фигура S5).Эти данные показывают, что возмущение SDI оказывает значительное влияние на первичный и вторичный метаболом семян арабидопсиса, но не на количество белка и состав липидов.

SDI подавляет накопление 2S SSP

Принимая во внимание тот факт, что -S влияет на белковый профиль резервов белка семян (Naito et al., 1994; Hirai et al., 1995) и что SDI сильно индуцируется в развивающихся семенах арабидопсиса при стрессе S (Higashi et al., 2006), мы стремились исследовать влияние эктопической экспрессии SDI и нокаута гена SDI на белковый профиль зрелых семян арабидопсиса. Анализ электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) показал, что семена линий dKO содержали несколько повышенное количество 2S альбуминов (белок, богатый серой), и, наоборот, линий SDI1ox содержали заметно сниженные уровни 2S альбуминов по сравнению с к WT (рис. 5A). Количественная оценка плотности белковых полос показала, что линий SDI1ox содержали около 30% содержания альбумина WT 2S (дополнительная фигура S6).Сильная тенденция к накоплению белков 12S и 2S также может наблюдаться в линиях SDI1ox и dKO соответственно (дополнительная фигура S6). Чтобы точно определить количество SSP в трансгенных линиях и подтвердить наблюдаемый фенотип, мы затем провели масс-спектрометрический (МС) анализ белковых экстрактов зрелых семян. Результаты, полученные из МС, соответствовали результатам SDS-PAGE, особенно в отношении линии быков SDI1 , поскольку две изоформы 2S альбуминов, SESA4 и SESA5, были сильно подавлены в обеих линиях быков SDI1 (рис. 5C).Уровни SESA4 и SESA5 в семенах бычьих линий составляли только около 13–15% и 13–14% уровней WT соответственно. Хотя в линиях dKO можно наблюдать тенденцию к увеличению уровней этих пептидов, увеличение является статистически значимым только для SESA4 в линии dKO2 (рис. 5C). Кроме того, уровни SESA2 и SESA3 были значительно снижены у SDI1ox 2 по сравнению с WT (рис. 5C). Более того, β-субъединицы 12S-глобулинов, по-видимому, были увеличены в линиях быков SDI1 по данным анализа SDS-PAGE, что также отражалось в данных экспрессии (рис. 3А).Однако анализ МС не показал значительных изменений в уровнях обнаруженных белков 12S, включая белки At12S2 и At12S4 (рис. 5C). At12S3 оказался значительно сниженным в линии SDI1 ox2, что соответствовало сниженному уровню экспрессии At12S3 в 21 DAF (рис. 3A и 5C). В целом профили белков и транскриптов SSP были положительно связаны.

Рисунок 5

Анализ белка семян трансгенных линий SDI и MYB .A, Белковые профили сухих семян трансгенных линий SDI . Белковые экстракты готовили из двух биологических и двух технических повторностей для каждой трансгенной линии. Экстракты общего белка из сухих зрелых семян готовили, как описано в разделе «Материалы и методы», и белки разделяли с помощью SDS-PAGE. α- и β-субъединицы 12S круциферинов и 2S альбуминов обозначены линиями на правой стороне геля. B, Белковые профили сухих семян трансгенных линий MYB .Были приготовлены белковые экстракты и проведен SDS-PAGE, как описано в предварительно окрашенном белковом стандарте SeeBlue Plus2 (технологии Life), который использовался в качестве стандарта молекулярной массы в A и B. C, профиль SSP в сухих семенах SDI. трансгенных линий, количественно оцененных методом МС. Значения показывают логарифмическое двойное отношение (LFC) нормализованного содержания белка между трансгенными линиями SDI и WT. Статистический анализ был проведен с корректировкой множественных тестов Бенджамини и Хохберга и значительными изменениями (P-adj ≤ 0.05, четыре биологические повторности) выделены в таблице желтым цветом.

Рисунок 5

Анализ белка семян трансгенных линий SDI и MYB . A, Белковые профили сухих семян трансгенных линий SDI . Белковые экстракты готовили из двух биологических и двух технических повторностей для каждой трансгенной линии. Экстракты общего белка из сухих зрелых семян готовили, как описано в разделе «Материалы и методы», и белки разделяли с помощью SDS-PAGE.α- и β-субъединицы 12S круциферинов и 2S альбуминов обозначены линиями на правой стороне геля. B, Белковые профили сухих семян трансгенных линий MYB . Были приготовлены белковые экстракты и проведен SDS-PAGE, как описано в предварительно окрашенном белковом стандарте SeeBlue Plus2 (технологии Life), который использовался в качестве стандарта молекулярной массы в A и B. C, профиль SSP в сухих семенах SDI. трансгенных линий, количественно оцененных методом МС. Значения показывают логарифмическое двойное отношение (LFC) нормализованного содержания белка между трансгенными линиями SDI и WT.Статистический анализ был выполнен с корректировкой множественного тестирования Бенджамини и Хохберга, и значительные изменения (P-adj ≤ 0,05, четыре биологических повтора) выделены желтым цветом в таблице.

Функция MYB28, MYB29 и MYB76 в накоплении белка семян

Анализ

SDS-PAGE белковых экстрактов трансгенных линий MYB показал, что накопление 2S-белков ведет себя противоположным образом по сравнению с трансгенными линиями SDI , поскольку линии MYB28 , MYB29 и MYB36 9031 OX заметно содержат более высокие уровни альбуминов 2S и, наоборот, нокаутные линии myb28 и myb2829 содержали пониженные уровни альбуминов 2S по сравнению с WT (рис. 5B).SDS-PAGE также показал тенденцию к увеличению уровней β-субъединиц 12S-глобулинов в нокаутных линиях myb . Из этих данных мы можем сделать вывод, что MYB28, MYB29 и MYB76 могут иметь избыточные функции в регуляции накопления белка семян в семенах арабидопсиса, и, таким образом, мы предполагаем, что подавление SSP посредством SDI может быть вызвано его ингибирующей функцией на MYB28. Фактор транскрипции, как мы идентифицировали в предыдущих исследованиях, ингибирует взаимодействие SDI с MYB28 (Aarabi et al., 2016). Ингибирующий эффект SDI на MYB28 также отражался в данных транскриптов, поскольку линий SDI1ox показали сильное снижение транскриптов MYB28 в 11 DAF, а dKO1 показал повышенную экспрессию MYB28 в 21DAF; однако его едва можно было обнаружить у других генотипов на этой стадии развития (рис. 3В). Стоит отметить, что взаимодействие SDI1 со всеми тремя ТФ MYB было подтверждено анализом Y2H в наших предыдущих исследованиях (Aarabi et al., 2016). Кроме того, недавние исследования показали, что MYC2, MYC3 и MYC4 положительно регулируют накопление SSP арабидопсиса (Gao et al., 2016). Тройные мутанты myc234 содержали пониженное количество альбуминов 2S по сравнению с WT, аналогичным таковому у myb28myb29 dKO (Gao et al., 2016). Кроме того, MYC2, MYC3 и MYC4 арабидопсиса являются дополнительными регуляторами биосинтеза GSL посредством прямого взаимодействия (через домен JID) с ТФ MYB и, следовательно, регуляции алифатических GSL посредством позитивного взаимодействия с MYB28, MYB29 и MYB76 (Schweizer et al., 2013). Таким образом, мы предполагаем, что MYC и MYB TF могут действовать синергетически в семенах, чтобы контролировать SSP, и что SDI могут взаимодействовать в тройном белковом комплексе с MYC и MYB TF, чтобы оказывать его ингибирующее действие. Чтобы проверить эту гипотезу, мы воспользовались подходом Y3H с использованием вектора pBridge, который позволил исследовать образование тройного белкового комплекса с помощью SDI1, MYB28 и MYC2. Во-первых, мы снова подтвердили физическое взаимодействие между MYB28 и MYC2 в системе Y2H (рис. 6A, ряд 3).Затем, когда мы использовали SDI1BD в качестве приманки и MYC2AD в качестве добычи, мы могли видеть, что SDI1 напрямую не взаимодействует с MYC2 (рис. 6A, ряд 4). Однако, когда мы использовали MYB28 или SDI1 в качестве мостиковых белков в комбинациях Y3H, мы могли видеть активацию репортера в обоих случаях (рис. 6А, ряды 1 и 2), что позволяет сделать вывод, что SDI1 образует тройной белковый комплекс с MYB28. и МИК2. Кроме того, мы заключаем, что MYB28 действует как «мост», взаимодействуя с SDI1 и MYC2, которые напрямую не взаимодействуют друг с другом, а SDI1 не мешает взаимодействию MYB28-MYC2.Затем, чтобы доказать роль MYB в регуляции генов, кодирующих SSP, мы провели анализ сдвига электрофоретической подвижности (EMSA) с использованием белка MYB28 и флуоресцентно меченных (5′-DY-682) и немеченых ДНК-зондов (конкурент) к промоторной последовательности. At2S4 (рисунок 6B; дополнительный рисунок S7). Для разработки зондов мы провели анализ обогащения мотивов во всех промоторах SESA с использованием программы MEME (Bailey et al., 2009). Из трех обогащенных мотивов мы выбрали мотив 2, расположенный в промоторе SESA4 , для создания зонда, поскольку он содержит предполагаемый сайт связывания MYB R2R3 (MybBS; Schweizer et al., 2013) и граничит с основным сайтом связывания MYC2, известным как G-box (CACGTG), и вариантом G-box (G-boxV; CATGTG) в пределах 94 и 46 п.н., кроме MybBS, соответственно (дополнительная фигура S7, A и B; Schweizer et al., 2013).

Рисунок 6

Исследование образования тройного белкового комплекса среди SDI1, MYB28 и MYC2 и активности связывания MYB28 с промотором SESA4. A, Панели 1 и 2 демонстрируют положительное взаимодействие между SDI1, MYB28 и MYC2 при скрининге Y3H.На панели 1 SDI1BD-MYB28 экспрессировал SDI1, слитый с DNA-BD (ДНК-связывающий домен Gal4), а также MYB28, экспрессирующийся в качестве мостикового белка. На панели 2 MYB28BD-SDI экспрессировал MYB28, слитый с доменом ДНК-BD, и SDI1 в качестве мостикового белка. MYC2AD использовали в качестве жертвы, экспрессирующей MYC2, слитый с активационным доменом (AD). Котрансформации пустого вектора-жертвы (AD-EV) с приманками pBridge выполняли в качестве отрицательного контроля на последних двух панелях. Анализы Y2H проводили, как на панелях 3 и 4, путем совместной трансформации соответствующих конструкций жертвы и приманки, выращенных на чашках для отсева с X-α-Gal (X) и ауреобазидином (A) или без них.Двойные (DDO), тройные (TDO) и четверные (QDO) среды отсева описаны в разделе «Материалы и методы». B, EMSA показывает связывающую активность MYB28 с промотором At2S4 или SESA4 . Последовательности зондов были сконструированы, как описано в разделе «Материалы и методы». Наличие или отсутствие реагентов на каждой дорожке обозначено (+) и (-) соответственно. Добавление немеченого конкурента в молярном избытке снижало интенсивность сигнала. Однако нам не удалось подтвердить специфичность взаимодействия между выбранным цис-элементом MYB в промоторе SESA4 и MYB28, поскольку добавление мутантной версии немеченого зонда снижало интенсивность связывания.

Рисунок 6

Исследование образования тройного белкового комплекса между SDI1, MYB28 и MYC2 и активности связывания MYB28 с промотором SESA4. A, Панели 1 и 2 демонстрируют положительное взаимодействие между SDI1, MYB28 и MYC2 при скрининге Y3H. На панели 1 SDI1BD-MYB28 экспрессировал SDI1, слитый с DNA-BD (ДНК-связывающий домен Gal4), а также MYB28, экспрессирующийся в качестве мостикового белка. На панели 2 MYB28BD-SDI экспрессировал MYB28, слитый с доменом ДНК-BD, и SDI1 в качестве мостикового белка.MYC2AD использовали в качестве жертвы, экспрессирующей MYC2, слитый с активационным доменом (AD). Котрансформации пустого вектора-жертвы (AD-EV) с приманками pBridge выполняли в качестве отрицательного контроля на последних двух панелях. Анализы Y2H проводили, как на панелях 3 и 4, путем совместной трансформации соответствующих конструкций жертвы и приманки, выращенных на чашках для отсева с X-α-Gal (X) и ауреобазидином (A) или без них. Двойные (DDO), тройные (TDO) и четверные (QDO) среды отсева описаны в разделе «Материалы и методы».B, EMSA показывает связывающую активность MYB28 с промотором At2S4 или SESA4 . Последовательности зондов были сконструированы, как описано в разделе «Материалы и методы». Наличие или отсутствие реагентов на каждой дорожке обозначено (+) и (-) соответственно. Добавление немеченого конкурента в молярном избытке снижало интенсивность сигнала. Однако нам не удалось подтвердить специфичность взаимодействия между выбранным цис-элементом MYB в промоторе SESA4 и MYB28, поскольку добавление мутантной версии немеченого зонда снижало интенсивность связывания.

Центральный цис-элемент MYB был обнаружен в мотиве 2 во всех промоторных последовательностях белков SESA (рис. 7C). Анализ EMSA выявил прямое взаимодействие MYB28 с меченым зондом (промотор At2S4 ), подтверждая прямую регуляцию At2S4 через MYB28 (фиг. 6B).

Рисунок 7

Модель представляет функции SDI в семенах. При дефиците серы (-S) повышается уровень ОАС, что индуцирует экспрессию SDI1 .SDI1 образует тройной белковый комплекс с MYB28 и MYC2 и ингибирует их с помощью неизвестных механизмов. Таким образом, SSP-богатые 2S, такие как At2S4 (SESA4), сокращаются, и накапливаются SSP-бедные 12S. Сверхэкспрессия SDI также приводит к накоплению пулов свободных аминокислот, что в целом увеличивает отношение N к S. Обычный фенотип наблюдается при дефиците серы в семенах. Синие и красные стрелки указывают на понижающую и повышающую регуляцию соответственно.

Рисунок 7

Модель представляет функции SDI в семенах.При дефиците серы (-S) повышается уровень ОАС, что индуцирует экспрессию SDI1 . SDI1 образует тройной белковый комплекс с MYB28 и MYC2 и ингибирует их с помощью неизвестных механизмов. Таким образом, SSP-богатые 2S, такие как At2S4 (SESA4), сокращаются, и накапливаются SSP-бедные 12S. Сверхэкспрессия SDI также приводит к накоплению пулов свободных аминокислот, что в целом увеличивает отношение N к S. Обычный фенотип наблюдается при дефиците серы в семенах. Синие и красные стрелки указывают на понижающую и повышающую регуляцию соответственно.

Обсуждение

Наши данные показывают, что белок SDI1, помимо ранее выявленного подавления GSL в листьях и корнях арабидопсиса при -S, оказывает значительное влияние на метаболизм семян и белковый состав (Aarabi et al., 2016). SDI1, который индуцируется в условиях ограничения по сере в семенах, не только ингибирует накопление GSL, но также регулирует накопление богатых серой альбуминов 2S, в основном путем подавления SESA4 и SESA5, хотя он также умеренно подавляет SESA2, SESA3 и At12S3.Это наблюдение согласуется с исследованием Higashi et al. (2006), в котором количество белков At12S3 и, в большей степени, SESA заметно снижалось в ответ на серный стресс (Higashi et al., 2006). Хотя мы не смогли количественно оценить накопление белков 12S и 2S с помощью МС, вероятно, из-за насыщения этих распространенных белков, SDS-PAGE ясно показал, что сверхэкспрессия SDI1 приводит к накоплению 12S, тогда как sdi1sdi2 dKO приводит к накоплению 2S белки.Точно так же следует отметить, что подавление 2S-альбуминов, известных как S-богатые белки, и накопление 12S-глобулинов, известных как S-бедные белки, являются общими фенотипами, которые происходят при серном голодании у многих видов растений, таких как арабидопсис и пшеница. ( Triticum aestivum ; Castle and Randall, 1987; Naito et al., 1994; Hirai et al., 1995; Higashi et al., 2006; Bonnot et al., 2017), и SDI, по-видимому, играет фундаментальную роль в запуске этот фенотип ответа на серу как на уровне транскриптов, так и на уровне белка.

OAS, кроме того, считается регулятором экспрессии гена SSP (Hirai et al., 2003). Применение OAS к незрелым семядолям сои привело к модели накопления SSP, аналогичной наблюдаемой при дефиците серы (Kim et al., 1999; Hirai et al., 2003), что подтверждает мнение о том, что SDI является основным определяющим фактором в Зависимое от OAS подавление S-богатых белков в семенах. Кроме того, активация генов ассимиляции сульфатов в развивающихся семенах линий SDI1ox в 11 и 21 DAF имитирует ответы транскриптов, наблюдаемые при дефиците серы в развивающихся зернах пшеницы и листьях арабидопсиса (Никифорова и др., 2003; Бонно и др., 2020). Данные о метаболитах также показывают, что сверхэкспрессия SDI приводит к усилению OAS в семенах, вызывая, таким образом, -S-ответ. С другой стороны, линии нокаута также демонстрировали более высокие уровни OAS. Предположительно, ранняя повышенная продукция белков, богатых серой, может вызвать более высокий спрос на аминокислоты, богатые серой, что может имитировать ситуацию сульфатного голодания, приводящую к более высокому синтезу ОАС за счет нарушения регуляции системы ассимиляции серы (Aarabi et al. ., 2020). Активация свободных аминокислот в семенах бычьих линий также может быть результатом их меньшего включения в S-богатые белки, включая как S-содержащие аминокислоты, Cys и Met, так и N-богатые аминокислоты Asn и Gln. Этот фенотип согласуется с ранее сообщавшимся увеличенным пулом аминокислот в зернах пшеницы, лишенных серы, в которых было обнаружено, что SDI2 сильно активируется во время наполнения зерна при дефиците S, и был предложен в качестве предполагаемого регулятора накопления белка в зерне. при -S (Бонно и др., 2020). Бонно и др. (2020) рассматривают повышенное соотношение азота и серы в пшенице как регулирующий механизм для регулирования запасов аминокислот и белка в зерне в ответ на -S (Bonnot et al., 2017, 2020). Наши данные показывают, что SDI1 и, скорее всего, SDI2 играют существенную роль в контроле этого ответа у семян, поскольку сверхэкспрессия SDI1 приводит к усилению генов, участвующих в ассимиляции нитратов и, следовательно, к накоплению свободных аминокислот, в то время как богатые S белки и другие пулы серы, такие как по мере уменьшения GSL (рис. 7).

Мы определили, что SDI подавляет S-богатые белки в семенах, образуя тройной белковый комплекс с MYB28, идентифицированным регулятором белков семян в этом исследовании, и MYC2, другим регулятором белков семян (Gao et al., 2016), что приводит к к синергическому подавлению генов 2S и, таким образом, белков SESA. Следовательно, SDI1, MYB28 и MYC2, по-видимому, играют дополнительные роли в накоплении белка семян, помимо регуляции GSL в вегетативных тканях. MYB28 напрямую взаимодействует с MYC2 (Schweizer et al., 2013), и мы продемонстрировали, что он функционирует как мостиковый белок между SDI1 и MYC2; однако SDI1 не мешает взаимодействию MYB28-MYC2. Кроме того, ранее было показано, что образование комплекса SDI1-MYB28 не влияет на связывание MYB28 с ДНК; однако он ингибировал опосредованную MYB28 трансактивацию промоторов генов биосинтеза алифатических GSL (Aarabi et al., 2016). Кроме того, известно, что SDI1 отрицательно влияет на экспрессию MYB28 (Aarabi et al., 2016), что также нашло отражение в данных транскриптов семян в этом исследовании. Похоже, что существует антагонистическая связь между экспрессией SDI1 и MYB28 на разных стадиях развития семян (дополнительная фигура S4). В целом механизм репрессии SDI1 в комплексе MYB28-MYC2 требует дальнейшего изучения. Стерическое затруднение механизма транскрипции за счет образования комплекса SDI1-MYB28 было предложено в качестве механизма блокирования функции MYB28 как активатора (Aarabi et al., 2016). Альтернативно, SDI1 может действовать как ко-репрессор, связываясь и активируя неизвестный репрессор MYB28 или MYC2 . MYC2 является многофункциональным белком и основным регулятором опосредованной jasmonate (JA) передачи сигналов, участвующих в регуляции множественных путей в зависимости от его партнеров по взаимодействию, таким образом, интегрируя различные сигналы окружающей среды (Kazan and Manners, 2013). MYC2 не функционирует как активатор без партнера по взаимодействию (Pireyre and Burow, 2015; Frerigmann, 2016).Известно, что несколько белков-репрессоров и медиаторов взаимодействуют с MYC2 в большом белковом комплексе, такие как белки Jasmonate ZIM-domain (JAZ), новый Interactor of JAZ (NINJA), TOPLESS (TPL) и TPR (связанный с TPL), блокируя активация MYC2 в JA-опосредованной передаче сигналов, участвующих в накоплении GSL (Pireyre and Burow, 2015; Frerigmann, 2016). Участвует ли SDI1 в качестве посредника в таком белковом комплексе, оказывая ингибирующее действие на комплекс MYB28-MYC2 в накоплении белка семян, еще предстоит выяснить.

Учитывая, что sdi1sdi2 dKO демонстрируют нормальный физиологический рост и их центральный метаболизм не изменяется, потеря функции SDI представляет собой подход к повышению уровня незаменимых аминокислот в SSP у сельскохозяйственных культур. Сравнение белковой последовательности белков SSP показывает, что белки 2S содержат более высокие уровни серы, чем белки 12S, поскольку среднее содержание цистеина и метионина на 100 аминокислот в белках 2S примерно в три-четыре раза выше, чем в белках 12S (дополнительная таблица). С4).Среди белков 12S At12S3 содержал более высокие уровни цистеина и метионина на 100 аминокислот по сравнению с другими белками 12S (дополнительная таблица S4). Похоже, что SDI1 специфически подавляет эти богатые S белки, включая SESA2, SESA3, SESA4, SESA5 и At12S3, на более поздней фазе созревания семян. Эти белки также содержат более высокие уровни лизина (Lys) на 100 аминокислот по сравнению с другими белками (дополнительная таблица S4). Учитывая, что Met и Lys являются наиболее дефицитными незаменимыми аминокислотами в злаках и бобовых (Galili and Amir, 2013), sdi1sdi2 dKO представляет собой подходящего кандидата для обогащения этих незаменимых питательных соединений в семенах культур.

Мы также продемонстрировали, что SDI оказывает существенное влияние на вторичные метаболиты семян. SDI не только подавляет S-богатые GSL в семенах, но и пулы синаповых эфиров подвергаются изменению. Однако сообщалось, что наиболее распространенными эфирами синаповой кислоты в запасах семян арабидопсиса являются синапоилхолин. Наши данные показывают, что SinM, другой ветвящийся метаболит синапоил-Glc, подвергается изменению за счет сверхэкспрессии SDI1 как на уровне транскрипта, так и на уровне метаболита. Это может быть специфической реакцией семян арабидопсиса на дефицит серы, о которой мы сообщаем здесь впервые.Сверхэкспрессия SDI1 приводит к усилению SNG1 , кодирующего фермент SMT, который катализирует превращение синапоил-Glc в SinM (Fraser et al., 2007), что приводит к сильному избыточному накоплению синпоилмалата за счет синапоил-Glc в сухом семена линии SDI1ox . Учитывая, что эфиры синаповой кислоты образуются в результате шикимат/фенилпропаноидного пути, который начинается с фенилаланина, общего предшественника биосинтеза GSL индола, в дальнейших исследованиях необходимо оценить, является ли активация SinM в линиях быков косвенным эффектом подавления GSL, который известны как конкурирующие пути с фенилпропаноидами (Kim et al., 2015), либо является прямым следствием SDI. Известно, что синапоил-холин и другие эфиры синаповой кислоты придают антипитательные свойства белковой композиции семян масличной культуры B. napus (рапс; канола), что затрудняет их использование в качестве корма для животных и питания человека (Milkowski and Strack, 2010). Поэтому для повышения питательной ценности семян B. napus было предпринято несколько попыток получить культуры с низким содержанием эфира синаповой кислоты (Milkowski and Strack, 2010).Здесь мы предлагаем SDI в качестве кандидата для достижения этой цели.

Полногеномный анализ трансгенных линий SDI показывает, что SDI оказывает умеренное влияние на глобальную экспрессию генов в семенах, скорее, некоторые гены, участвующие в определенных метаболических путях, подвергаются изменению. За исключением генов, которые участвуют в синтезе SSP и SinM, упомянутых выше, некоторые гены, участвующие в метаболизме углеводов, такие как UGP1 и UGP3 , были сильно подавлены у бычьих линий. генов UGP кодируют пирофосфорилазу УДФ-глюкозы, продуцирующую УДФ-глюкозу (Meng et al., 2009), и, в частности, UGP3 является первым коммитированным ферментом для биосинтеза сульфолипидов (Okazaki et al., 2009). Кроме того, было обнаружено, что UGP3 является единственным геном сульфолипидного пути, который подавляется в ответ на кратковременное голодание по сере (Okazaki et al., 2009). Это наблюдение может указывать на роль SDI в регуляции еще одного пула серы в растениях при дефиците S, а именно сульфолипидов.

Выборка семян WT в зависимости от времени от начала наполнения семян до периода высыхания показала, что пик транскриптов SDI1 и SDI2 приходится на позднюю фазу созревания (18 DAF).С другой стороны, временной анализ SDS-PAGE на зерне пшеницы, лишенном серы, показал, что дефицит серы провоцирует синтез запасного белка в более ранние моменты времени развития семян по сравнению с контрольным зерном (Castle and Randall, 1987). Таким образом, было высказано предположение, что дефицит S модулирует время переключения в развитии пшеницы, укорачивая раннюю фазу клеточного деления и активируя фазы наполнения и созревания семян (Castle and Randall, 1987). Это отчасти объясняет причину высокой экспрессии генов SDI только на поздней стадии созревания семян.Следовательно, в семенах должен существовать регуляторный механизм для точной настройки экспрессии SDI в процессе развития семян. В условиях высокой потребности в синтезе S-богатых белков, т.е. в период от раннего до среднего периода созревания семян при благоприятных условиях питания SDI подавляется с помощью неизвестных механизмов, а также в условиях ограничения S или когда пулы серы были израсходованы для SSP, богатых S, например, от позднего до постсозревания фаза SDI активируется, чтобы сбалансировать соотношение S-богатых и S-бедных белков и, возможно, завершает период целлюляризации.Кроме того, обычной реакцией на -S является увеличение отношения корней к побегам, поскольку рост побегов замедляется в большей степени, чем рост корней (Hawkesford et al., 2012; Gruber et al., 2013; Forieri et al., 2017; Aarabi et al., 2020; ), фенотип, который отражен в линии SDI1ox в этом исследовании. Было обнаружено, что регуляция роста Arabidopsis при -S регулируется глюкозой-мишенью передачи сигналов рапамицина (Dong et al., 2017). Вопрос о том, участвует ли SDI в этом регулирующем механизме, требует дальнейших исследований.

Материалы и методы

Растительный материал и условия роста

На фоне WT (экотип Col-0) использовали

линий Arabidopsis. Семена выращивали непосредственно на почве и подвергали стратификации в течение 1 недели при 4°С для яровизации. Затем растения переносили в стандартные тепличные условия (140 мкЕ м 2 с 1 интенсивность света, относительная влажность 40%, 24°C) с 16-/8-часовыми циклами свет/темнота (длительные -день).Развивающиеся семена в 9 DAF собирали для анализа РНК-секвенции и ОТ-количественной ПЦР. Сухие зрелые семена собирали для метаболомных и протеомных исследований. Для сбора развивающихся семян на 11 и 21 растения DAF выращивали в климатической камере с циклами свет/темнота 16 ч/8 ч, обеспечиваемыми интенсивностью света 120 мкЭ м -2 с -1 и днем/ночью. температура 20/16°C и относительная влажность 60/75%.

Создание линий гиперэкспрессии

Полноразмерная кодирующая последовательность кДНК SDI1 была амплифицирована с праймерами, перечисленными в дополнительной таблице S5, и клонирована в вектор pENTR/D-TOPO (Invitrogen).Затем входные клоны субклонировали в вектор Gateway pK7WG2 (Karimi et al., 2002; Invitrogen; дополнительная таблица S5). Конструкции трансформировали в штамм A. tumefaciens GV3101 с помощью электропорации (модифицировано из Mattanovich et al., 1989), а затем в цветочные бутоны Arabidopsis (Col-0) методом погружения цветков (Clough and Bent, 1998). Гомозиготные трансгенные растения Т3 отбирали на среде, содержащей сульфат канамицина (50 мг·л 1 ). Семена T4 использовались для метаболомных и протеомных анализов.Получение конструкций сверхэкспрессии 35S:MYB28 , 35S:MYB29 и 35S:MYB76 было описано ранее (Sonderby et al., 2007).

Выделение гомозиготных нокаутных линий и создание линий dKO

нокаутных линий Т-ДНК, SALK_145035 ( sdi1-1 ), SALK_099766 ( sdi1-2 ) и SALK_0

( sdi2-1 ), которые находятся на фоне Col-0, были идентифицированы из Salk T- Линии ДНК (Alonso, 2003) по анализу базы данных SiGnAL (http://www.signal.salk.edu/cgi-bin/tdnaexpress). Гомозиготные линии были получены с помощью ПЦР-скрининга геномной ДНК с использованием ген-специфических прямых и обратных праймеров, за которыми следовал праймер левой границы Т-ДНК и ген-специфические прямые или обратные праймеры (дополнительная таблица S6). Для получения sdi1sdi2 dKO гомозиготные одиночные нокаутные линии sdi1-1 и sdi1-2 были скрещены с единственной нокаутной линией sdi2-1 и двумя независимыми линиями dKO (dKO1 для sdi1-3 1-9sdi32 и dKO2 для sdi1-2sdi2-1 ) были установлены и отобраны для дальнейшего анализа.Генерация инсерционных мутантов Т-ДНК в At5g61420 (линия SALK_136312, myb28-1 ), At5g07690 (SM.34316 =  myb29-2 ) и dKO myb28-1myb29-2 была описана ранее ( Сондерби и др., 2007).

Выделение развивающейся семенной РНК и синтез кДНК

Чтобы собрать зеленые развивающиеся семена арабидопсиса для выделения РНК, цветочные почки помечали лентой после начала цветения, а семена отделяли от стручков в разные дни, что соответствует примерно 9, 11, 13, 18 и 21 DAF.Суммарную РНК экстрагировали с использованием набора Spectrum Plant Total RNA Kit (SIGMA). Остаточная ДНК была удалена с помощью набора для расщепления ДНКазы на колонке (SIGMA). Два микрограмма тотальной РНК, обработанной ДНКазой, свободной от РНКазы (Qiagen), использовали в качестве матрицы для синтеза кДНК первой цепи с использованием набора для синтеза кДНК Maxima (Thermo Scientific) в соответствии с инструкциями производителя.

ОТ-КПЦР

RT-qPCR проводили с использованием 0,5 мкл сгенерированной кДНК (~50 нг мкл 1 ), 2 мкл каждого ген-специфического праймера (0.5 мкМ) и 2,5 мкл 2X SYBR Select Master Mix (Applied Biosystems). ПЦР проводили с помощью системы быстрой ПЦР в реальном времени ABI PRISM 7900HT (Applied Biosystems). Условия термоциклирования ПЦР выполнялись в соответствии с инструкциями производителя SYBR Green. Для анализа данных использовали программное обеспечение SDS 2.2.1 (Applied Biosystems). Относительные значения экспрессии представлены как 2 ΔCT ; ΔCT = CT (исследуемый ген) – CT (UBQ10 или AT3g12210). Используемые последовательности праймеров перечислены в дополнительной таблице S7.

Анализ секвенирования РНК и анализ данных

Девять библиотек РНК, включая обогащенные полиА, были созданы из экстрактов тотальной РНК и секвенированы на Illumina HiSeq3000 в 2 × 150 п.н. (чтение парных концов) в Центре генома Макса Планка в Кельне (MP-GC). Данные секвенирования были загружены на веб-платформу Galaxy (Afgan et al., 2018), а сервер GREEN HUB Galaxy, принадлежащий консорциуму TRR175 The Green Hub, использовался для анализа данных. Полученные чтения были картированы с геномом арабидопсиса с помощью STAR (Dobin et al., 2012), а количество прочтений на аннотированный ген подсчитывали с помощью featureCounts (Liao et al., 2013). Дифференциальный анализ экспрессии генов был выполнен с использованием DESeq2 против соответствующего WT в 9 DAF (Love et al., 2014). Изображенные графики MA на дополнительном рисунке S2 и график PCA на рисунке 2A были получены как результаты анализа DESeq2. g:Profiler использовался для поиска биологических процессов и молекулярных функций, которые чрезмерно обогащены результатами дифференциального анализа (Raudvere et al., 2019).

Метаболитный анализ

Метод экстракции метил-трет-бутиловым эфиром (МТБЭ) использовали для измерения ионов, первичных и вторичных метаболитов и липидов, как описано в Salem et al. (2016, 2017). Аликвоты (по 10 мг каждая) замороженных гомогенизированных сухих или развивающихся семян полностью суспендировали в 1 мл предварительно охлажденной (-20°C) смеси метанол:МТБЭ (1:3 [об:об]) и инкубировали в течение 10 мин на орбитальном шейкере при 4°С. Добавляли смесь 500 мкл вода:метанол (1:3 [об:об]) и хорошо перемешивали с образцами.После центрифугирования в течение 10 минут (13 000 г ) верхнюю органическую фазу (500 мкл) концентрировали для измерения липидов и, наконец, повторно суспендировали в 600 мкл ацетонитрила (ACN): изопропанол (7:3 [об:об]). . Объем 2 мкл на образец вводили в систему UPLC/ESI-MS (система UPLC Waters Acquity, соединенная с масс-спектрометром высокого разрешения Exactive [Thermo-Fisher]; Salem et al., 2016, 2017). Вторичные метаболиты измеряли, как описано в Tohge et al. (2016) и Тоге и Ферни (2010).Аликвоты (150 мкл) низкополярных фаз сушили в скоростном вакуумном концентраторе, ресуспендировали в 100 мкл 80% (об./об.) метанола, содержащего изовитексин в качестве внутреннего стандарта. Для анализа вводили 5 мкл для анализа LC/ESI-MS с использованием системы ESI-MS с линейной ионной ловушкой Finnigan Ltq (Thermo Finnigan), соединенной с системой ВЭЖХ Surveyor (Thermo Fisher; Tohge and Fernie, 2010). Хроматограммы регистрировали и обрабатывали с помощью Xcalibur (версия 2.10, Thermo-Fisher), ToxID (версия 2.1.1, Thermo-Fisher) или программного обеспечения Refiner MS (версия 6.0, Gene-Data, Базель, Швейцария; Хаммель и др., 2011). Площади пиков нормализовали на основе свежего веса образца и внутреннего стандарта. Первичные метаболиты измеряли согласно Lisec et al. (2006) и массовые метки, идентифицированные в соответствии с базой данных Golm Metabolome (Hummel et al., 2011).

Экстракция белка семян и SDS-PAGE

Белки экстрагировали из зрелых семян арабидопсиса, как описано Naito et al. (1988). Пять мг сухих семян гомогенизировали в 100 мкл экстракционного буфера (100 мМ Трис-HCl, рН 8, 0.5% (вес/объем) SDS и 10% (вес/объем) глицерина) и кипятили в течение 3 мин при 99°С. Образцы центрифугировали при 15000 g в течение 5 мин при 4°С. Супернатант брали как экстрагированный белок. Концентрацию белка определяли методом Бредфорда (Bradford, 1976) с использованием альбумина бычьей сыворотки (БСА) в качестве стандарта. Десять микрограммов белка разделяли с помощью SDS-PAGE в 10% (мас./об.) полиакриламиде. В качестве стандарта молекулярной массы использовали предварительно окрашенный белковый стандарт SeeBlue Plus2 (Life Technologies). Белки визуализировали с помощью окрашивания кумасси бриллиантом (Neuhoff et al., 1985).

EMSA

Очистку белка MYB28 проводили следующим образом. Рекомбинантная конструкция шлюза pDEST 24 (Invitrogen), содержащая C-концевой GST-меченый AtMYB28 (дополнительная таблица S5), была введена в клетки Escherichia coli rosetta (DE3). Положительный трансформант культивировали в среде LB, содержащей ампициллин (100 мкг·мл 1 ) и хлорамфеникол (50 мкг·мл 1 ) в течение ночи (37°C).В общей сложности 150 мкл ночной предварительной культуры повторно культивировали в 3 мл свежей среды LB в вышеупомянутых условиях в течение 2 часов. К культуре добавляли 1 мМ ИПТГ для индукции экспрессии AtMYB28 и инкубировали при 30°С в течение 5–6 ч. Индуцированную культуру собирали и осаждали микроцентрифугированием. Осадок клеток ресуспендировали в 150 мкл экстракционного буфера, содержащего 20 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), 1 мМ фенилметилсульфонилфторида, 1 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты, 0,5 М хлорида натрия, ингибитора белка.Разрушение клеток проводили с помощью лизоцима и ультразвука соответственно. Экстракты сырья, супернатанта и осадка собирали независимо. Фракции супернатантов использовали для проведения EMSA. Кроме того, супернатанты E. coli , трансформированные клонирующим вектором входа, использовали в качестве отрицательного контроля связывания. Это использовали для обеспечения отсутствия взаимодействия между GST, конъюгированным с MYB28, и ДНК-зондом. Наличие полноразмерного белка MYB28 было подтверждено с помощью сигнала вестерн-блоттинга через канал 800 нм Odyssey 9120 (LI-COR) при предсказанной молекулярной массе с конъюгированным с флуорохромом вторичным антителом (GST-метка моноклонального антитела, Novagen) против GST, который присоединен к первичному антителу (антитело к DCX, полученное у козы, Sigma; дополнительная фигура S8).Двухцепочечные зонды были созданы путем отжига 10 мкМ смысловых и антисмысловых олигонуклеотидов, меченых и немеченых, при 95 ° C в течение 5 мин в буфере TE и снижении температуры до 4 ° C на -1 ° C / цикл в течение 20 с. через термоциклер T100TM (Bio-rad). Затем меченые зонды разводили в соотношении 1:200 по сравнению с немечеными зондами. Реакцию EMSA проводили с помощью набора Odyssey Infrared EMSA (LI-COR). Взаимодействия связывания между TF-кандидатом и небольшой промоторной областью определяли с помощью ДНК-зонда с флуоресцентной меткой (5′-DY-682), производимого Eurofins Genomics.Электрофорез проводили с 6% гелем для замедления ДНК (Invitrogen) и проводили в буфере ТВЕ при 4°С. Конкуренты и мутированные конкуренты, которые представляют собой олигонуклеотиды без зонда, использовали для подтверждения этих связываний. Последовательности зондов перечислены в дополнительной таблице S8.

Жидкостная хроматография и МС-анализ белков семян

Расщепленные пептиды подкисляли до pH < 3,0 с помощью 10% (об./об.) трифторуксусной кислоты (TFA). Смесь пептидов очищали и обессоливали на колонках C18 SEP-Pak (Tecknokroma), которые присоединяли к вакуумному коллектору QIAvac 24 Plus (QIAGEN).Колонки уравновешивали 1 мл 100% (об./об.) метанола, один раз 1 мл 80% (об./об.) ACN и дважды 1 мл 0,1% (об./об.) ТФУ. Пептиды наносили на колонку C18 и медленно пропускали через нее. Колонку дважды промывали 1 мл 0,1% (об./об.) ТФУ. Пептиды элюировали 800 мкл 60% ACN (об./об.), 0,1% (об./об.) ТФУ, сушили в скоростном вакуумном концентраторе и хранили при -80° до МС-анализа. Пептиды ресуспендировали в 30 мкл буфера для ресуспендирования (5% [об./об.] ACN, 2% [об./об.] TFA). Измерения проводили на Q Exactive HF, соединенном с ВЭЖХ Easy nLC1000 (Thermo Scientific).Восемь микролитров образцов загружали в колонку с обращенной фазой Acclaim PepMap RSLC (внутренний диаметр 75 мкм, длина 15 см, размер гранул 2 мкм [Thermo Scientific]) при скорости потока 0,8 мкл мин 90 356–90 357 1 в буфере, состоящем из 3% (об./об.) ACN, 0,5% (об./об.) уксусной кислоты. Элюцию пептида облегчало увеличение градиента ACN с 3% до 30% (об./об.) в течение 100 мин, с 30% до 40% в течение следующих 10 мин и с 40% до 80% в течение последних 5 мин при потоке. скорость 0,3 мкл·мин 1 .Затем колонку промывали 80% (об./об.) ACN в течение 5 мин при скорости потока 0,5 мкл·мин 1 . Ионы пептидов были обнаружены при полном сканировании с отношением массы к заряду от 150 до 1600 при разрешении 60000. Сканирование тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) выполняли для 15 пептидов с самым высоким сигналом МС при разрешении 15 000 (мишень AGC 2e5, отношение ширины изоляции к заряду 3 , m/z , относительная энергия столкновения 30%). ). Пептиды, для которых были записаны спектры МС/МС, исключали из дальнейшего сканирования МС/МС на 20 с.Количественный анализ измерений МС/МС проводили с помощью программного обеспечения для жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ/МС) Progenesis (Nonlinear Dynamics). Выбор эталонного цикла, выравнивание и выделение пиков выполнялись автоматически. Спектры для каждого пика сигнала MS1 были экспортированы в Mascot (Matrix Science). Параметры поиска талисмана были установлены следующим образом: аннотация генома Arabidopsis TAIR10 (Garcia-Hernandez et al., 2002), потребность в триптических концах, допускается одно пропущенное расщепление, фиксированная модификация: карбамидометилирование (цистеин), переменная модификация: окисление (метионин), пептид допуск по массе = ±10 частей на миллион, допуск МС/МС = ±0.8 Да, допустимые заряды пептидов +2 и +3. Также был проведен поиск спектров по базе данных приманок протеома арабидопсиса, и результаты были отфильтрованы, чтобы обеспечить FDR <1% на уровне белка. Кроме того, были исключены идентификации пептидов с оценкой Mascot <40. Результаты талисмана были импортированы в Progenesis QI, получена количественная информация о площади пика, а результаты экспортированы для дальнейшего анализа.

Анализы Y2H и Y3H

Y2H и Y3H проводили с использованием двухгибридной системы Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid в соответствии с инструкциями производителя (Clontech).Для Y2H в качестве приманки использовался клон SDI1-BD, описанный ранее (Aarabi et al., 2016), и спаривался с конструкцией добычи, MYC2-AD (дополнительная таблица S5). Для Y3H в векторе pBridge были созданы две комбинации конструкций (Clontech; дополнительная таблица S5). SDI1BD-MYB28 экспрессировал SDI1, слитый с DNA-BD (ДНК-связывающий домен Gal4), а также MYB28, экспрессирующийся как мостиковый белок, без какого-либо присоединения к связывающему домену или домену активации. MYB28BD-SDI экспрессировал MYB28, слитый с доменом ДНК-BD, и SDI1 в качестве мостикового белка.Эти две конструкции были совместно трансформированы с помощью MYC2AD (дополнительная таблица S5), как описано ранее (Aarabi et al., 2016). Положительно трансформированные колонии отбирали на двойных, тройных и четверных чашках для отсева как -Leu/-Met (DDO), -Leu/-Trp/-Met (TDO) и -His/-Leu/-Met/-Trp ( QDO), соответственно, с X-α-Gal (X) и ауреобазидином или без них.

Регистрационные номера

Список генов, исследованных в этом исследовании, и соответствующие инвентарные номера приведены в дополнительной таблице S7.

Дополнительные данные

Следующие материалы доступны в онлайн-версии этой статьи.

Дополнительный рисунок S1. Уровни транскрипта SDI1 (черная линия) и SDI2 (оранжевая линия) в областях и подобластях семян арабидопсиса на протяжении всего развития семян.

Дополнительный рисунок S2. Общий вид взаимосвязи между изменениями экспрессии трансгенных линий SDI и WT в 9 DAF.

Дополнительный рисунок S3. Точечная диаграмма, показывающая кратность изменения (логарифм 2) RNA-Seq по сравнению с кратностью изменения (логарифм 2) генов, определенных количественно методом RT-qPCR.

Дополнительный рисунок S4. Характер экспрессии SDI1 по сравнению с ТФ, регулирующими SSP.

Дополнительный рисунок S5. Содержание сульфатов, нитратов, общего триацилглицерина и белка в сухих семенах трансгенных линий SDI.

Дополнительный рисунок S6. Количественная оценка белковых полос SDS-PAGE.

Дополнительный рисунок S7. Анализ обогащения мотивов в промоторных последовательностях белков SESA семян.

Дополнительный рисунок S8. Вестерн-блоттинг показывает обогащение белка MYB28.

Дополнительная таблица S1. Дифференциальная экспрессия генов, кодирующих SSP, и соответствующих TF, ответственных за кодирование генов SSP, в развивающихся семенах трансгенных линий SDI, определенная количественно с помощью RNA-seq.

Дополнительная таблица S2. Дифференциальные уровни транскриптов (кратность изменения) некоторых выбранных генов в семенах трансгенных линий SDI в 9 DAF, анализ с помощью q-RT PCR. Анализ проводили с использованием трех независимых биологических повторов и двух технических повторов. Значительно отличающиеся DEG от WT (при P  < 0,05, обнаруженные с помощью t-критерия Стьюдента) выделены зеленым цветом. Пороговое значение тепловой карты было установлено в диапазоне от 0 до 10 как минимальное, обозначенное синим цветом, и 10, как максимальное изменение кратности, обозначенное красным.

Дополнительная таблица S3. Дифференциальные уровни транскриптов (кратность изменения) некоторых выбранных генов в семенах трансгенных линий SDI в 11 и 21 DAF, анализ с помощью q-RT PCR. Анализ проводили с использованием двух независимых биологических повторов и двух технических повторов. Значительно отличающиеся DEG от WT (при P  < 0,05, обнаруженные с помощью теста Стьюдента t ) выделены зеленым цветом. Пороговое значение тепловой карты было установлено в диапазоне от 0 до 10 как минимальное, обозначенное синим цветом, и 10, как максимальное изменение кратности, обозначенное красным.

Дополнительная таблица S4. Сравнение белковых последовательностей 12S и 2S SSP.

Дополнительная таблица S5. Олигонуклеотиды, используемые для конструирования векторов. Сайты узнавания ферментов рестрикции подчеркнуты.

Дополнительная таблица S6. Олигонуклеотиды, используемые для выделения линий вставки Т-ДНК.

Дополнительная таблица S7. олигонуклеотидов, использованных для анализа qRT-PCR.

Дополнительная таблица S8. олигонуклеотидов, используемых для EMSA.

Дополнительный набор данных S1. SDI-регулируемых генов в 9 DAF (стадия семядолей).

Дополнительный набор данных S2. Данные о необработанных метаболитах сухих семян трансгенных линий SDI.

Ф.А. и Р.Х. разработали исследование. Ф.А. написал рукопись при поддержке соавторов, создал трансгенные линии и конструкции, провел экстракцию метаболитов и подготовку образцов для измерения метаболитов, экстракцию РНК, RT-qPCR, скрининг Y2H и проанализировал данные.Ф.А., АРФ, Н.О. и З.Н. выполнили РНК-секвенный анализ. А.Р. выполнили EMSA и вестерн-блоттинг. RB выполнил анализ SDS-PAGE. М.Г. и А.Г. выполнили МС-анализ. С.А., Т.Т., М.В., Р.Х. и А.Р.Ф. измеренные уровни метаболитов. Ю.З. и А.Р.Ф. выполнил скрининг Y3H. М.А.С. и П.Г. проведена липидомика. Ф.Б. выполнили экстракцию семенной РНК и белка. АРФ и Р. Б. реализовал идеи. А.Р.Ф., Р.Х., З.Н. и П.Г. редактировал рукопись.

Автор несет ответственность за распространение материалов, являющихся неотъемлемой частью выводов, представленных в этой статье, в соответствии с политикой, описанной в Инструкции для авторов (https://academic.oup.com/plphys/pages/general-instructions): Файез Аараби ([email protected]).

Подтверждение

Мы благодарим Хосе М. Муйно (Университет Гумбольдта, Берлин) и Уве Олера (MDC, Берлин) за техническую поддержку и советы относительно GALAXY; Meike Burow (Копенгагенский университет) за обмен трансгенными семенами MYB.

Финансирование

Мы признательны Collaborative Research Centers, SFB (Sonderforschungsbereich, Grant TRR 175/1) за финансовую поддержку A.RF и FA, а также при поддержке Общества Макса Планка. НЕТ. и З.Н. хочу поблагодарить за поддержку командный проект рамочной программы Horizon 2020 PlantaSyst (ЕС).

Заявление о конфликте интересов . У авторов нет конфликта интересов.

Ссылки

AARABI

F

,

F

,

HUBBERTENT

H-M

,

Heyneke

E

,

Watanabe

E

M

,

Hoefgen

R

(

R

(

r

(

2015

)

Гены кластеров OAS: плотно регулируемая сеть

.

Springer

,

Cham

Cham

AARABI

F

,

KUSAJIMA

M

,

,

T

,

Konishi

T

,

Gigolashvili

T

,

Takamune

M

,

Sasazaki

Y

,

Watanabe

M

,

Nakashita

H

,

Fernie

AR

, и др. (

2016

)

Белки-репрессоры, индуцированные дефицитом серы, оптимизируют биосинтез глюкозинолатов в растениях

.

SCI ADV

2

:

1

18

AARABI

F

,

NAKE

T

,

Fernie

AR

,

Hoefgen

R

(

2020

)

Координация пулов серы при депривации сульфатов

.

Тенденции завода SCI

25

:

1227

1227

1239

AFGAN

E

,

D

,

D

,

,

B

,

Van Den Beek

M

,

Bouvier

d

,

ČECH

M

,

M

,

Chilton

J

,

Кламенты

D

,

Coraor

N

,

Grüning

BA

, et al.(

2018

)

Платформа Galaxy для доступных, воспроизводимых и совместных биомедицинских анализов: обновление 2018 г.

.

Нуклеиновые кислоты Res

46

:

W544

W544

ALONSO

ALONSO

JM

(

2003

)

Геномальный вязаный мутагенез арабидопсиса Thaliana

.

наук

301

:

1849

,

TL

,

Boden

M

,

Buske

FA

,

FRITH

M

,

грантов

CE

,

Clementi

L

,

Ren

J

,

Li

WW

,

Noble

WS

(

2009

6 2009 90ME Discovery tools 3 для поиска .

нуклеиновые кислоты RES

37

:

W202

W208

Belmonte

,

Kirkbride

RC

,

Conee

SL

,

Pelletier

JM

,

BUI

AQ

,

yeung

EC

,

Hashimoto

M

,

FEI

,

FEI

J

,

Harada

см

,

MUNOZ

MD

, et al. (

2013

)

Комплексные профили развития генной активности в регионах и субрегионах семян арабидопсиса

.

Proc Natl Acqu SCI USA

110

:

E435

E444

Bonnot

T

,

BANCEL

E

,

ALVAREZ

D

,

Davanture

M

,

Bounet

J

,

Pailloux

,

Pailloux

M

,

ZIVY

M

,

M

,

,

C

,

Martre

P

(

P

(

2017

)

Зерновые подпроотежные ответы на азот и питание серы в диплоидном пшенице монококк подвид.монококк

.

завод J

91

:

894

910

,

t

,

martre

p

,

hatte

v

,

dardevet

m

,

leroy

p

,

Bénard

C

,

C

,

Falagán

N

,

Martin-Magnette

,

M-L

,

Deborde

C

,

MOING

A

, et al.(

2020

)

Данные Omics выявили предполагаемые регуляторы белкового состава зерна однозернянки при дефиците серы

.

Practs Price

183

:

501

:

501

:

501

Bradford

Bradford

M

(

м

(

1976

)

Быстрый и чувствительный способ количественного определения количественной оценки микрограммных величин белка Принцип использования белкового красителя

.

Anal Biochem

72

:

248 92

:

248

254

254

Castle

SL

,

Randall

PJ

(

PJ

(

1987

)

Эффекты дефицита серы на синтез и накопление белков в развивающихся семена пшеницы

.

Funct Plant Boel

14

:

503

516

516

516

Clough

,

SJ

,

Bent

AF

(

AF

(

1998

)

Цветочный падение: Упрощенный метод для агробатерии, опосредованного преобразования Арабидопса талиана

.

завод J

16

:

735

735

Dobin

,

Davis

,

,

CA

,

Schlesinger

F

,

Drenkow

J

,

Zaleski

C

,

JHA

S

,

S

,

P

,

P

,

Chaisson

M

,

GINGINGERAS

TR

(

2012

)

STAR: Ultrafast Universal RNA-SEQ Выравниватель

.

биоинформатика

29

:

15

21

дон

,

Silbermann

M

,

SPEISER

A

,

FORIERI

I

,

LINGER

E

,

POSCHET

G

,

Allboje Samami

A

,

Wanatabe

M

,

STICHT

C

,

Teleman

AA

et al. (

2017

)

Доступность серы регулирует рост растений посредством передачи сигналов глюкозы-TOR

.

NAT

8

:

1174

,

,

C

,

C

,

Reichelt

M

,

GRETZ

N

,

Hawkesford

MJ

,

Malagoli

M

,

Wirtz

M

,

Hell

R

(

2017

)

Системный анализ метаболизма и транскриптома в корнях Arabidopsis thaliana при дифференциальном дефиците железа90 и ко-регуляции серы 3,90 и серы.

Растение Cell Environment

40

:

9000

107

RASASER

,

,

MG

,

Shirley

AM

,

Ralph

J

,

Schoenherr

JA

,

SINLAPADECH

T

,

T

,

T

,

,

,

MC

,

Chapple

C

(

C

(

C

(

C

(

2007

)

.

растений физиолон

144

:

1

1999

Frerigmann

H

(

2016

)

Глюкозинолатное регулирование в сложных отношениях — MYC и MYB — никто не может действовать без одного другого

.

ADV BOT RES

80

:

57

97, 57

97

97 20003

GALILI

G

,

AMIR

G

R

(

R

(

2013

)

Укрепление растений с помощью основных аминокислот Лизин и метионин для улучшения питания качество

.

завод биотехнологии j

11

:

211

211

,

C

,

qi

C

,

,

,

,

,

LI

K

,

LI

D

,

Jin

C

,

LI

Z

,

Huang

G

,

G

,

HAI

J

,

Zhang

M

,

CHEN

M

(

2016

)

MyC2, MyC3 и MyC4 Функция избыточно в накоплении запасного белка семян у Arabidopsis

.

растений физиологии Biochem

108

:

63

70

70

Marcia-Hernandez

M

,

Berardini

TZ

,

CHEN

G

,

CRIST

D

,

Doyle

A

,

Huala

E

,

E

,

Knee

E

,

Lambrecht

M

,

Miller

N

,

MULLER

LA

, et al. (

2002

)

ТАИР: источник интегрированных данных об арабидопсисе

.

Funct English Genomics

https://doi.org/10.1007/s10142-002-007/S10142-002-007-Z

GRUBER

GRUBER

BD

,

Giehl

RFH

,

Friedel

S

,

VON Wiren

N

(

2013

)

Пластичность корневой системы арабидопсиса при дефиците питательных веществ

.

растений физиол

163

:

161

179

179

M

,

HORST

M

,

,

Kichey

W

,

,

Lambers

T

,

,

H

,

Schjoerfering

J

,

Møller

I

,

Белый

P

(

2012

) Глава 6 –

Функции макроэлементов

.

в P Marschner, Ed, Marschner’s Mineral питание высших растений, ED 3, академическая пресса, Сан-Диего

, PP

135

1899

HIGASHI

Y

,

HiRai

My

,

Fujiwara

T

,

Naito

,

Naito

S

,

NOJI

M

,

M

,

Saito

K

(

2006 k

(

2006

)

Протеомический и транскрипторный анализ семян арабидопсиса: молекулярные доказательства для последовательной обработки семенных белков и его влияния при стрессовой реакции на серное питание

.

завод J

48

:

557

557

571

Hirai

My

,

Fujiwara

T

,

AWAZUHARA

M

,

KIMURA

T

,

NOJI

M

,

Saito

K

(

2003

)

Глобальное профилирование экспрессии арабидопсиса, испытывающего дефицит серы, с помощью ДНК-макрочипов выявляет роль O-ацетил-L-серина как общего регулятора экспрессии генов в ответ на питание серой

.

завод J

33

:

651

651

663

Hirai

My

,

Fujiwara

T

,

Chino

M

,

Naito

S

(

1995

)

Влияние концентрации сульфата на экспрессию гена запасного белка семян сои и его обратимость в трансгенном Arabidopsis thaliana

.

Растение ячейки физиолон

36

:

1331

1339

HUBBERTENT

,

KLIE

S

,

Caldana

C

,

degenkolbe

T

,

Willmitzer

L

,

Hoefgen

R

(

2012

)

Дополнительная роль О-ацетилсерина как независимого от статуса серы регулятора роста растений

.

завод J

70

:

666

666

Hummel

,

J

,

,

LI

Y

,

IRGANG

S

,

JUEPPNER

J

,

Giavalisco

P

(

2011

)

Ультраэффективная жидкостная хроматография и масс — спектрометрия высокого разрешения для анализа растительных липидов

.

SCI

2

:

54

54

,

,

м

,

inzé

,

inzé

d

,

d

,

(

)

(

2002

)

Gateway TM Векторы для агробатерии. трансформация

.

тенденций SCI

7

:

1

7

:

1

70003 —

195

Kazan

,

K

,

K

,

JM

(

2013

)

MyC2: Мастер в действии

.

MOL STORT

6

:

686

686

703

KIM

H

,

Hirai

My

,

Hayashi

H

,

Chino

M

,

Naito

S

,

Fujiwara

T

(

1999

)

Роль O-ацетил-l-серина в скоординированной регуляции экспрессии гена запасного белка семян сои с помощью питания серой и азотом

.

Planta

209

:

282

282

289

KIM

JI

,

WL

,

Anderson

NA

,

Chapple

C

(

2015

)

Endole биосинтез глюкозинолатов ограничивает накопление фенилпропаноидов в Arabidopsis thaliana

.

Растение ячейки

27

:

1529

1529

1546

Liao

,

Smyth

GK

,

SHI

W

(

2013

)

Featurecounts: Эффективная программа общего назначения для присвоения прочтений последовательностей геномным признакам

.

Bioinformatics

30

:

923

923

930

J

,

J

,

Schauer

N

,

KOPKA

J

,

Ullmitzer

L

,

Fernie

AR

(

2006

)

Профилирование метаболитов растений на основе газовой хроматографии и масс-спектрометрии

.

NAT Protoc

1

:

387

396

396

,

,

MI

,

Huber

W

,

Anders

S

(

2014

)

Модераторы Оценка смены и дисперсии для данных секвенирования РНК с помощью DESeq2

.

генома Biol

15

:

550

,

Rüker

F

,

Da Cämara Machado

A

,

Laimer

M

,

Regger

F

,

Steinkeliner

H

,

Himmler

G

,

Katinger

H

(

1989

)

Эффективная трансформация Agrobacterium spp. электропорацией

.

Нуклеиновые кислоты RES

17

:

6747

MENG

MENG

M

,

MUISLER

M

,

johansson

,

johansson

H

,

Harholt

J

,

Scheller

HV

,

MelleroWicz

EJ

,

Kleczkowski

LA

(

2009

)

UDP-глюкоза-пирофосфорилаза не ограничивает скорость, но необходима для Arabidopsis

.

растительных клеток физиолон

50

:

50

:

998

1011

Milkowski

C

,

RECK

D

(

2010

)

Синовые эфирные эфиры в бюстгаиретах: биохимия, молекулярная биология, эволюция и метаболическая инженерия

.

Planta

232

:

19

35

MOHN

MOHN

MA

,

Thaqi

,

,

B

,

Fischer-Schrader

K

(

2019

)

Специфический изоформ без синтеза Нитратредуктаза

Arabidopsis thaliana.

Растения (Базель, Швейцария)

8

:

67

67

Naito

S

,

Dubé

S

,

Dubé

PH

,

Beachy

RN

(

RN

(

1988

)

Дифференциальное выражение конглицинина α ‘и Гены β-субъединицы в трансгенных растениях

.

завод моли биол

11

:

109

123

Naito

,

S

,

Hirai

My

,

Chino

M

,

Komeda

Y

(

1994

)

Экспрессия гена запасного белка семян сои (glycine max [L.] Merr.) в трансгенном Arabidopsis thaliana и его ответ на пищевой стресс и мутации абсцизовой кислоты

.

растений физиол

104

:

497

503

Neuhoff

,

V

,

R

,

EIBL

H

(

гг. 1985

)

Прозрачный фон и высокочувствительный окрашивание белка с красителями Coomassie Blue в полиакриламидных гелях: систематический анализ

.

Electrophoresis

6

:

427

427

448

Nikiforova

V

,

Freitag

J

,

KEMPA

S

,

ADAMIK

M

,

HESSE

H

,

Hoefgen

R

(

2003

)

Транскриптомный анализ истощения запасов серы у Arabidopsis thaliana: переплетение путей биосинтеза обеспечивает специфичность ответа

.

завод J

33

:

633

650

650

VJ

,

Bielecka

,

,

Gakiere

,

Gakiere

B

,

KRUEGER

S

,

RUBER

J

,

Kempa

S

,

Hesse

H

,

Hoefgen

R

(

2005

)

В

Sulphur Transp Assim Plants Post Genomic Era. Документы из 6-го международного семинара на метаболизме серы растений, Chiba, Япония, 17-21 мая 2005 г. (Обратные издатели),

139

151

Okazaki

Y

,

Shimojima

M

,

Sawada

Y

,

Toyooka

K

,

K

,

Narisawa

T

,

MOCHIDA

K

,

Tanaka

H

,

Matsuda

F

,

Hirai

A

,

Hirai

МГ

и др.(

2009

)

Хлоропластная УДФ-глюкоза пирофосфорилаза из арабидопсиса является целевым ферментом для первой стадии биосинтеза сульфолипидов

.

ячеек

21

:

892

909

Pireyre

M

,

BUROW

M

(

M

(

2015

)

Регуляция факторов транскрипции MYB и BHLH: взгляд на уровень белка

.

моль завод

8

:

378

378

378

Raudvere

U

,

Kolberg

L

,

KUZMIN

I

,

ARAK

T

,

ADLER

P

,

Peterson

H

,

Vilo

J

(

2019

)

g: Profiler: веб-сервер для функционального анализа обогащения и преобразования списков генов (обновление 2019 г.)

.

нуклеиновые кислоты RES

47

:

W191

W198

Salem

,

MA

,

BERNACH

M

,

Bajdzienko

K

,

Giavalisco

P

(

2017

)

Простой метод фракционной экстракции для всестороннего анализа метаболитов, липидов и белков из одного образца

.

J Vis exp

55802

55802

Salem

MA

,

JÜPPPER

J

,

Bajdzienko

K

,

Giavalisco

P

(

2016

)

Протокол: быстрый, всеобъемлющий воспроизводимый одностадийный метод экстракции для быстрого получения полярных и семиполярных метаболитов, липидов, белков, крахмала и полимеров клеточных стенок из одного образца

.

Методы растения

12

:

45

:

45

4000

Schweizer

F

,

Fernández-Calvo

P

,

P

,

,

M

,

Miz-Diz

M

,

Fonseca

S

,

Glauser

G

,

Lewsey

MG

,

Ecker

JR

,

Solano

R

,

Reymond

P

, et al. (

2013

)

Основные факторы транскрипции спираль-петля-спираль арабидопсиса MYC2, MYC3 и MYC4 регулируют биосинтез глюкозинолатов, продуктивность насекомых и пищевое поведение

.

Растение ячейки

25

:

3117

3117

3132

Shewry

Shewry

PR

,

Napier

JA

,

Tatham

,

(

AS

(

1995

)

Сцена для хранения семян: конструкции и биосинтез

.

Растение ячейки

7

:

945

945

956

[DOI] \ N7 / 70003 [PII]

Sonderby

IE

,

Hansen

BG

,

Bjarnholt

N

,

Ticconi

C

,

C

,

Halkier

BA

,

Kliebenstein

DJ

(

DJ

(

2007

)

Системный подход к биологии идентифицирует ген R2R3 MyB подсемейство с различными и перекрывающимися функциями в регуляции алифатических глюкозинолатов

.

plos one

2

:

E1322

,

,

T

,

T

,

Fernie

AR

(

AR

(

AR

(

AR

)

Сочетание генетического разнообразия, информатики и метаболомики для облегчения аннотации функции гена растений

.

NAT Protoc

5

:

1210

1227

1227

,

T

,

T

,

,

R

,

Ishihara

H

,

Nakabayashi

R

,

Watanabe

M

,

Sulpice

R

,

R

,

R

,

R

,

Takayama

H

,

Saito

K

,

STITT

M

, et al.(

2016

)

Характеристика недавно развившегося гена флавонол-фенилацилтрансферазы дает признаки естественного отбора света у Brassicaceae

.

Нац.коммун

7

:

12399

Примечания автора

© Автор(ы), 2021. Опубликовано Oxford University Press от имени Американского общества биологов растений.

Это статья в открытом доступе, распространяемая на условиях лицензии Creative Commons Attribution License (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), что разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Elkom Trade S.A. — Интервью с председателем правления Томашем Пьерсой

Elkom Trade S.A. имеет почти 50-летний опыт работы в металлургической промышленности. Вы специализируетесь на высококачественных системах логистики и хранения.

Специально для журнала «Производство» интервью дал – г-нТомаш Пьерса, председатель правления ELKOM TRADE S.A.

Расскажите, пожалуйста, с чего начиналась компания «Элком Трейд» и какие были самые важные моменты в истории ее развития?

Элком работает с проволокой с момента своего основания. Компания производила различную продукцию от винных контейнеров, багажников на крышу автомобилей, зонтов до торгового оборудования. После суровых лет предыдущей системы, Компания в 90-х годах начала постепенно отходить от очень насыщенного сектора производителей торгового оборудования и переориентироваться на производство логистических систем для промышленного сектора.Затем он стал основным поставщиком, среди прочего, для крупнейшего производителя ПЭТ-преформ в мире. За более чем десятилетие накоплен опыт, ноу-хау и отработаны технологии производства других изделий из проволоки. Еще одним ключевым моментом стал кризис 2007 года, последствия которого компания ощутила на себе в 2009 году. Тогда мы решили остаться в отрасли, но превратили Компанию из поставщика продукта в поставщика ценности. Мы следовали логике расширенного продукта и сосредоточились на нескольких ключевых, на наш взгляд, характеристиках, таких как долговечность, своевременность поставок, персонализированное предложение и послепродажное обслуживание.Это позволило нам построить очень прочные отношения с нашими партнерами, основанные на предсказуемости и профессионализме. Сейчас мы проходим следующий этап – автоматизация операций, проводимых с нашими перевозчиками. Мы спроектировали и внедрили в производство несколько прототипов машин для манипулирования нашей продукцией на разных этапах ее использования. Это определенно выделит нас в ближайшем будущем, потому что мы начнем предлагать машины и устройства, поддерживающие наше основное производство.

Вы лидируете в производстве сетчатых контейнеров, надставок, роликовых контейнеров и профильных конструкций.Вы также развиваете свой ассортимент продукции в направлении модульных систем отображения. Расскажите подробнее о предлагаемой продукции, технологиях производства и производственных мощностях компании?

Мы способны обеспечить практически все потребности внутренней, производственной и складской логистики в большинстве отраслей. Наши системы функционируют практически на каждом этапе их производственных процессов и доставки конечного продукта их клиенту в свою очередь. Я покажу это на примере производства ПЭТ-преформ.Наши контейнеры настолько универсальны, что с ними интегрируются машины для экструзии преформ. Так, прямо из автомата им наполняется готовый продукт. В данный момент наш контейнер участвует в производственном процессе у нашего партнера. Затем контейнер с продукцией отправляется на склад и ожидает подготовки к отгрузке. На данный момент выполняет складскую функцию. После погрузки на грузовик, везущий заказ клиенту, он выполняет логистическую функцию. Интересно, что заказчик берет на себя те же функции — то есть хранение и производство, ведь и склады, и машины для дальнейшей обработки преформ (выдува бутылок) также интегрированы с этими контейнерами.Конечно, это только одна отрасль и один тип продукта, который мы разрабатываем. Я специально употребил это слово, потому что наша основная формула сотрудничества – это интенсивная работа с клиентом, чтобы всесторонне проанализировать его потребности, чтобы разработать наиболее подходящее логистическое решение. Интересным примером является винный рынок, где только в Европе насчитывается не менее нескольких сотен видов бутылок. И чтобы оптимизировать процесс у нашего клиента, для каждого типа бутылок требуется свое решение. Самый интересный пример, которого мы недавно достигли, — это разработка совместно с одним из крупнейших мировых косметических гигантов контейнера для транспортировки уже выдутых бутылок в процессе производства.Решения, которые мы использовали в самом перевозчике, и корректировки в процессе, вытекающие из этих изменений, привели к сокращению 90% персонала на данном этапе процесса. Чтобы преодолеть все это, мы используем сложные ИТ-решения для проектирования и строительства. У нас есть специализированная и профессиональная техническая служба и менеджеры по продуктам. Это смесь опыта и юношеской фантазии. Самое главное, что эти люди сами раздвигают границы. Машинный парк, который у нас есть в настоящее время, обеспечивает наши основные производственные потребности.Конечно, мы сотрудничаем с некоторыми производствами. В связи с тем, что это не всегда самая эффективная форма ведения производственного процесса, мы решили инвестировать, чтобы обезопасить свой производственный потенциал, чтобы минимизировать внешние услуги. Имея многолетний опыт, мы верим, что можем наилучшим образом формировать процесс, когда мы лично контролируем его большую часть.

Элком Трейд является партнером компаний из многих отраслей. Кому вы особенно адресовали свою продукцию и что отличает ваше предложение от конкурентов?

Наше предложение адресовано в первую очередь партнерам, которые ценят стабильность как сотрудничества, так и предлагаемого продукта.Мы ориентируемся на качество в широком смысле — начиная от долговечности и надежности продукции, через высокое качество сотрудничества и коммуникации и заканчивая послепродажным обслуживанием на самом высоком уровне. Это означает, что наш партнер чувствует себя комфортно на каждом этапе жизненного цикла продукта, начиная с потребности и заканчивая процессом предложения ремонта или регенерации носителя. И это отличает нас от широкой конкуренции. Вот почему мы, безусловно, не лучший выбор для организаций, ожидающих типичного бюджетного решения.Мы даже не пытаемся конкурировать с восточным импортом. В течение многих лет мы работаем на широко понимаемом рынке всех видов стеклянных и пластиковых бутылок и преформ для их производства, от производителей соков и напитков до косметики и химии. Мы обслуживаем винодельческую промышленность и игристые вина, включая шампанское. Мы много лет работаем в автомобильной и коммунальной сфере. В настоящее время мы успешно появляемся в сфере розничной торговли. Инвестиции, которые мы в настоящее время осуществляем, несмотря на пандемию, направлены на то, чтобы предоставить нам более широкий спектр решений и компетенций, в основном для изделий из труб, профилей и листового металла.Это означает, что мы сможем войти в автомобильную промышленность и розничную торговлю с большим импульсом и более широким предложением.

Ваша продукция получает признание крупнейших мировых концернов и выходит на рынки практически всего мира. Расскажите, что самое главное в вашем бизнесе? Каков стратегический потенциал вашей компании и залог ее успеха?

Несомненно, индивидуальный подход к каждому партнеру. Конечно, не все в этом нуждаются и ожидают, но точно все это ценят.Можно сказать, что мы портной, который подстраивает правила сотрудничества для каждого партнера индивидуально. Каждый партнер индивидуален, поэтому каждому из них нужен немного другой продукт, его модификация, у каждого разные предпочтения в оплате, логистике и качестве. На многих уровнях мы можем гибко адаптировать наш подход к ожиданиям. У нас есть такие инструменты и возможности. Это, безусловно, выделяет нас.

Успех в бизнесе невозможен без квалифицированного персонала. Расскажите о команде специалистов, которые ежедневно строят бренд и успех Элком Трейд?

Как известно, основой любого предприятия являются финансовый и человеческий капитал.В нашей компании работает около 200 человек. Знания, опыт и приверженность сотрудников имеют большое экономическое значение для нашей организации. Важным источником ценностей наших сотрудников является их способность мотивировать себя, расширять свои знания и делать выводы. Их повседневная работа затрагивает ряд стратегических ценностей нашей компании – повышает эффективность, повышает эффективность, использует возможности, созданные рынком, поддерживает качество нашей продукции на высоком уровне. Как Правление мы проводим политику открытости в общении, открытых дверей, т.е.е. наша доступность для всех членов экипажа, быть рядом и поддерживать их на ежедневной основе. Взаимное уважение является одной из ценностей, влияющих на бренд и успех нашей компании.

Качество предлагаемых продуктов и услуг является приоритетом для вашей компании, поэтому вы работаете только с избранными партнерами и поставщиками. Хотели бы Вы особо выделить какие-либо компании — Ваши самые важные партнеры?

Мне кажется, что это было бы, во-первых, несправедливо, а во-вторых, что это противоречило бы нашему видению функционирования.Каждый наш партнер уникален, потому что он неповторим. Каждый из них имеет по-разному организованный внутренний процесс, разную структуру клиентов, работает на других рынках и т.д. К каждому партнеру мы относимся индивидуально, отсюда индивидуальный подход, а значит и предложение и принципы сотрудничества. Каждая из них уникальна и заслуживает внимания.

Каковы наиболее важные инвестиции, связанные с развитием компании за последние несколько лет?

Осуществляется крупнейшая инвестиция в истории нашей компании.Мы строим новое производственное предприятие в инвестиционном комплексе в Островце Свентокшиски. Мы начали инвестиции в начале 2019 года. В рамках запланированных инвестиций будет построен завод площадью 5700 квадратных метров, социально-офисное здание площадью 1300 квадратных метров. Инвестиции будут построены с участием фондов ЕС в рамках Оперативной программы интеллектуального развития. Это следующий этап нашего развития. Мы хотим расширить предложение продукции и производственный потенциал, что позволит нам выйти на новые рынки, чтобы мы могли предлагать продукцию все большему числу получателей и вести не дюжину проектов одновременно, а десятки.Для нас это важно, потому что до сих пор мы были организацией, которая знала свои возможности, и поэтому нам пришлось отказаться от некоторых проектов. В настоящее время мы готовы удовлетворить потребности клиентов, во-первых, а во-вторых, создавать и внедрять собственные решения благодаря нашим ноу-хау, основанным на опыте.

Как Вы оцениваете будущее отрасли, в которой работает компания, какие планы у компании на этот счет?

В настоящее время мы являемся основным производителем коллективной упаковки для ПЭТ-индустрии в Европе.Мы предполагаем ежегодный рост на этом рынке в несколько процентов. Мы намерены следить за этим увеличением, по крайней мере, напрямую. Однако мы ожидаем очень большого роста в сфере розничной торговли и логистики, связанной с электронной коммерцией (особенно сейчас, после пандемии COVID). Это отрасль, на которой мы в настоящее время сосредоточены и которой мы хотим заинтересоваться. Инвестиции как в инфраструктуру, так и в машинный парк позволят нам увеличить потенциал для работы в этой отрасли. В настоящее время мы разрабатываем стратегический план, который нам пришлось изменить из-за пандемии.Однако из анализов мы знали, в каких областях и отраслях мы хотим развиваться, благодаря чему мы достаточно эффективно прошли через волнения, связанные с COVID-19. Имея «дорожную карту» развития, мы знаем, к чему стремимся и как этого достичь. Рынки и работающие на них клиенты работают достаточно гибко, поэтому мы тоже должны быть в курсе и даже на полшага впереди.

Помимо деловой активности, не менее важна социальная активность. Участвуете ли вы на местном уровне в непроизводственной деятельности, такой как благотворительность, спортивные и культурные мероприятия?

В литературе часто цитируется заявление Энди Кэрролла 1973 года, в котором говорится, что «корпоративная социальная ответственность — отличный термин, потому что он, безусловно, что-то значит, но не всегда одинаково для всех.В нашем понимании социальная ответственность означает социальную, этическую и экологическую деятельность в нашем ближайшем окружении. Сложившаяся ситуация в нашей стране привела к тому, что мы присоединились к акции #ПомощьДлаМедика. Мы передали Спасательной группе Польского Красного Креста Островец-Свентокшиски 120 литров дезинфицирующей жидкости и 1000 пар одноразовых перчаток. Мы также проводим экологические мероприятия. Мы встречаем целые семьи и чистые леса. Весной прошлого года мы очистили 6000 м2 леса и собрали более 1000 кг мусора.В этом году мы хотели побить собственный рекорд, но, к сожалению, пандемия помешала нашим планам. Мы также присоединяемся к местным благотворительным акциям, поддерживаем островецкую гандбольную и волейбольную команду KSZO Ostrowiec. Мы поддерживаем местных пожарных и полицейских. Мы поддерживаем финансово учреждения, где маленькие дети учатся не только в Островце. На протяжении многих лет вместе с нашими сотрудниками мы занимаемся такой деятельностью, ведь в бизнесе мы также руководствуемся сердцем.

Какими достижениями вы больше всего гордитесь?

Я могу сказать, что горжусь двумя вещами.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.