Трк академический: ТРЦ Академический современный торговый комплекс Екатеринбурга

Содержание

Торгово-развлекательные центры, комплексы и торговые центры, бизнес центры около метро Академическая

Что ВсёКонцертыФильмы в прокатеСпектакли в театрахАвтособытияАкцииБалБалет, операБлаготворительностьВечеринки и дискотекиВыставкиДень ПобедыДень снятия блокадыЕвро-2020 по футболу в СПбКинопоказыКонференцииКрасота и модаЛекции, семинары и тренингиЛитератураМероприятия в ресторанахМероприятия ВОВОбластные событияОбщественные акцииПраздники и мероприятияПрезентации и открытияПремииРазвлекательные шоуРазвлечения для детейреконструкцияРелигияСобытия на улицеСпектаклиСпортивные события Творческие вечераФестивалиФК ЗенитШкольные каникулыЭкологические событияЭкскурсииЯрмарки

Где ВездеАдминистрации р-новКреативные art заведенияПарки аттракционов, детские развлекательные центрыКлубы воздухоплаванияБазы, пансионаты, центры загородного отдыхаСауны и баниБарыБассейны и школы плаванияЧитальные залы и библиотекиМеста, где играть в бильярдБоулингМагазины, бутики, шоу-румы одеждыВерёвочные городки и паркиВодопады и гейзерыКомплексы и залы для выставокГей и лесби клубыГоры, скалы и высотыОтели ГостиницыДворцыДворы-колодцы, подъездыЛагеря для отдыха и развития детейПрочие места отдыха и развлеченийЗаброшки - здания, лагеря, отели и заводыВетеринарные клиники, питомники, зоогостиницыЗалы для выступлений, аренда залов для выступленийЗалы для переговоров, аренда залов для переговоровЗалы и помещения для вечеринок, аренда залов и помещений для вечеринокЗалы и помещения для мероприятий, аренда залов и помещений для мероприятийЗалы и помещения для праздников, аренда залов и помещений для праздниковЗалы и помещения для празднования дня рождения, аренда залов и помещений для празднования дня рожденияЗалы и помещения для проведения корпоративов, аренда залов и помещений для проведения корпоративовЗалы и помещения для проведения семинаров, аренда залов и помещений для проведения семинаровЗалы и помещения для тренингов, аренда залов и помещений для тренинговЗалы со сценой, аренда залов со сценойКонтактные зоопарки и парки с животнымиТуристические инфоцентрыСтудии йогиКараоке клубы и барыКартинг центрыЛедовые катки и горкиРестораны, бары, кафеКвесты в реальности для детей и взрослыхПлощадки для игры в кёрлингКиноцентры и кинотеатрыМогилы и некрополиВодное поло. байдарки, яхтинг, парусные клубыКоворкинг центрыКонференц-залы и помещения для проведения конференций, аренда конференц-залов и помещений для проведения конференцийКонные прогулки на лошадяхКрепости и замкиЛофты для вечеринок, аренда лофтов для вечеринокЛофты для дней рождения, аренда лофта для дней рожденияЛофты для праздников, аренда лофта для праздниковЛофты для свадьбы, аренда лофтов для свадьбыМагазины одежды и продуктов питанияМаяки и фортыМед клиники и поликлиникиДетские места отдыхаРазводный, вантовые, исторические мостыМузеиГосударственные музеи-заповедники (ГМЗ)Креативные и прикольные домаНочные бары и клубыПляжи, реки и озераПамятники и скульптурыПарки, сады и скверы, лесопарки и лесаПейнтбол и ЛазертагКатакомбы и подземные гротыПлощадиПлощадки для мастер-классов, аренда площадкок для мастер-классовПомещения и конференц залы для событий, конференций, тренинговЗалы для концертовПристани, причалы, порты, стоянкиПриюты и фонды помощиПрокат спортивного инвентаряСтудии красоты и парикмахерскиеОткрытые видовые крыши и площадкиКомплексы, арены, стадионыМужской и женский стриптиз девушекЗалы и помещения для онлайн-мероприятий, аренда залов и помещений для онлайн-мероприятийШколы танцевГипер и супермаркетыДК и театрыЭкскурсионные теплоходы по Неве, Лагоде и Финскому ЗаливуТоргово-развлекательные центры, комплексы и торговые центры, бизнес центрыУниверситеты, институты, академии, колледжиФитнес центры, спортивные клубы и оздоровительные центрыПространства для фотосессий и фотосъемкиСоборы, храмы и церкви

Когда Любое времясегодня Вт, 27 июлязавтра Ср, 28 июлячетверг, 29 июляпятница, 30 июлясуббота, 31 июлявоскресенье, 1 августапонедельник, 2 августавторник, 3 августасреда, 4 августачетверг, 5 августа

ТРК Калининского района рядом с отелем Орбита

Вблизи гостиницы «Орбита» расположено несколько торговых площадок с сетевыми супермаркетами и небольшими по площади магазинами одежды и обуви, сувенирной продукции. Крупные торгово-развлекательные комплексы находятся в получасе ходьбы или 10 минутах езды на автомобиле рядом со станциями метро «Академическая» и «Лесная».

ТРК «Академ-Парк»

Чтобы добраться от «Орбиты» до ТРЦ «Академ-Парк» в Санкт-Петербурге, проще всего воспользоваться метрополитеном и выйти на станции «Академическая». Это ближайший большой торговый комплекс. Первый этаж ТРК «Академ-Парк» арендуют  магазины одежды, РИВ ГОШ, офисы сотовых компаний «Билайн» и Теле2, «Евросеть». Здесь можно купить популярные бренды одежды и обуви: MODIS, Gloria Jeans, LOVE REPUBLIC, New Yorker, ECCO, RALF RINGER. Бытовую технику выбирайте на третьем этаже в «М.Видео».

Здесь же расположен кинотеатр «Формула кино», оснащенный системами просмотра фильмов в формате 3D. Рядом с кинотеатром в ТРК «Академ-Парк» находится зона кафе и ресторанов. БУРГЕР КИНГ, «Чили пицца», БУШЕ, «Крошка Картошка» - это неполный список мест, где можно перекусить, пообедать или выпить кофе с пирожными. На цокольном этаже ТРЦ «Академ-парк» – продуктовый супермаркет «Перекресток», магазин игрушек и детских товаров «Лукоморье», ювелирная мастерская Aurum, ремонт обуви. На четвертом этаже расположен бизнес-центр класса B.

Торговый комплекс «Академический»

Из отеля «Орбита» до торгового центра «Академический» в Санкт-Петербурге можно добраться на метро, выйдя на одноименной станции. Пешая прогулка займет примерно полчаса. Если вы хотите дойти пешком до ТРК «Академический», выйдя из отеля, следуйте по проспекту Непокоренных в сторону Гражданского проспекта. Добравшись до Гражданского проспекта, поверните налево и продолжайте движение. Через 20 минут вы придете к ТРЦ «Академический».

В трехэтажном здании расположены магазины одежды и обуви OODJI, Sela, O’Stin, BELWEST, Zenden. Также на первом этаже находится ресторан Mc Donald’s и магазин парфюмерии и косметики «Л’Этуаль». На втором этаже торгового комплекса «Академический» на Гражданском проспекте вы увидите магазин бытовой техники и электроники «Эльдорадо» и детский универмаг «СМИК». Наверху - спортивный клуб Sportlife.

ТРК «Европолис»

Недавно открытый ТРК «Европолис» на Полюстровском, 84 популярен в первую очередь из-за единственного в России парка активного отдыха Angry Birds. Детский клуб поражает размерами пространства и количеством аттракционов. Сюда приезжают семьи из других городов РФ и других стран.

Если вы хотите пообедать или выпить чаю, в клубе Энгри Бердз ТРК «Европолис»  есть собственное кафе. При наличии на руке браслета вы можете перекусить в ресторанах быстрого питания в зоне фуд-корт. Также вы без труда найдете ресторан «Баклажан» в ТРК «Европолис» на третьем этаже рядом с входом в Angry Birds Activity Park.

Здесь находятся моно и мультибрендовые магазины женской, мужской и детской одежды, обуви, белья: BAON, COLIN’S, GUESS, LUHTA, MANGO, TOMMY HALFINGER, ZARA, U.S. POLO ASSN. На первом этаже торгового комплекса «Европолис» расположены офисы сотовых операторов: «МТС», «МегаФон», «Билайн». Оплатить услуги можно в Связном и Сбербанке. Также на первом этаже находится гипермаркет Prisma.

Добраться от отеля «Орбита» до торгового центра «Европолис» проще всего на метро. Выходите на станции «Лесная». Также вы можете воспользоваться автобусом К-175. Остановка автобуса расположена на противоположной стороне проспекта Непокоренных. Выходите у железнодорожной станции «Кушелевка». Вам следует пересечь железнодорожное полотно, и вы увидите ТРК «Европолис».

ТК «Родео Драйв»

Далеко не каждый торговый комплекс может похвастаться наличием водного центра. ТРК «Родео Драйв» на пр. Культуры, 1 включает аквапарк с семью горками, бассейнами с разной температурой воды, несколькими саунами и другими аттракционами. Аквацентр выгодно отличается от других больших водных комплексов низкими ценами и скидками. Стоимость зависит от времени посещения.

Аквапарк в ТРЦ «Родео Драйв» - наиболее близкий к гостинице «Орбита» водной центр. Чтобы добраться до него, вам следует сесть на 55 или 48 трамваи, 21 троллейбус или 10 коммерческий автобус на остановке, расположенной возле входа в метро «Площадь Мужества». Выходите на пятой или шестой остановке. Вы увидите издалека большие торговый площади ТРК «Родео Драйв».

Здесь представлены магазины одежды и обуви известных российских и иностранных брендов: Gloria Jeans, SELA, Zarina, O'STIN, Palmetta, CHESTER, ZENDEN. В ТРК «Родео Драйв» в Санкт-Петербурге можно приобрести спортивные товары в «Спортмастере» или Mad Wave. В Детском Мире - большой ассортимент игрушек и детской одежды.

Кроме водных развлечений имеется кинотеатр и картинг. Родители могут оставить ребенка поиграть или устроить яркий день рождения в детском клубе. Детский центр «Лазанки» в торговом центре «Родео Драйв» включает веревочный парк, интерактивные аттракционы, лазерный лабиринт.  Проголодались? На третьем этаже находится фуд-корт.

Сервисный центр ReMobi ТЦ "Академический", метро «Академическая», Санкт-Петербург

В сервисном центре Remobi помогут восстановить нормальную работу ваших любимых гаджетов – мобильных телефонов, планшетов, фотоаппаратов, Mp3-плееров, прочей цифровой техники, которая помогает в работе или служит для приятного времяпровождения. Здесь работают профессионалы с многолетним стажем, хорошо знающие свое дело. Расположена мастерская в

Санкт-Петербурге в ТЦ «Академический» по адресу: Гражданский пр-т, д. 41, павильон В54. Удобная транспортная развязка позволяет без труда добраться сюда из любой части города. Для владельцев авто предусмотрена парковка.

Виды выполняемых работ

Первое, что сделает специалист – проведет бесплатную диагностику на современном оборудовании, после чего сообщит точную причину поломки, сроки и стоимость выполнения работ. Как показывает практика, большинство неисправностей устраняется очень быстро, поэтому клиент может подождать здесь же, в красивом торговом центре с множеством кафе и магазинов. При необходимости замены деталей мастер использует только оригинальные комплектующие, полученные у прямого производителя. Это позволяет не беспокоиться об их надежности и длительном сроке эксплуатации.

Распространенные причины выхода техники из строя следующие:

  • механические повреждения вследствие неосторожного обращения;
  • попадание влаги под корпус устройства;
  • сбои в работе программного обеспечения;
  • заводские дефекты отдельных элементов;
  • использование несовместимых зарядных устройств, кабелей, аккумуляторов;
  • истечение срока эксплуатации некоторых деталей.

После определения причины поломки будет произведен ремонт или полная замена вышедших из строя элементов (они всегда есть в наличии благодаря сотрудничеству с непосредственным производителем). На выполненные работы предоставляется гарантия от 30 дней. Качество услуг в Remobi (Санкт-Петербург, ТЦ «Академический») уже высоко оценили многие клиенты.

Воспользоваться услугами возможно, подав заявку на сайте (в этом случае предоставляется скидка 5% от стоимости работы), вызвав на дом курьера для бесплатного забора техники в сервисный центр. Также можно самостоятельно доставить устройство для ремонта в мастерскую по адресу Санкт-Петербург, ТЦ «Академический». Все детали уточняются у менеджера, связаться с которым будет удобно по телефону или заказав обратный звонок.

Remobi ждет постоянных и новых клиентов!

Ближайшие метро к сервисному центру: «Академическая»

Как доехать до ТРК «Академ-Парк» в Калининском районе на автобусе, метро, маршрутке или троллейбусе

Общественный транспорт до ТРК «Академ-Парк» в Калининском районе

Не знаете, как доехать до ТРК «Академ-Парк» в Калининском районе, Россия? Moovit поможет вам найти лучший способ добраться до ТРК «Академ-Парк» от ближайшей остановки общественного транспорта, используя пошаговые инструкции.

Moovit предлагает бесплатные карты и навигацию в режиме реального времени, чтобы помочь вам сориентироваться в городе. Открывайте расписания, поездки, часы работы, и узнайте, сколько займет дорога до ТРК «Академ-Парк» с учетом данных Реального Времени.

Ищете остановку или станцию около ТРК «Академ-Парк»? Проверьте список ближайших остановок к пункту назначения: Станция Метро «Академическая»; Метро Академическая; Ст. Метро Академическая; станция метро «Академическая»; Пр. Науки12; Ул. Вавиловых Уг. Пр. Науки.

Вы можете доехать до ТРК «Академ-Парк» на автобусе, метро, маршрутке или троллейбусе. У этих линий и маршрутов есть остановки поблизости: (Автобус) 60, 93 (Метро) 1 (Троллейбус) 31 (Маршрутка) К101, К94

Хотите проверить, нет ли другого пути, который поможет вам добраться быстрее? Moovit помогает найти альтернативные варианты маршрутов и времени. Получите инструкции, как легко доехать до или от ТРК «Академ-Парк» с помощью приложения или сайте Moovit.

С нами добраться до ТРК «Академ-Парк» проще простого, именно поэтому более 930 млн. пользователей доверяют Moovit как лучшему транспортному приложению. Включая жителей Калининского района! Не нужно устанавливать отдельное приложение для автобуса и отдельное приложение для метро, Moovit — ваше универсальное транспортное приложение, которое поможет вам найти самые обновленные расписания автобусов и метро.

Химчистка Немецкая марка в ТЦ Академический (Санкт-Петербург, Гражданский проспект, 41а, 3 секция, цокольный этаж, ТОК «Академический»)

Сеть химчисток «BioLife Express» занимается чисткой изделий из любых видов тканей и удалением пятен любой сложности. Преимуществами сети являются квалифицированные работники, современная техника и экологически, Санкт-Петербург, Гражданский проспект, 33 к2, телефон  +7 (812) 931-69-42

сеть центров бытовых услуг, Науки проспект, 19 к3, телефон  8-981-753-66-79

Сеть химчисток и прачечных «Чистякоф» принимает в чистку одежду из любых материалов. Обработать замшевые и кожаные изделия не составит проблемы для опытных мастеров, а сумки и обувь из замши и текстиля, Санкт-Петербург, Светлановский проспект, 34к1, телефон  +7 (812) 318-09-09

Сеть химчисток «BioLife Express» занимается чисткой изделий из любых видов тканей и удалением пятен любой сложности. Современное европейское оборудование позволяет работать с любыми изделиями, используя, Санкт-Петербург, Светлановский проспект, 36 к2, телефон  +7 (812) 931-69-42

Сеть химчисток и прачечных «Чистякоф» занимается химической чисткой, стиркой и аквачисткой. Здесь чистят изделия из натурального и искусственного меха, кожи, деликатных тканей. Сроки исполнения заказа, Санкт-Петербург, Гражданский проспект, 117 к1, телефон  +7 (812) 318-09-09

«BioLife Express» — это сеть химчисток и прачечных, которая предлагает услуги по химической чистке, стирке, аквачистке одежды. Здесь принимают изделия из любых материалов и любой сложности: шубы, дубленки, Санкт-Петербург, Луначарского проспект, 80, телефон  +7 (812) 931-69-42

В Екатеринбургских ТРЦ начали активно использовать электронные очереди на прививку

Специальные терминалы, через которые можно встать в электронную очередь на прививку от COVID-19 установили уже в трех торговых центрах Екатеринбурга. Первым стал «Гринвич», к нему присоединились «МЕГА» и «Академический. 

 

- Мы благодарны всем партнерам, которые помогают медицинским работникам и решаются на дополнительные расходы. Оценить удобство использования терминалов могут все желающие. Пункты вакцинации в торговых центрах продолжают работать по установленному графику, - отметил заместитель главного врача Городского центра медицинской профилактики Александр Харитонов.
 
 

Новые форматы практикуют и в других ТРЦ. Например, в «Дирижабле» появилась запись на прививку по номеру +7 (343) 200 20 95. Чтобы записаться, нужно позвонить накануне с 8.00 до 20.00.

 

В настоящий момент на территории ТЦ в Свердловской области уже сделано 53225 прививок. 

 

Вот график работы выездных пунктов в период с 26 июля по 1 августа (первый компонент): 

 

В Екатеринбурге

 

????ТРЦ «Академический» (ул. Краснолесья, 133) – с 26 июля по 1 августа (ежедневно) с 12.00 до 18.00 

????ТЦ «Дирижабль» (ул. Академика Шварца, 17) – 27 июля с 10.00 до 15.00 (предварительная запись по тел. (343) 200 20 95) 

????ТРЦ «Гринвич» (ул. 8 Марта, 46) – 29-30 июля с 10.00 до 15.00  

????ТЦ «МЕГА» (ул. Металлургов, 87) – с 26 июля по 1 августа (ежедневно) с 12.00 до 20.00 

????Екатеринбургский государственный цирк (ул. 8 Марта, 43) – 28-29 июля с 14.00 до 19.00 

????ТРЦ «Алатырь» (ул. Малышева, 5) – 29 июля с 15.00 до 19.00 

????Гипермаркет «Сима-Ленд» (ул. Черняховского, 86/12) – с 27 по 30 июля с 10-00 до 16-00 

????ТРК «Парк Хаус» (ул. Сулимова, 50) – с 26 по 31 июля с 10.00 до 14.00 (ежедневно) 

????Аэропорт «Кольцово» (пл. Бахчиванджи, 1, терминал внутренних авиалиний, 1 этаж, здравпункт) – с 26 по 30 июля (ежедневно) с 13.00 до 19.00 

????ТЦ «МАКСИДОМ» (ул. Тверитина, 45) – 28 июля с 16.00 до 19.00 

????Екатеринбургский зоопарк (ул. Мамина Сибиряка, 189) – 31 июля с 11.00 до 15.00 

 

В Асбесте 

 

????ТЦ «НЕБО» (ул. Ленинградская, 26/2) -  26-30 июля с 12.00 до 19.00, 31 июля и 1 августа с 10.00 до 16.00 

 

В Серове

 

????ТЦ «Nebo» (ул. Ленина, 215) – 26-30 июля с 9.00 до 16.00 (мобильный пункт вакцинации)

????ТЦ «Магнит Семейный» (ул. Заславского, 37) – 26-30 июля с 9.00 до 16.00 (мобильный пункт вакцинации) 

 

В Нижнем Тагиле

 

????ТРЦ «DEPO» (Свердловское шоссе, 31Б) – 26-30 июля (ежедневно) с 16.00 до 20.00 

 

В Березовском

 

????Мобильный пункт вакцинации (ул. Восточная, 9) – 26,27 июля с 15.30 до 19.30 

????ДК «Современник» (пос. Новоберезовский, ул. Академика Королева, 1Б) – 28 июля с 15.00 до 19.00 

 

Желающим сделать прививку необходимо взять с собой паспорт, полис ОМС и СНИЛС. Для удобства граждан и сокращения времени пребывания в пункте вакцинации рекомендуем заполнить документы заранее.

 

При планировании посещения торговых центров рекомендуем ознакомиться с оперативным ежедневным графиком выездных пунктов вакцинации на сайте.

 

По данным Минздрава Свердловской области, на 25 июля против новой коронавирусной инфекции вакцинировано первым компонентом 858 249 человек, вторым - 639 083.

 

 

Просмотров: 316

Автор: Ульяна Елфимова

​Где в Екатеринбурге поставить прививку от коронавируса с 26 июля по 1 августа — Global City

В трех торговых центрах Екатеринбурга установили оборудование для формирование электронной очереди на вакцинацию. В одном торговом центре действует предварительная запись.

В Екатеринбурге придумали, как решить проблему с очередями на вакцинацию в торговых центрах. На этой неделе в ТЦ «Мега», «Академический», «Гринвич» установили оборудование для формирование электронной очереди. Теперь горожане могут заранее узнать, в какое время им нужно будет подойти на прививку от covid-19. В ТЦ «Дирижабль» введена предварительная запись на вакцинацию по отдельно выделенному для этого номеру: +7 (343) 200 20 95. Записаться может любой желающий с 8.00 до 20.00 накануне дня работы пункта.

В Екатеринбурге с 26 июля по 1 августа прививку от коронавирусной инфекции можно будет поставить:

  • ТРЦ «Академический» (ул. Краснолесья, 133) – с 26 июля по 1 августа (ежедневно) с 12.00 до 18.00
  • ТЦ «Дирижабль» (ул. Академика Шварца, 17) – 27 июля с 10.00 до 15.00 (предварительная запись по тел. (343) 200 20 95)
  • ТРЦ «Гринвич» (ул. 8 Марта, 46) – 29-30 июля с 10.00 до 15.00
  • ТЦ «МЕГА» (ул. Металлургов, 87) – с 26 июля по 1 августа (ежедневно) с 12.00 до 20.00
  • Екатеринбургский государственный цирк (ул. 8 Марта, 43) – 28-29 июля с 14.00 до 19.00
  • ТРЦ «Алатырь» (ул. Малышева, 5) – 29 июля с 15.00 до 19.00
  • Гипермаркет «Сима-Ленд» (ул. Черняховского, 86/12) – с 27 по 30 июля с 10-00 до 16-00
  • ТРК «Парк Хаус» (ул. Сулимова, 50) – с 26 по 31 июля с 10.00 до 14.00 (ежедневно)
  • Аэропорт «Кольцово» (пл. Бахчиванджи, 1, терминал внутренних авиалиний, 1 этаж, здравпункт) – с 26 по 30 июля (ежедневно) с 13.00 до 19.00
  • ТЦ «МАКСИДОМ» (ул. Тверитина, 45) – 28 июля с 16.00 до 19.00
  • Екатеринбургский зоопарк (ул. Мамина Сибиряка, 189) – 31 июля с 11.00 до 15.00

В Свердловской области работает единый телефон, по которому можно записаться на вакцинацию и получить общую информацию о прививках – это номер 122. Также можно записаться на вакцинацию на портале «Госуслуги».

© Интернет-журнал «Global City» Светлана Цыганова

TRK | Dons Excel в классе, заработайте академические отличия USTFCCCA

Сюжетные ссылки

НОВЫЙ ОРЛЕАН - Мужская и женская сборные по легкой атлетике Университета Сан-Франциско этой весной добились беспрецедентного успеха на соревнованиях и за их пределами. Обе программы добавили им похвалы, когда обе были включены в мужскую и женскую академическую команду NCAA Division I по легкой атлетике 2021 года, как было объявлено U.Ассоциация тренеров по легкой атлетике и кроссу (USTFCCCA) в четверг.

Мужчины закончили с наивысшим средним баллом среди всех команд Дивизиона I с командным средним баллом 3,74. Женщины также вошли в топ-10, заняв 10 -е место среди с самым высоким средним баллом 3,70. Под руководством первого года обучения главного тренера Тима Райли , у Донов также было четыре члена женской команды: Банит Бейнс, Ева Дженсен , Аойбе Ричардс и Маккензи Янек , получившие индивидуальные награды для спортсменов общего профиля от USTFCCCA.

Чтобы претендовать на участие в академической команде, программа должна иметь совокупный средний балл выше 3,0 (по шкале 4,0) для всех студентов-спортсменов, включенных в список команд NCAA учебного заведения для легкой атлетики в помещении и / или на открытом воздухе.

У мужчин USF было шесть студентов-спортсменов со средним баллом к ​​северу от 3,5, из них Калеб Хаугланд и превзошли донов с совокупным средним баллом 3,94. Женщины закончили весну с 19 из 22 учениц-спортсменок, получивших средний балл выше 3,5.

Чтобы быть включенным в список всех атлетов, студенту-атлету необходимо иметь минимальный совокупный средний балл 3.25 баллов по шкале 4,0 и закончили не менее двух семестров в учебном заведении.

Бейнс, специалист по коммуникациям, может похвастаться средним баллом 3,92. Дженсен - кинезиолог со средним баллом 3,64. Ричардс, аспирант программы общественного здравоохранения USF, имеет средний балл 3.97. Янек, специалист по психологии, имеет средний балл 3.71.

Trek | Centenary College of Louisiana

Trek, центральный компонент учебной программы Centenary, сочетает в себе лучшие традиции гуманитарных наук с пятью компонентами реальных знаний и навыков, необходимых лидерам 21 века.Поход начинается с курсов первого года обучения Credo (первый семестр) и Challenge (второй семестр), предназначенных для подготовки студентов к успеху как в учебе, так и профессионально.

Trek также поощряет изучение Community , Career и Culture в курсах, которые включают в себя отличительные, основанные на опыте программы для учащихся, чтобы повысить их самопознание и социальную осведомленность посредством карьеры и подготовки к аспирантуре, межкультурного взаимодействия и гражданское участие.

Посмотрите, что наши первокурсники Trek представляют на конференции Centenary Research.

Trek: курсы первого года обучения

Студенты

Centenary начинают свой Trek в первый год обучения с двух курсов, разработанных для развития умственных способностей, характерных для человека, получившего образование в области гуманитарных наук, включая интеллектуальное любопытство, критическое исследование, вдумчивое общение, решение проблем и уважительное общение с другими. .

Для получения дополнительной информации о программе Trek в первый год свяжитесь с доктором Джин Хэмминг, профессором английского языка, по адресу [email protected] или 318.869.5083.

кредо (ТРЕК 115)

Credo латинское. Это означает «я верю». Это кредо, кодекс, которым мы руководствуемся в словах и действиях в реальном мире. Этот курс, первый из двух курсов для студентов первого курса, позволяет студентам изучить свои ценности и убеждения, особенно в контексте их академических амбиций.Именно здесь начинается ваш Trek , с исследования себя и общества и широких возможностей для развития фундаментальных навыков и идей, которые лучше всего подготовят вас к предстоящим приключениям.

вызов (ТРЕК 116)

Быстрое технологическое развитие, экономический рост, глобализация, антропогенные изменения окружающей среды, конфликты. Это одни из бесчисленных факторов, которые способствуют решению сложных глобальных проблем, с которыми мы сталкиваемся сегодня в мире.В течение второго семестра Trek студенты выбирают из ряда семинаров CHALLENGE , каждый из которых предлагает углубленные исследовательские исследования некоторых из наиболее актуальных проблем 21 века. ВЫЗОВ семинаров проводят преподаватели-новаторы, которые вносят свой вклад в изучение возникающих и устойчивых проблем со своим энтузиазмом и опытом.

Путь: экспериментальное обучение

Возможности экспериментального обучения, собранные в рамках Trek ( Сообщество, Карьера, Культура ), служат связующим звеном между академической жизнью учащихся и их жизнью после столетия в качестве работающих граждан, участников своих сообществ и членов глобального сообщества. .Курсы, стажировки и исследовательские возможности, обозначенные как «экспериментальные», предлагают личный, значимый и особый опыт, который соединяет обучение в классе с практической жизнью. Установление таких связей превращает учащихся в мыслящих деятелей.

Посредством курсов и возможностей, предлагаемых в офисах по взаимодействию с общественностью, карьерным услугам и межкультурному взаимодействию, Trek предоставляет студентам возможность:

  • Интегрируйте экспериментальное обучение в наш традиционный академический контекст, чтобы учащиеся могли связать обучение в классе с практическим применением.
  • Понимать социальное взаимодействие как неотъемлемую часть образования.
  • Осознайте свою роль как граждан и лидеров, ответственных за решение проблем постоянно меняющегося мира.
  • Поймите, что личное размышление об их взаимодействии с миром за пределами классной комнаты может привести к настоящему самопознанию и социальному осознанию.

Компонент Trek По завершении строительства... Ожидается ...
кредо / вызов
30-й кредитный час / конец первого года развивать умственные привычки, характерные для человека, получившего образование в области гуманитарных наук, включая интеллектуальное любопытство, критическое исследование, вдумчивое общение, решение проблем и уважительное общение с другими.
СООБЩЕСТВО

Трек 151/153

60-й кредитный час / конец второго года обучения облегчает понимание экспериментального обучения в академической программе и служит введением в слияние науки и сообщества.
КАРЬЕРА

Трек 250/251/253

90-й кредитный час / конец младшего года позволяет студентам изучить карьеру, имея достаточно времени, чтобы внести изменения в учебный план в соответствии с их развивающимися профессиональными целями.
КУЛЬТУРА

Трек 300/351

90-й кредитный час / начало старшего года знакомит студентов с глобальным сообществом и развивает и углубляет межкультурные компетенции, поскольку студенты готовятся к вступлению в глобальный профессиональный мир.

Требования к полному треку и описания курсов доступны в каталоге Centenary College.

McIntosh Track & Field Building (Mike Long Track) (TRK)

Приветственный центр (7) (ATL) 9010 9010 (MCH) 9 0107 4317 50 Здание (CC9) Halls EPS) 9010 Приложение 9010 9010 9010 9010 9010 9010 9010 Heritage Tower 116 9 0106MB Лаборатория Исследования материалов 9 0119 MMB ) Холл 1 Центр пресвитерианского университета Полиграфические услуги (JRC) ) Studio 901017 903 Площадь 9010FA )10 9010 9010 610 CC1) 32510 9010 9010 9010 9010 9010 9010 9010 9010 Westcount 334 338 9010 по телефонуПарковочный гараж
1 Академический дайвинг-центр
2 Alpha Delta Pi Pavilion
3 Ассоциация выпускников
4 Центр выпускников (ACF)
5 Деревня выпускников (AVO)
6 Центр посетителей для выпускников (PRE)
8 Ame Building (AME)
9 Отдел антропологии - Varsity Plaza (L52)
10 Приложение художественного факультета (MLR) Art 11
12 Askew Student Life Building (SLB)
13 Ausley Law School (VG4)
14 Azalea Hall (AZL)
15 Band Storage Facility (BPS)
16 Baptist Campus Ministry
17 Basketball 9010 Training Facility (BTF 9010 9010 9010) Bellamy Building (BEL)
19 Биологический блок 1 (BIO)
20 Центр биомедицинских исследований (BRF)
21 Black Student Union (U) 22 Bloxham Annex A (CC3)
23 Bloxham Annex B (CC4)
24 Bloxham Annex C (CC5)
25 Bowden Field Книжный магазин (под гаражом)
27 Broward Hall (BRW)
28 Bryan Hall (BRY)
29 Автобусная остановка - Academic Way (BS1)
30 Автобусная остановка - Chieftan Way (BS2)
31 Автобусная остановка Northside Acad Way (BS0)
Автобусная остановка - Стадион Драйв (BS3)
33 Автобусная остановка - Университетский центр (BS4 / GG2)
34 Пункт для мытья клеток (CWF)
35 Юридическая школа Колдуэлл (Колдуэлл) VG2)
36 Call Street Garage 4 (PG4)
37 Campbell Stadium (CAM)
38 Campus Services Building (CSB)
40 Carraway Building (CAR)
41 Католический студенческий центр
42 Cawthon Hall (CAW)
Центр аутизма (L53)
44 Центр гражданского образования (YGO)
45 Центр по правам человека (L50)
46 Центр интенсивных исследований (WO1)
47 Центр коммунальных услуг (CUP)
48 Центральный завод коммунальных услуг (CUP)
49 Учебный центр Challenger
51 Лаборатории химических наук (CSL)
52 Центр развития ребенка (CCD)
53 Дом христианской науки
Центр Пеппера 54 901
55 Медицинский колледж администрации
56 Аудитор медицинского колледжа ium (MSA)
57 Здание Медицинского колледжа (MSB)
58 Здание Исследовательского Медицинского колледжа (MSR)
59 Здание Исследовательского центра Коллинза / Здание ядерных исследований (NRB)
60 Конради-билдинг (CON)
61 CPE 1 - Данвуди-стрит (M6)
62 CPE 2 - Dunwoody Street (M8) Created Recreation Building (CRB)
64 Damon Law School (VG3)
65 Degraff East (RH8)
66 Degraff West (RH109
Холл (DEV / NDE)
68 Университетский центр Дево Мур
69 Стадион Дика Хаусера (HBS)
70 9011 0 Здание Диффенбо (DIF)
71 Научная библиотека Дирака
72 Научная библиотека Дирака (DSL)
73 Химическая лаборатория Диттмера
901 901
901 Dodd Auditorium (DHA)
75 Dodd Hall (DOD)
76 Dodd Lecture Hall (AUD)
77 Don Veller Seminole Golf Course1 (GCC) 9010 78 Dorman Hall (DOR / NDO)
79 Dunlap Practice Fields
80 Dunlap Success Center (DSC)
81
82 E.AP Facility (Q1)
83 Приложение EH&S (EHS)
84 Здание инженерной лаборатории (ELB)
85 Епископальный студенческий дом 86106
87 Театр Fallon
88 FDLE Mail Sorting Facility (MF1)
89 FA FHP Academy (FHP)
91 Театр изящных искусств
92 Здание изящных искусств (FAB)
93 Музей изящных искусств
94 Приложение Firestone (CC7) 95 Здание Firestone (CC6)
96 Лекционный зал Fisher (FLH)
97 Хранилище горючих газов (M FS)
98 Здание Фрэнка Шоу (ФСБ)
99 Инженерный колледж бывшего СССР, корпус A (CE1)
100 Бывший советский союз инженерный колледж, корпус B (CE2)
101 Инженерный корпус бывшего Советского Союза C
102 Детская теплица бывшего Советского Союза (F15)
103 Резервный парк бывшего Советского Союза Лейкфронт Парк (REZ)
104 Гранат (GG)
105 Беседка в Греческом парке (GZ1)
106 Gilchrist Hall (GIL)
107 Глобальное и мультикультурное взаимодействие (The Globe) (GME)10 Здание Гюнтера (эт.Геол. Soc.) (SGB)
109 Harpe-Johnson Building, ROTC (MIL)
110 Haskin Circus Complex (CIR)
111 Hazardous Waste Facility (Hazardous Waste Facility).
112 HCB Classroom Building (HCB)
113 Health And Wellness Center (HWC)
114 Hecht House (HEC)
115 История - Специальные проекты (M40)
117 Хобби - Юридическая школа Харрисона / Кавтона (VG1)
118 Учебная лаборатория Хоффмана (HTL)
с отличием , и Fellows House (HSF)
120 Housewright Music Building (HMU)
121 Howser Batting Tunnel (HBT)
122 Howser Grounds Maintenance (HGM)
123 Howser North Gate (HNG)
124 Howser Stadium - Baseball
12510 Howser (Ticket10 Howser)
126 Помещения IM Fields
127 Зал тренировок в помещении - футбол (IPF)
128 Jennie Murphree Hall (JMH)
129 901 Jim Moran
130 Поле для софтбола Джоанн Граф
131 Джонсон Билдинг (RMJ / WJB)
132 Джонстон Приложение
KASB
134 Keen Building (KEN)
135 Kellogg Research Building (KRB)
136 Kellum Hall (KEL)
137 Kempler Lab (ZEB)
138 King Life Sciences Building (KIN)
139 Kiosk (K119) 140 Kuersteiner Music Building (KMU)
141 Landis Green
142 Landis Hall (LAN)
143 Langford Green 901 Дом
145 Адвокатский центр
146 Юридическая библиотека (LLB)
147 Правовая ротонда (LSR)
147 Юридический центр (LSR)
148
149 Leach Recreation Center (SRC)
150 Legacy Fountain
151 90 110 Библиотечные технические службы (LTO)
152 Концертный зал Линдси (Kuersteiner Bldg)
153 Longmire Alumni Building (LON)
154 LOV117 155 Лютеранский дом
156 Магнитная лаборатория (NHMFL)
157 Магнитная лаборатория Gen.Наука (NHMFL)
158 Здание магнитной лаборатории ЯМР (NHMLF)
159 Здание магнитной лаборатории OPMD (NHMLF)
160
Зал Магнолия (MAG / MAG107) 161 Поля основного кампуса (старые поля IM) (IFF)
162 Сарай техобслуживания № 1
163 Сараи техобслуживания № 2
164 165 Башня маршевых вождей и тренировочная площадка (MCT)
166 Брачно-семейная клиника (MFC)
167 Мастерская мастерской
168
169 McCollum Hall (EMH)
170 McIntosh Track & Field Building (Mike Long Track) (TRK)
171 Сред.Школьная аудитория
172 Мед. Школьный исследовательский корпус
173 Mendenhall Annex
174 Mendenhall Building A (MMA)
175 Mendenhall Building B (MMB)
177 MFA Studios (L2A)
178 Mike Long Stadium Track
179 Майк Мартин Бейсбольное поле
180 181 Mina Jo Powell Alumni Green (MJP)
182 Modular 6 - математический факультет (MC6)
183 Molecular Biophysics Building (MBB) 187 9010 MON)
185 Спортивный центр Мура (MAB)
186 Morcom Aq Центр uatics (TCP)
187 Morgan Building (HMB)
188 Многоцелевой образовательный комплекс
189 Music (Housewright Building) (HMU)10
Music (Kuersteiner Building) (KMU)
191 Национальная лаборатория сильных магнитных полей (MAG)
192 New Chemistry Building (CHM)
193 Northwest )
194 Oglesby Union (OGC)
195 Oglesby Union - Activity Building (ACT)
196 Oglesby Union - Crenshaw Building (CRB) Oglesby Union - Davis Building (DAV)
198 Oglesby Union - Moore Auditorium (MOR)
199 9011 0 Oglesby Union - Post Office Building (UPO)
200 Oglesby Union - Turner Building (TUR)
201 Старые насосы для моторного бассейна
202 Центр управления парковкой GCB)
203 Парковочный гараж 1 - Woodward Avenue (PG1)
204 Парковочный гараж 2 - Traditions Way (PG2)
205 Parking Garage 3 - Spirit Way
206 Гараж 4 - Звоните ул.
207 Гараж 5 - Санкт-Петербург.Августин (PG5)
208 Парковочный гараж 6 - Пенсакола
209 Парковочный гараж I (Студент)
210 Парковочный гараж II (Студент) 2110 9010 Гараж III (Студент / Персонал)
212 Парковочный Гараж IV (Студент)
213 Pepper Building (PCB)
214 Почтовая служба и служба приема 215
216 Дом президента (PNR)
217 Павильон президента
218 Полиграфические и почтовые услуги (JRC)
220 Склад записей собственности (F20)
221 9011 0 Psychology Auditorium (PDA)
222 Psychology Building (PSY)
223 Psychology Building A (PDA)
224 Psychology Building B Общественное вещание (PBC)
226 Рэганс Холл 1 (Rh2)
227 Рэганс Холл 2 (Rh3)
228 Раганс Раганс Раганс229 Рэганс Холл 4 (Rh5)
230 Рек.Спорткомплекс Восток (IM1)
231 Рек. Спортивный комплекс Tournament Building (IM4)
232 Рек. Sportsplex West (IM3)
233 Здание центра переработки 1
234 Здание 2 центра переработки
235 Здание центра переработки 3
Центр переработки вторсырья
237 Региональный реабилитационный центр (RRC)
238 Research Foundation Building A (RF1)
239 Research Foundation Building B (RF2)
240 Общежитие 901
241 Общежитие 11
242 Рейнольдс Холл (Рейнольдс)
243 Ричардс Билдинг (UPL)
UPL 245 Здание Риджуэй (LRB)
246 Робертс Холл - Юридическая школа (LAW)
247 Rogers Building (океанография / статистика) (OSB)
248 Rogers Hall (ROG)
249 Rovetta Business Building A10 (RBA)
250 Rovetta Business Building B (RBB)
251 Salley Hall (SAL)
252 Площадки для волейбола на песке
253 Sandels Science Building (College Human Science Building) )
254 Sandels Green
255 Завод спутниковых коммунальных услуг № 1
256 Завод спутниковых коммунальных услуг № 2
257 258 Школа медсестер (SCN)
259 Амфитеатр продавцов (Kuersteiner Bldg)
260 Обеденные офисы семинолов / Офисы Aramark (RSF)
261 Здание Шоу - Телекоммуникации (RSB)
262 Здание Шорс - Школа информационных исследований (LSB) Sliger Building (BFS)
264 Smith Hall (SMH)
265 Концессии на футбол / софтбол
266 Туалеты для футбола и софтбола
268 Футбольный пресс
269 Футбольный стадион
270 Футбольный склад
271 Софтбол 9010 9010 Клетка для мяча
273 Пресс-бокс для софтбола
274 Стадион для софтбола
275 Землянка для посетителей софтбола
276 Теннисный центр Speicher (SST)
277 9010 9010 9010 Тренировочный центр Центр
279 Starbucks
280 Государственный склад хранения
281 Экономический центр Ставроса (SEC)
2810 901 9010 9010 Team 283 Каменное здание - Педагогический колледж (STB)
284 Библиотека Строзьера (LIB)
285 Здание обслуживания студентов (SSB)
286
287 Водный центр Stults
2 88 Таллахасси - административный центр округа Леон
289 Сарай для кожевенного оборудования
290 Таннер-холл (Полицейский департамент бывшего СССР) (PSF)
291
292 Теннис / Многоцелевое образовательное учреждение (MEF)
293 Thagard Health Center (THC)
294 Лаборатория - Здание A (TLA)
Лаборатория - Здание B (TLB)
296 Thrasher Building
297 Ticket / Security Building
298 Track Concessions
299
300 Зал традиций
301 Учебный центр при университете (L45)
302 Общественный центр Такера (CIV)
303 Гимназия Талли (TUL)
304 Turlington Building 9010 9010 Терлингтон-билдинг (Терлингтон-билдинг)
306 Тернбулл Конференц-центр штата Флорида
307 Юнион Грин
308 Здание университетского центра A
309 Здание университетского центра C
311 Здание университетского центра D
312 Торговый домик - Chieftan Way
313 Торговый домик - Salley
315 Услуги для посетителей (UCB)
316 Приложение для визуального искусства
317 Склад № 3
318 Склад № 4
319 Склад (складское помещение)
321 Wellness Parking Booth
322 Читальный зал Werkmeister
323 West Dining Facility
Westcott Building (Ruby Diamond Auditorium) (WES)
326 Westcott Fountain
327 Westcott Welcome Center - Информация для посетителей (WVI)
328 Westsion10 (Westsion10)
329 WFSU, WFSQ (Вещательный центр)
330 90 110 Wildwood Hall A
331 Wildwood Hall B
332 Wildwood Hall C
333 Wildwood Hall North (RH6)
Саут )
335 Уильям Джонстон Билдинг (WJB)
336 Уильямс Билдинг (WMS)
337 Винчестер Билдинг (CC2)
Футбол. )
339 Женский софтбольный комплекс (SOF)
340 Женский футбол (SCO)
341 Женский софтбол (SOF)
343 Woodward Plaza
344 Техническое обслуживание зоны 3

Мебане, Myesha / Третий период

Mebane, Myesha / Третий период - TRK A
  • Дом
  • Наша школа
  • Академические программы
  • Будущие тигры
  • легкая атлетика
  • Клубы и мероприятия
  • Консультации
  • Родитель / Семья
  • Студенты
  • Учитель класс
      "
    • Абоке, Елена
    • Адамс, Ксавия
    • Бакстер, Лиам
    • Беверли, Рассвет
    • Брэдфорд, Келли
    • Бернс, Белинда
    • Кливленд, Валенсия
    • Кросс, Линдси
    • Эверс-Угроза, Эветт
    • Фагундес, Джо
    • зеленый, вереск
    • Густавсон, Шони
    • Хит, Джефф
    • Джонс, Артемус
    • Келлог, Кортни
    • Килановски, Иоанна
    • Lott, D'Vore
    • Луи, Брайан
    • Мартин, Крис
    • Мбиин, Раиса
    • Мебане, Меша
    • Мендоса-Лопес, Мануэль
    • Мейер, Карл
    • Минси, Шелби
    • Мурагури, Гилберт
    • Полсон, Мэриан
    • Перейра, Белинда
    • Рейнор-Джонс, Кимберли
    • Сами, Чандрес
    • Сами, Рохини
    • Смит, Такейша
    • Стаблфилд, Роберт
    • Тункман, Миясе
    • Валенсия, Бланка
    • Елдер, Лиза
    • Странный, Жасмин
    • Сайкс, Донна
    • Тернер, Кейтлин
  • Дистанционное обучение

Зависимость активации нейротрофическим фактором рецепторов тирозинкиназы Trk от клеточной сиалидазы | Гликобиология

Аннотация

Прямая связь между гликозилированием рецептора и активацией после взаимодействия естественного лиганда не наблюдалась.Здесь мы обнаруживаем механизм, контролирующий мембранную сиалидазу, который зависит от связывания лиганда с его рецептором, чтобы вызвать активность фермента, которая нацелена и десиалилирует рецептор и, следовательно, вызывает индукцию димеризации и активации рецептора. Мы также идентифицируем специфический сиалил α -2,3-связанный β-галактозильный сахарный остаток рецептора тирозинкиназы TrkA, который быстро подвергается действию и гидролизуется сиалидазой. Trk-экспрессирующие клетки и первичные нейроны коры после стимуляции специфическими нейротрофическими факторами роста проявляют высокую активность мембранной сиалидазы.Ингибиторы нейраминидазы, Тамифлю, BCX1812 и BCX1827, блокируют активность сиалидазы, индуцированную фактором роста нервов (NGF) в клетках TrkA-PC12 и нейротрофическим фактором мозга (BDNF) в первичных корковых нейронах. Напротив, ингибитор нейраминидазы, 2-дезокси-2,3-дегидро- N -ацетилнейраминовая кислота, специфичный для ганглиозидных сиалидаз плазматической мембраны Neu3 и Neu2, не оказывает ингибирующего действия на NGF-индуцированную pTrkA. Субъединица B холерного токсина, специфичная для ганглиозидов GM1, нанесенная на клетки TrkA-PC12, не оказывает ингибирующего действия на индуцированную NGF активность сиалидазы.Ростки нейритов, индуцированные TrkA-PC12, обработанными NGF, и обработанными BDNF PC12 nnr5 , стабильно трансфицированными рецепторами TrkB (TrkB-nnr5), значительно ингибируются Тамифлю. Наши результаты устанавливают новый способ регуляции активации рецептора его естественным лигандом и определяют новую функцию клеточных сиалидаз.

Введение

Нуклеиновые кислоты, белки и полисахариды - это три основных класса природных молекул, участвующих в передаче сигнала.Хотя структура и функциональная роль нуклеиновых кислот и белков хорошо известны, роль углеводов изучена гораздо меньше. Углеводы - это самый сложный и разнообразный класс молекул, обычно входящих в состав гликоконъюгатов (Werz and Seeberger 2005). Гликоконъюгаты могут быть гликопротеинами или гликолипидами и, как известно, опосредуют воспаление, межклеточное распознавание, иммунологические реакции, метастазирование и оплодотворение (Варки, 1993). Для секретируемых и связанных с клеточной мембраной рецепторов статус гликозилирования может быть важным требованием для их транслокации и функции.Например, частичное гликозилирование требуется для процессинга и / или гормон-связывающей активности рецептора инсулина (Ronnett et al., 1984), рецептора эпидермального фактора роста (EGF) (Slieker and Lane 1985; Soderquist and Carpenter 1984), никотинового ацетилхолина. рецептор (Merlie and Smith 1986) и члены класса рецепторов, связанных с G-белком, такие как рецептор вазоактивного кишечного пептида (Merlie and Smith 1986), рецептор соматостатина (Rens-Domiano and Reisine 1991) и β-адренергический рецептор (Сервантес-Оливье и др.1988; Rands et al. 1990). Однако прямая связь между гликозилированием и активацией рецептора после взаимодействия лиганда еще не наблюдалась.

Понимание роли гликозилирования в активации рецептора было получено на основе хорошо охарактеризованной модели рецепторов тирозин-протеинкиназ семейства TrkA, которые функционируют как сигнальные рецепторы для семейства нейротрофинов молекул фактора роста нервов (NGF). Мы показали, что высокоочищенная рекомбинантная транс-сиалидаза (TS), полученная из паразитов Trypanosoma cruzi , нацелена на рецепторы TrkA на TrkA-экспрессирующих клетках линии PC12 клеток феохромоцитомы крысы и совместно локализуется с интернализацией и фосфорилированием TrkA (pTrkA) (Woronowicz et al.2004 г.). TS имеет два типа каталитической активности (Colman and Smith 2002; Lee and Kim 2001): доминирующая сиалилтрансферазная активность, катализирующая перенос сиаловой кислоты к концевым акцепторам β-d-галактозы, и гораздо более низкая активность нейраминидазы, которая приводит к высвобождению сиаловой кислоты. из сиалил-олигосахаридов. Активность сиалидазы, но не сиалилтрансферазы TS, участвует в активации рецепторов TrkA. Подобные результаты наблюдались при использовании высокоочищенной рекомбинантной α-2,3-нейраминидазы ( Streptococcus pneumoniae ) (Woronowicz et al.2004 г.). В то же время Чуенкова и Перейра Перрин (2004) также представили доказательства того, что паразитов T. cruzi связывают TrkA через свою нейраминидазу ингибируемым NGF образом, что приводит к аутофосфорилированию TrkA, активации пути киназы PI3K / Akt и, в конечном итоге, , к выживанию клеток и росту нейритов. Их нейраминидаза T. cruzi не реагировала с рецептором нейротрофина p75 NTR (Chuenkova and PereiraPerrin 2004).

Когда NGF связывается со своим рецептором TrkA на нейроне, общепринятая теория состоит в том, что ретроградные сигналы выживания включают комплексы лиганд-рецептор, которые интернализуются в пузырьки (Bhattacharyya et al.1997; Grimes et al. 1996, 1997) и ретроградно транспортируется в тела клеток, обеспечивая нейрону сигналы выживания (Bhattacharyya et al. 1997; MacInnis and Campenot 2002; Riccio et al. 1997; Senger and Campenot 1997; Tsui-Pierchala and Ginty 1999; Watson et al. al. 1999a, 1999b). NGF ограничен синаптической областью, расположенной далеко от тела клетки, где, как полагают, он оказывает свой эффект (Jullien et al. 2002). Эта теория была поставлена ​​под сомнение. Другие исследования показывают, что сигналы выживания нейронов могут достигать клеточных тел без участия NGF, который их инициировал (MacInnis and Campenot 2002; Senger and Campenot 1997).Эти ретроградные сигналы выживания не зависят от интернализации и транспорта NGF. Эти данные привели к предположению, что связывание NGF с рецепторами TrkA в нервных окончаниях приводит к быстрому распространению NGF-независимой «волны» активации рецептора TrkA (Campenot and MacInnis 2004; MacInnis and Campenot 2002; Miller and Kaplan 2002). Эта концепция согласуется с недавним открытием лиганд-независимой волны активации рецептора EGF, происходящей из EGF (Verveer et al. 2000). Основываясь на этих находках, точный механизм активации NGF-независимого рецептора TrkA неясен (Campenot and MacInnis 2004; MacInnis and Campenot 2002; Miller and Kaplan 2002).Наши результаты показывают, что связывание NGF с TrkA индуцирует одну или несколько клеточных сиалидаз, которые специфически нацелены и гидролизуют сиалильные α-2-3-связанные β-галактозильные остатки TrkA, что является начальной стадией димеризации рецептора, интернализации и последующей активации в клетках, экспрессирующих Trk. и первичные корковые нейроны. Этого процесса достаточно для последующего развития разрастания нейритов в этих клетках.

Результаты

Идентификация специфических сиалильных α-2,3-связанных β-галактозильных остатков TrkA, участвующих в активации рецептора

Если десиалирование TrkA необходимо для активации рецептора после связывания NGF, то мы должны наблюдать начальное десиалирование фосфорилированного TrkA.Мы проверили это предположение, исследуя степень сиалирования иммунопреципитированных TrkA и pTrkA с использованием лектина Maackia amurensis (MAL-2), реактивного против остатков сиаловой кислоты, α-2,3-связанных с остатками галактозила. Клеточная линия TrkA-PC12 (чрезмерно экспрессирующая человеческие рецепторы TrkA в клеточной линии феохромоцитомы крысы PC12) (Hempstead et al. 1992) была использована в качестве хорошо охарактеризованной модели для изучения этого вопроса. После отсутствия обработки или обработки клеток TrkA-PC12 NGF или TS клетки лизировали и обрабатывали для иммунопреципитации pTrkA антителом против фосфо Trk (pTyr490) или неактивированного Trk антителом против Trk с последующим анализом лектинового блоттинга.MAL-2 значительно меньше реагировал с иммунопреципитированной pTrkA по сравнению с неактивированным контролем Trk (фиг. 1). Эти результаты предполагают, что pTrkA потеряла некоторые сиалил-α-2,3-связанные β-галактозильные остатки во время индуцированной NGF активации, что согласуется с сиалидазной активностью очищенного рекомбинантного TS.

Рис. 1.

Десиалилирование фосфорилированного TrkA по MAL-2-реактивным сиалил-α-2,3-связанным галактозильным концам в ответ на NGF и T .cruzi транс-сиалидаза. Клетки TrkA-PC12 выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых стеклянных предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином, в течение 24 часов перед стимуляцией либо 50 нг / мл NGF в течение 15 минут, либо 200 нг / мл TS. в течение 60 мин или оставить без обработки в качестве контроля (Ctrl). В панели ( A ) обработанные NGF или TS клетки лизировали и обрабатывали для иммунопреципитации фосфорилированного TrkA (pTrkA) с помощью аффинно очищенных поликлональных кроличьих антител против pTyr490. Нестимулированные контрольные (Ctrl) клетки лизировали аналогичным образом и обрабатывали для иммунопреципитации неактивированного TrkA антителом против Pan TrkA.На панели ( B ) все лизаты из одних и тех же клеток обрабатывали для иммунопреципитации общего TrkA с помощью пан-антитела против TrkA. Иммунопреципитированные рецепторы разделяли с помощью 8% SDS-PAGE геля с последующим анализом лектинового блоттинга MAL-2, козьими антителами против pTrkA или козьими антителами против Trk. Блоты зондировали биотинилированным лектином Maackia amurensis MAL-2 (MAL-2 специфически реагирует с сиаловой кислотой по α-2,3-связи), а затем стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), или вторичным антибиотиком, конъюгированным с HRP. козий IgG и Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus.Для определения белковой нагрузки гели окрашивали кумасси бриллиантовым синим. Количественный анализ проводился путем оценки средней плотности ± SEM пяти повторных измерений полос геля после коррекции фона с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. На панели ( C ) были проанализированы отношения плотности полосы тестового геля NGF или TS к Ctrl на панелях A и B. Каждая полоса на рисунке представляет отношение средней плотности (лиганд / Ctrl) ± SEM для 5–6 повторных измерений. Значимые различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с каждой группой, как указано.Лектиновые блоты представляют собой один из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Рис. 1.

Десиалилирование фосфорилированного TrkA на MAL-2-реактивных сиалил-α-2,3-связанных концах галактозила в ответ на NGF и T . cruzi транс-сиалидаза. Клетки TrkA-PC12 выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых стеклянных предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином, в течение 24 часов перед стимуляцией либо 50 нг / мл NGF в течение 15 минут, либо 200 нг / мл TS. в течение 60 мин или оставить без обработки в качестве контроля (Ctrl).В панели ( A ) обработанные NGF или TS клетки лизировали и обрабатывали для иммунопреципитации фосфорилированного TrkA (pTrkA) с помощью аффинно очищенных поликлональных кроличьих антител против pTyr490. Нестимулированные контрольные (Ctrl) клетки лизировали аналогичным образом и обрабатывали для иммунопреципитации неактивированного TrkA антителом против Pan TrkA. На панели ( B ) все лизаты из одних и тех же клеток обрабатывали для иммунопреципитации общего TrkA с помощью пан-антитела против TrkA. Иммунопреципитированные рецепторы разделяли с помощью 8% SDS-PAGE геля с последующим анализом лектинового блоттинга MAL-2, козьими антителами против pTrkA или козьими антителами против Trk.Блоты зондировали биотинилированным лектином Maackia amurensis MAL-2 (MAL-2 специфически реагирует с сиаловой кислотой по α-2,3-связи), а затем стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), или вторичным антибиотиком, конъюгированным с HRP. козий IgG и Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus. Для определения белковой нагрузки гели окрашивали кумасси бриллиантовым синим. Количественный анализ проводился путем оценки средней плотности ± SEM пяти повторных измерений полос геля после коррекции фона с помощью Corel Photo Paint 8.0 программное обеспечение. На панели ( C ) были проанализированы отношения плотности полосы тестового геля NGF или TS к Ctrl на панелях A и B. Каждая полоса на рисунке представляет отношение средней плотности (лиганд / Ctrl) ± SEM для 5–6 повторных измерений. Значимые различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с каждой группой, как указано. Лектиновые блоты представляют собой один из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Если клеточная сиалидаза (ы) участвует в активации TrkA, должно быть возможно заблокировать ее активность до стимуляции NGF.Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали различными лектинами в различных дозах (0,1–100 мкг / мл) в течение 30 мин, промывали и стимулировали 50 нг NGF / мл в течение 15 мин. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали кроличьим анти-pTyr490 Trk с последующим использованием Alexa Fluor568 против кроличьего IgG. Окрашенные клетки визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии. MAL-2 полностью блокирует индуцированную NGF pTrkA дозозависимым образом (рис. 2А). Напротив, лектин Sambucus nigra (SNA, которая связывается с α-2,6 сиаловой кислотой, связанной с концевой галактозой и, в меньшей степени, с α-2,3 связью), арахисовый агглютинин (PNA, галактозил (β-1,3) N -ацетилгалактозамин), сукцинилированный агглютинин зародышей пшеницы (sWGA, остатков N -ацетилглюкозамина), агглютинин соевых бобов (SBA, концевой α- или β-связанный N -ацетилгалактозамин), - Ulex europaeus IEA 900 I64 (агглютин UEA , α-связанная фукоза), Ricinus communis агглютинин I (RCA-1, галактоза и N -ацетилгалактозамин) и Dolichos biflorus агглютинин (DBA, α-связанный N -ацетилгалактозамин) не блокируют NGF- индуцированная экспрессия pTrkA.Примечательно, что ни обработка TrkA-экспрессирующих клеток MAL-2, ни SNA не блокирует связывание NGF с TrkA (рис. 2B). Вместе эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что связывание MAL-2 с TrkA-экспрессирующими клетками при α-2,3 сиаловой кислоте, связанной с терминальной галактозой, блокирует индуцированную NGF активность клеточной сиалидазы от нацеливания на рецептор, и поэтому он больше не может гидролизоваться. эти остатки сиаловой кислоты и активируют TrkA.

Рис. 2.

( A ) Связывание MAL-2 с сиалильными α-2,3-связанными β-галактозильными остатками рецепторов TrkA блокирует индуцированное NGF фосфорилирование TrkA (pTrkA).Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали различными лектинами в указанных концентрациях (0,1–100 мкг / мл) в течение 30 минут, промывали и стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали поликлональными козьими анти-pTyr490 Trk, а затем кроличьими анти-козьими IgG Alexa Fluor568. Изображения были получены с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели для MAL-2 и SNA с использованием Corel Photo Paint 8.0 программное обеспечение. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в соответствующих изображениях. Данные представляют собой представление одного из двух экспериментов, показывающих идентичные результаты. ( B ) Биотинилированный NGF связывается с клетками TrkA-PC12, предварительно обработанными MAL-2. Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали MAL-2 или SNA при 100 мкг / мл в течение 30 минут, промывали и стимулировали 50 нг / мл биотинилированного NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали FITC-стрептавидином.Изображения были получены с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводили, как описано на панели A. Каждая полоса на фигурах представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в соответствующих изображениях. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты.

Рис. 2.

( A ) Связывание MAL-2 с сиалильными α-2,3-связанными β-галактозильными остатками рецепторов TrkA блокирует индуцированное NGF фосфорилирование TrkA (pTrkA).Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали различными лектинами в указанных концентрациях (0,1–100 мкг / мл) в течение 30 минут, промывали и стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали поликлональными козьими анти-pTyr490 Trk, а затем кроличьими анти-козьими IgG Alexa Fluor568. Изображения были получены с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели для MAL-2 и SNA с использованием Corel Photo Paint 8.0 программное обеспечение. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в соответствующих изображениях. Данные представляют собой представление одного из двух экспериментов, показывающих идентичные результаты. ( B ) Биотинилированный NGF связывается с клетками TrkA-PC12, предварительно обработанными MAL-2. Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали MAL-2 или SNA при 100 мкг / мл в течение 30 минут, промывали и стимулировали 50 нг / мл биотинилированного NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали FITC-стрептавидином.Изображения были получены с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводили, как описано на панели A. Каждая полоса на фигурах представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в соответствующих изображениях. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты.

Если NGF-индуцированная pTrkA включает гидролиз сиалильных α-2,3-связанных β-галактозильных остатков, то связывание MAL-2 с pTrkA должно иметь заметно сниженную совместную локализацию с pTrkA в клетках TrkA-PC12, стимулированных NGF, по сравнению с неактивированными. TrkA.Чтобы проверить это, клетки TrkA-PC12 обрабатывали NGF в течение 15 минут, TS или мутантным TS остатком глутаминовой кислоты в положении 98, заменяя аспарагиновую кислоту (TSΔAsp98-Glu) (Laroy and Contreras 2000; Woronowicz et al. 2004) в течение 60 минут. или были оставлены без обработки в качестве контроля. Их фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали биотинилированным MAL-2. После обширной промывки к клеткам добавляли поликлональные кроличьи антитела против pTyr490, специфичные к pTrkA, или поликлональные кроличьи антитела против pan Trk, с последующим одновременным добавлением конъюгированного с флуоресцеином стрептавидина и Alexa Fluor568 против кроличьих IgG.Клетки визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа (инвертированный конфокальный микроскоп Leica TCS SP2 MP). Как показано на рисунке 3A, MAL-2 связывается с TrkA на клетках TrkA-PC12 и совместно локализуется с неактивированным TrkA (наложение 71%), но значительно снижается с помощью NGF-индуцированного pTrkA (39% наложение) или TS-индуцированного pTrkA (31% наложение). В течение 60-минутного периода каталитически неактивный мутант TSΔAsp98-Glu не гидролизует α-2,3-связанные сиаловые кислоты, что подтверждается 59% -ным перекрытием совместной локализации MAL-2 с неактивированным TrkA.Эти последние результаты согласуются с нашими предыдущими открытиями, что каталитически неактивный мутант TSΔAsp98-Glu не индуцирует pTrkA, через 60 минут после обработки клеток TrkA-PC12 (Woronowicz et al. 2004). Таким образом, оказывается, что рецепторы pTrkA, индуцированные NGF, имеют меньше сиалил-α-2,3-связанных β-галактозильных остатков по сравнению с неактивированным TrkA.

Рис. 3.

( A ) MAL-2 колокализуется с TrkA, но минимально с pTrkA. Клетки TrkA-PC12 выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином, в течение 24 ч перед стимуляцией 50 нг / мл NGF (15 мин), 200 нг / мл TS ( 60 мин), 200 нг / мл мутантного TSΔAsp98-Glu (60 мин) или оставались без обработки.Клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали биотинилированным-MAL-2 в течение 30 мин. После обширной промывки клетки иммуноокрашивали кроличьими антителами против Trk или кроличьими антителами против pTyr490 из Trk, как указано, с последующим одновременным применением стрептавидина, конъюгированного с флуоресцеином (FITC) (зеленый) и Alexa Fluor568 против кроличьего IgG (красный). Изображения визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа (инвертированный конфокальный микроскоп Leica TCS SP2 MP) с использованием 100-кратного объектива (масло). Изображения были получены с использованием z-стадии из 8–10 изображений на ячейку при 0.Шаги 5 мм. Чтобы вычислить степень колокализации (желтый цвет) в выбранных изображениях, был измерен коэффициент корреляции Пирсона и выражен в процентах с помощью программного обеспечения Image Pro Plus. Каждая полоса на рисунке представляет собой средний коэффициент корреляции Пирсона ± SEM для четырех независимых экспериментов ( n ). Изображения представляют один из четырех ( n ) независимых экспериментов, показывающих аналогичные результаты. Значительные различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с группами MAL-2 и TrkA.( B ) И MAL-2, и SNA связываются с рецепторами TrkA на клетках TrkA-PC12, стимулированных NGF, но только SNA совместно локализует pTrkA. Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали биотинилированными лектинами в указанных концентрациях в течение 30 минут, промывали и затем стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали кроличьим анти-pTyr490 Trk с одновременным последующим одновременным введением Alexa Fluor568 против кроличьего IgG (красный) и стрептавидин-FITC (зеленый). Клетки визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа с объективом 100 × (масло).Изображения были получены с использованием z-стадии из 8–10 изображений на ячейку с шагом 0,5 мм, а затем обработаны и объединены с помощью программного обеспечения LCS Lite. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднюю амплитуду ± SEM связывания лектина или экспрессии pTrkA для всех клеток ( n ) на соответствующих изображениях. Указанные существенные различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета сравнивают с группой NGF. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Рис. 3.

( A ) MAL-2 колокализуется с TrkA, но минимально с pTrkA. Клетки TrkA-PC12 выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином, в течение 24 ч перед стимуляцией 50 нг / мл NGF (15 мин), 200 нг / мл TS ( 60 мин), 200 нг / мл мутантного TSΔAsp98-Glu (60 мин) или оставались без обработки. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали биотинилированным-MAL-2 в течение 30 мин. После обширной промывки клетки иммуноокрашивали кроличьими антителами против Trk или кроличьими антителами против pTyr490 из Trk, как указано, с последующим одновременным применением стрептавидина, конъюгированного с флуоресцеином (FITC) (зеленый) и Alexa Fluor568 против кроличьего IgG (красный).Изображения визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа (инвертированный конфокальный микроскоп Leica TCS SP2 MP) с использованием 100-кратного объектива (масло). Изображения были получены с использованием z-стадии из 8–10 изображений на ячейку с шагом 0,5 мм. Чтобы вычислить степень колокализации (желтый цвет) в выбранных изображениях, был измерен коэффициент корреляции Пирсона и выражен в процентах с помощью программного обеспечения Image Pro Plus. Каждая полоса на рисунке представляет собой средний коэффициент корреляции Пирсона ± SEM для четырех независимых экспериментов ( n ).Изображения представляют один из четырех ( n ) независимых экспериментов, показывающих аналогичные результаты. Значительные различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с группами MAL-2 и TrkA. ( B ) И MAL-2, и SNA связываются с рецепторами TrkA на клетках TrkA-PC12, стимулированных NGF, но только SNA совместно локализует pTrkA. Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали биотинилированными лектинами в указанных концентрациях в течение 30 минут, промывали и затем стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут.Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали кроличьим анти-pTyr490 Trk с одновременным последующим одновременным введением Alexa Fluor568 против кроличьего IgG (красный) и стрептавидин-FITC (зеленый). Клетки визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа с объективом 100 × (масло). Изображения были получены с использованием z-стадии из 8–10 изображений на ячейку с шагом 0,5 мм, а затем обработаны и объединены с помощью программного обеспечения LCS Lite. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднюю амплитуду ± SEM связывания лектина или экспрессии pTrkA для всех клеток ( n ) на соответствующих изображениях.Указанные существенные различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета сравнивают с группой NGF. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Чтобы определить специфичность индуцированной NGF активности клеточной сиалидазы в TrkA-экспрессирующих клетках, мы спросили, действительно ли клеточная сиалидаза воздействует на и гидролизует сиалил-α-2,3-связанные β-галактозильные остатки на TrkA. рецепторы. Чтобы проверить это, мы предположили, что связывание MAL-2 с сиалильными α-2,3-связанными β-галактозильными остатками на TrkA-экспрессирующих клетках не будет колокализоваться с NGF-индуцированной pTrkA.Обоснование этой гипотезы проистекает из данных на Рисунке 2A. Напротив, связывание SNA с сиалильными α-2,6-связанными β-галактозильными остатками на TrkA-экспрессирующих клетках будет колокализоваться с pTrkA. Здесь клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали либо биотинилированной SNA, либо биотинилированным MAL-2 при 100 мкг / мл в течение 30 минут, промывали и затем стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали кроличьим анти-pTyr490 Trk с одновременным добавлением Alexa Fluor568 против кроличьего IgG и стрептавидин-флуоресцеина.Наложенные изображения получены с помощью конфокальной микроскопии. Как показано на рисунке 3B, SNA связывается с рецепторами TrkA на TrkA-экспрессирующих клетках PC12 и совместно локализуется с индуцированной NGF pTrkA. Напротив, лектин MAL-2 также связывается с клетками TrkA-PC12 без какой-либо совместной локализации с pTrkA. Эти результаты показывают, что SNA, связанная с сиалильными α-2,6-связанными β-галактозильными остатками, не блокирует активацию TrkA, тогда как MAL-2, связанный с сиалильными α-2,3-связанными β-галактозильными остатками, блокирует pTrkA. Эти наблюдения предполагают, что сиалил-2,3-связанные β-галактозильные остатки являются мишенями и гидролизуются во время индуцированной NGF активации TrkA, тогда как сиалил-α-2,6-связанные β-галактозильные остатки сохраняются в этом процессе.

Связывание NGF с рецепторами TrkA индуцирует клеточную сиалидазу (ы)

Чтобы подтвердить, что связывание NGF с его рецептором TrkA индуцирует клеточную сиалидазу (ы), клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали очищенными ингибиторами нейраминидазы, осельтамивир фосфатом (Тамифлю), DANA, BCX-1812 и BCX-1827 в различных концентрациях (0,1– 100 мкМ) в течение 2 часов, а затем стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали козьим анти-pTyr490 Trk, а затем кроличьим антителом против козьего IgG Alexa Fluor568 и визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии.Все ингибиторы нейраминидазы, за исключением DANA, блокируют индуцированную NGF экспрессию pTrkA дозозависимым образом (рис. 4A). Даже в более высокой дозе (500 мкМ) DANA не блокирует индуцированную NGF и TS экспрессию pTrkA при Вестерн-блоттинге (рис. 4В). Примечательно, что DANA является слабым ингибитором TS трипаносомы (Amaya et al. 2003; Paris et al. 2005), и N -ацетильная и глицериновая части DANA распознаются цитозольными остатками сиалидазы Neu2, которые не являются общими для бактериальных сиалидаз и вирусные нейраминидазы (Chavas et al.2005). В совокупности результаты DANA, показанные на фиг. 4, предполагают, что активность клеточной сиалидазы, индуцированная NGF, не является сиалидазой Neu2.

Рис. 4.

Ингибиторы нейраминидазы, Тамифлю, BCX-1812 и BCX-1827, за исключением DANA, блокируют экспрессию pTrkA, индуцированную NGF. ( A ) Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали Тамифлю (чистый фосфат осельтамивира), DANA, BCX-1812 или BCX-1827 в указанных концентрациях в течение 1 ч, а затем 50 нг / мл NGF в течение 15 мин.Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали с помощью козьего анти-pTyr490 TrkA, а затем кроличьего антитела против козьего IgG Alexa Fluor568. Окрашенные клетки визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток ( n ) в пределах соответствующих изображений.Звездочка (*) представляет значимые различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета по сравнению с контролем (Ctrl) в каждой группе. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты. ( B ) Вестерн-блоты обработки DANA клеток TrkA-PC12 на экспрессию pTrkA, индуцированную NGF и TS. Клетки выращивали в 25-см колбах 2 при 90% конфлюэнтности. Их предварительно обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки в качестве контроля.Клетки стимулировали 50 нг / мл ФРН в течение 15 мин или 200 нг / мл ИР по массе и немедленно лизировали в 500 мкл 1 × буфера для образцов SDS. К каждому клеточному лизату добавляли 3% 2-меркаптоэтанол и кипятили 10 мин. Лизаты клеток разделяли 8% гелем SDS-PAGE и блоты зондировали поликлональным козьим антителом против pY490 Trk, затем конъюгированным с HRP вторичным антителом против козьего IgG и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus. Концентрация образца для загрузки геля определялась реагентом BioRad.

Фиг.4.

Ингибиторы нейраминидазы, Тамифлю, BCX-1812 и BCX-1827, за исключением DANA, блокируют экспрессию pTrkA, индуцированную NGF. ( A ) Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали Тамифлю (чистый фосфат осельтамивира), DANA, BCX-1812 или BCX-1827 в указанных концентрациях в течение 1 ч, а затем 50 нг / мл NGF в течение 15 мин. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали с помощью козьего анти-pTyr490 TrkA, а затем кроличьего антитела против козьего IgG Alexa Fluor568. Окрашенные клетки визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x.Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток ( n ) в пределах соответствующих изображений. Звездочка (*) представляет значимые различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета по сравнению с контролем (Ctrl) в каждой группе. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.( B ) Вестерн-блоты обработки DANA клеток TrkA-PC12 на экспрессию pTrkA, индуцированную NGF и TS. Клетки выращивали в 25-см колбах 2 при 90% конфлюэнтности. Их предварительно обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки в качестве контроля. Клетки стимулировали 50 нг / мл ФРН в течение 15 мин или 200 нг / мл ИР по массе и немедленно лизировали в 500 мкл 1 × буфера для образцов SDS. К каждому клеточному лизату добавляли 3% 2-меркаптоэтанол и кипятили 10 мин. Лизаты клеток разделяли 8% гелем SDS-PAGE и блоты зондировали поликлональным козьим антителом против pY490 Trk, затем конъюгированным с HRP вторичным антителом против козьего IgG и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus.Концентрация образца для загрузки геля определялась реагентом BioRad.

Для дальнейшего изучения ингибирующего действия Тамифлю на NGF-индуцированную экспрессию pTrkA в клетках TrkA-PC12, клетки, предварительно обработанные 400-500 мкМ Тамифлю в течение 30 минут, с последующим введением 50 нг / мл NGF или оставленные без обработки в качестве контроля, анализировали на экспрессию pTrkA. с помощью проточной цитометрии (FACS) и вестерн-блоттинга. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали конъюгированным с FITC козьим IgG против pTyr490 Trk. Клетки, предварительно обработанные Тамифлю и стимулированные NGF, показали сдвиг в средней флуоресценции FACS (108.9) по сравнению с клетками, обработанными NGF (131,2), для 98% закрытых клеток (фиг. 5A). Чтобы подтвердить ингибирование Тамифлю индуцированной NGF активации TrkA, клетки TrkA-PC12, предварительно обработанные Тамифлю и NGF, лизировали, и лизаты подвергали процессингу вестерн-блоттинга козьими антителами против pTyr490 Trk. Данные на Фигуре 5B ясно показывают, что Тамифлю значительно ингибировал NGF-индуцированную pTrkA по сравнению с клетками, обработанными NGF. Блот лизата необработанных контрольных клеток не показал pTrkA.

Фиг.5.

Анализ проточной цитометрии Тамифлю ингибирования NGF-индуцированной экспрессии pTrkA в клетках TrkA-PC12. ( A ) Клетки, выращенные в 25-см колбах 2 при 90% слиянии, обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки. Их стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут и немедленно фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали конъюгированным с FITC козьим антителом IgG против pY490 Trk. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии Beckman Coulter Epics XL-MCL и программного обеспечения Expo32 ADC (Beckman Coulter).Отображаются наложенные гистограммы. Необработанные контрольные клетки представлены гистограммой, закрашенной черным цветом. Клетки, предварительно обработанные Тамифлю и стимулированные NGF, изображены гистограммой, заполненной серым цветом. Клетки, обработанные NGF, показаны незаполненной гистограммой с черной линией. Средняя флуоресценция для каждой гистограммы указана для 7000 приобретенных клеток (98% стробированных). Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты. ( B ) Вестерн-блоттинг ингибирования Тамифлю экспрессии pTrkA, индуцированной NGF.Клетки выращивали в колбах размером 75 см 2 при 90% конфлюэнтности. Их предварительно обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без лечения. Клетки стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 мин и немедленно лизировали в 500 мкл 1 × буфера для образцов SDS. К каждому клеточному лизату добавляли 3% 2-меркаптоэтанол и кипятили 10 мин. Лизаты клеток разделяли 8% гелем SDS-PAGE и блоты зондировали поликлональным козьим антителом против pY490 Trk, затем конъюгированным с HRP вторичным антителом против козьего IgG и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus.Концентрация образца для загрузки геля определялась реагентом BioRad. Количественный анализ проводился путем оценки плотности полосы 140 кДа с поправкой на пиксели фона в каждой полосе с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднюю скорректированную плотность полосы ± SEM для пяти повторных измерений ( n = 5). Значительные различия с достоверностью 95% были получены с использованием теста множественного сравнения Даннета по сравнению с группой NGF. Данные представляют собой представление одного из четырех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Рис. 5.

Анализ проточной цитометрии Тамифлю ингибирования NGF-индуцированной экспрессии pTrkA в клетках TrkA-PC12. ( A ) Клетки, выращенные в 25-см колбах 2 при 90% слиянии, обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки. Их стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 минут и немедленно фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали конъюгированным с FITC козьим антителом IgG против pY490 Trk. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии Beckman Coulter Epics XL-MCL и программного обеспечения Expo32 ADC (Beckman Coulter).Отображаются наложенные гистограммы. Необработанные контрольные клетки представлены гистограммой, закрашенной черным цветом. Клетки, предварительно обработанные Тамифлю и стимулированные NGF, изображены гистограммой, заполненной серым цветом. Клетки, обработанные NGF, показаны незаполненной гистограммой с черной линией. Средняя флуоресценция для каждой гистограммы указана для 7000 приобретенных клеток (98% стробированных). Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих аналогичные результаты. ( B ) Вестерн-блоттинг ингибирования Тамифлю экспрессии pTrkA, индуцированной NGF.Клетки выращивали в колбах размером 75 см 2 при 90% конфлюэнтности. Их предварительно обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без лечения. Клетки стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 мин и немедленно лизировали в 500 мкл 1 × буфера для образцов SDS. К каждому клеточному лизату добавляли 3% 2-меркаптоэтанол и кипятили 10 мин. Лизаты клеток разделяли 8% гелем SDS-PAGE и блоты зондировали поликлональным козьим антителом против pY490 Trk, затем конъюгированным с HRP вторичным антителом против козьего IgG и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus.Концентрация образца для загрузки геля определялась реагентом BioRad. Количественный анализ проводился путем оценки плотности полосы 140 кДа с поправкой на пиксели фона в каждой полосе с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднюю скорректированную плотность полосы ± SEM для пяти повторных измерений ( n = 5). Значительные различия с достоверностью 95% были получены с использованием теста множественного сравнения Даннета по сравнению с группой NGF. Данные представляют собой представление одного из четырех экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Чтобы подтвердить, что Тамифлю может ингибировать индуцированный NGF разрастание нейритов, были исследованы удлинения нейритов в клетках TrkB-nnr5, обработанных NGF, и обработанных нейротрофическим фактором головного мозга (BDNF) после предварительной обработки Тамифлю. Когда клетки стимулировали 100 нг / мл NGF или 100 нг / мл BDNF в течение 3 дней в культуре в отсутствие или в присутствии 200 или 500 мкМ Тамифлю, клетки увеличивали рост нейритов, но они были значительно подавлены Тамифлю (рис. 6). Эти данные свидетельствуют о том, что ингибирование Тамифлю клеточной сиалидазы, индуцированное NGF- или BDNF-стимулированными экспрессирующими Trk клетками, не только блокирует фосфорилирование Trk, но также предотвращает индуцированную нейротрофическим фактором дифференцировку клеток (рост нейритов).

Рис. 6.

Тамифлю подавляет рост нейритов в клетках TrkA-PC12, стимулированных NGF, и клетках TrkB-nnr5, стимулированных BDNF. Клетки выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, либо в среде, содержащей 5% лошадиной сыворотки и 3% FBS, в течение 3 дней (Ctrl) в среде, содержащей 100 нг / мл NGF для клеток TrkA-PC12. или 100 нг / мл BDNF для клеток TrkB-nnr5, или в комбинации с 200–500 мкМ Тамифлю и NGF или BDNF с соответствующими клетками.Клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали фаллоидин-родамином. Окрашивание клеток анализировали качественно, используя эпифлуоресцентную микроскопию, и количественно, подсчитывая количество клеток с множественными отростками нейритов (≥200 от общего числа клеток; одно или несколько отростков больше, чем 2 клеточных тела в длину). Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты. Значительные различия с достоверностью 95% были получены с использованием теста множественного сравнения Даннета по сравнению с лигандом в каждой группе.

Рис. 6.

Тамифлю подавляет рост нейритов в клетках TrkA-PC12, стимулированных NGF, и клетках TrkB-nnr5, стимулированных BDNF. Клетки выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, либо в среде, содержащей 5% лошадиной сыворотки и 3% FBS, в течение 3 дней (Ctrl) в среде, содержащей 100 нг / мл NGF для клеток TrkA-PC12. или 100 нг / мл BDNF для клеток TrkB-nnr5, или в комбинации с 200–500 мкМ Тамифлю и NGF или BDNF с соответствующими клетками. Клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали фаллоидин-родамином.Окрашивание клеток анализировали качественно, используя эпифлуоресцентную микроскопию, и количественно, подсчитывая количество клеток с множественными отростками нейритов (≥200 от общего числа клеток; одно или несколько отростков больше, чем 2 клеточных тела в длину). Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты. Значительные различия с достоверностью 95% были получены с использованием теста множественного сравнения Даннета по сравнению с лигандом в каждой группе.

Чтобы продвинуть нашу гипотезу о том, что связывание NGF с TrkA индуцирует клеточную сиалидазную активность, был необходим анализ для обнаружения сиалидазной активности в жизнеспособных клетках.Клетки TrkA-PC12 выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм в среде, содержащей 5% лошадиной сыворотки и 4% эмбриональной сыворотки теленка, и обрабатывали 50 нг / мл NGF через различные интервалы времени в присутствии или в отсутствие 200 мкМ Тамифлю или оставленные рассматриваются как контрольные. После удаления среды 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] в трис-буферном солевом растворе с pH 7,4 добавляли к контрольным необработанным клеткам, клетки, обработанные 50 нг / мл NGF или в комбинации с NGF и 200 мкМ Тамифлю.Как показано на Фигуре 7A, обработка NGF клеток TrkA-PC12 индуцирует активность сиалидазы в течение 6 минут, о чем свидетельствует ореол флуоресценции (синий цвет), окружающий клетки, вызванный эмиссией свободного 4-метилумбеллиферона, гидролизованного из субстрата 4-MUNANA, по сравнению с необработанные контрольные клетки. Тамифлю полностью блокирует индуцированную NGF активность клеточной сиалидазы в этих клетках. Когда клетки, экспрессирующие TrkA, были предварительно обработаны MAL-2 с последующим добавлением NGF и 4-MUNANA, также возник ореол флуоресценции, предполагающий, что NGF индуцирует активацию клеточной сиалидазы даже в присутствии MAL-2 (фиг. 7B).Клетки, обработанные одним MAL-2, не проявляют активности сиалидазы. Эти данные снова указывают на то, что MAL-2 не блокирует связывание NGF со своим рецептором, а связывание NGF с его рецептором индуцирует активацию клеточной сиалидазы на поверхности клетки даже в присутствии MAL-2. Если рецептор TrkA является критическим в процессе активации сиалидазы (ов), то мы не должны ожидать увидеть флуоресценцию в обработанных NGF TrkA-дефицитных мутантных клетках с дефицитом тирозинкиназы (PC12 nnr5 ). Данные на Рисунке 7C ясно показывают, что это так.Мы также поставили под вопрос, является ли флуоресценция, окружающая клетки, экспрессирующие TrkA, обработанные NGF, секретируемой сиалидазой (ами). Среду отбирали из реакционных лунок, содержащих жизнеспособные клетки, и сразу же добавляли к субстрату 4-MUNANA. К субстрату 4-MUNANA также добавляли сиалидазу положительного контроля ( Clostridium perfringens ), которая имеет удельную активность 1 ед. На 1 мкмоль N -ацетилнейраминовой кислоты в минуту. Как показано на фиг. 7D, флуоресценция, окружающая обработанные NGF клетки, показанная на фиг. 7A, не является следствием какой-либо формы секретируемой или сбрасываемой сиалидазы из клеток.Поскольку сиалидаза Neu3 плазматической мембраны специфична для ганглиозидов GM1 (Duchemin et al. 2002; Kimura et al. 2001; Rabin and Mocchetti 1995), мы спросили, может ли сиалидаза Neu3 быть ключевым игроком в нашей активности сиалидазы, индуцированной NGF. Чтобы проверить это, GM1-специфическая субъединица холерного токсина B (CTX-B), добавленная к клеткам TrkA-PC12 в присутствии субстрата 4-MUNANA, и NGF не блокирует активность сиалидазы, индуцированную NGF (рис. 7E). Кроме того, DANA, добавленный к клеткам в присутствии 4-MUNANA и NGF, не блокирует индуцированную NGF активность сиалидазы (фиг. 7E).Эти последние данные указывают на то, что Neu3 плазматической мембраны и цитозольные сиалидазы Neu2 могут не быть ключевыми игроками в индуцированной NGF активности сиалидазы.

Рис. 7.

Связывание NGF с TrkA индуцирует сиалидазную активность в клетках TrkA-PC12, но не в TrkA-дефицитных клетках PC12 nnr5 . Клетки TrkA-PC12 выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм в среде, содержащей 5% лошадиной и 4% фетальной сыворотки теленка. ( A ) После удаления среды 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] (Sigma) в буферном трис-солевом растворе, pH 7 .4 добавляли в каждую лунку отдельно (Ctrl) с 50 нг / мл NGF или в комбинации NGF и 400 мкМ Тамифлю. ( B ) Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали 100 мкг / мл MAL-2 в течение 45 минут или оставляли без обработки. После удаления среды и промывки в каждую лунку добавляли 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA в забуференном трис-солевом растворе pH 7,4 в комбинации с 50 нг / мл NGF или без него. ( C ) TrkA-дефицитные клетки PC12 nnr5 использовали, как описано в (A). ( D ) Среду (20 мкл) отбирали из указанных лунок и добавляли к 20 мкл субстрата 4-MUNANA.Положительный контроль сиалидазы ( Clostridium perfringens ) (Sigma) (10 мкл; с удельной активностью 1 ед. На 1,0 мкмоль N -ацетилнейраминовой кислоты в минуту) добавляли к 20 мкл 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA. ( E ) Субстрат 4-MUNANA (2,04 мМ) в трис-буферном солевом растворе pH 7,4 добавляли в каждую лунку отдельно (Ctrl) с 50 нг / мл NGF или в сочетании с NGF и 400 мкг / мл субъединицы B холерного токсина ( CTX-B) или NGF и 500 мкМ DANA. Субстрат гидролизуется сиалидазой с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм (синий цвет) после возбуждения при 365 нм.Флуоресцентные изображения были получены через 10 мин с использованием эпифлуоресцентной микроскопии (объектив 40 ×). Данные представляют собой представление одного из пяти независимых экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Рис. 7.

Связывание NGF с TrkA индуцирует сиалидазную активность в клетках TrkA-PC12, но не в TrkA-дефицитных клетках PC12 nnr5 . Клетки TrkA-PC12 выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм в среде, содержащей 5% лошадиной и 4% фетальной сыворотки теленка. ( A ) После удаления среды 2.В каждую лунку отдельно добавляли 04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] (Sigma) в трис-буферном солевом растворе pH 7,4 (Ctrl) с 50 нг / мл NGF или в комбинации с NGF и 400 мкМ Тамифлю. ( B ) Клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали 100 мкг / мл MAL-2 в течение 45 минут или оставляли без обработки. После удаления среды и промывки в каждую лунку добавляли 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA в забуференном трис-солевом растворе pH 7,4 в комбинации с 50 нг / мл NGF или без него. ( C ) TrkA-дефицитные клетки PC12 nnr5 использовали, как описано в (A).( D ) Среду (20 мкл) отбирали из указанных лунок и добавляли к 20 мкл субстрата 4-MUNANA. Положительный контроль сиалидазы ( Clostridium perfringens ) (Sigma) (10 мкл; с удельной активностью 1 ед. На 1,0 мкмоль N -ацетилнейраминовой кислоты в минуту) добавляли к 20 мкл 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA. ( E ) Субстрат 4-MUNANA (2,04 мМ) в трис-буферном солевом растворе pH 7,4 добавляли в каждую лунку отдельно (Ctrl) с 50 нг / мл NGF или в сочетании с NGF и 400 мкг / мл субъединицы B холерного токсина ( CTX-B) или NGF и 500 мкМ DANA.Субстрат гидролизуется сиалидазой с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм (синий цвет) после возбуждения при 365 нм. Флуоресцентные изображения были получены через 10 мин с использованием эпифлуоресцентной микроскопии (объектив 40 ×). Данные представляют собой представление одного из пяти независимых экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

Мы также проверили, может ли NGF-индуцированная сиалидазная активность наблюдаться в клеточных суспензиях клеток TrkA-PC12. К 100 мкл клеточной суспензии (3–4 × 10 6 клеток / мл) от 95% слияния клеток в 25-см пробирках 2 бессывороточной среды добавляли 50 нг / мл NGF через различные интервалы времени или не обрабатывали в качестве контроля.Обработанные NGF и необработанные клетки (3 × 10 5 клеток) немедленно добавляли к субстратному буферу (20 мМ Трис и 30 мМ NaCl), содержащему апротинин, лейпептин, фенилметилсульфонилфторид (PMSF) и 0,05 мМ 4-MUNANA в кюветах с или без присутствия 200 мкМ Тамифлю, BCX-1812 или BCX-1827. Показания интенсивности флуоресценции немедленно снимаются в течение 15 минут с использованием флуоресцентного спектрофотометра Varian Cary Eclipse при низких и средних настройках детектора напряжения ФЭУ с использованием флуоресцентного излучения при 450 нм и возбуждения при 365 нм.Активность сиалидазы в образцах клеток (3 × 10 5 клеток) рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы и выражали в наноединицах (нЕ) на мг 4-MUNANA для общего числа клеток. Каждая полоса на Фигуре 8A представляет собой среднее значение ± SEM активности сиалидазы с поправкой на фоновую активность эндогенной сиалидазы в необработанных клетках из трех независимых экспериментов. Данные ясно показывают, что NGF индуцирует активность сиалидазы в клетках TrkA-PC12 в течение 15 с, и эта активность блокируется ингибиторами нейраминидазы, Тамифлю, BCX-1812 и BCX-1827 (фигура 8B).Примечательно, что быстрая активность сиалидазы в суспензиях клеток после обработки NGF предполагает раннюю активность сиалидазы с последующей экспрессией на клеточной мембране (фиг. 7A).

Рис. 8.

NGF-индуцированная сиалидазная активность в клеточных суспензиях клеток TrkA-PC12. Клетки TrkA-PC12 при 90% конфлюэнтности в 25-см колбах 2 ресуспендировали в 500 мкл бессывороточной среды. ( A ) К 3–4 × 10 5 общих клеток добавляли 50 нг / мл NGF в указанные моменты времени, а оставшиеся клетки оставляли необработанными в качестве контроля.Активность сиалидазы в образцах клеток рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы и выражали в наноединицах на мг 4-MUNANA после вычитания эндогенной фоновой активности сиалидазы в необработанных клетках. Среднее значение ± SEM фоновой активности эндогенной сиалидазы в контрольных необработанных клетках TrkA-PC12 составляло 1,07 ± 0,43 нЕ на мг 4-MUNANA, взятых из четырех независимых экспериментов. ( B ) К 1,4 × 10 6 общих клеток добавляли 50 нг / мл NGF в течение 15 мин, а оставшиеся клетки оставляли необработанными в качестве контроля.Обработанные NGF и необработанные клетки добавляли к субстратному буферу (20 мМ Трис и 30 мМ NaCl), содержащему апротинин, лейпептин, PMSF и 0,05 мМ 4-MUNANA, в кюветах с присутствием или без присутствия 200 мкМ Тамифлю, BCX- 1812 или BCX-1827. Показания интенсивности флуоресценции были немедленно сняты в течение 15 минут с использованием флуоресцентного спектрофотометра Varian Cary Eclipse при низких и средних настройках детектора напряжения ФЭУ. Субстрат, 4-MUNANA, гидролизуется сиалидазами с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм после возбуждения при 365 нм.Активность сиалидазы в образцах клеток рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы и выражали в наноединицах на мг 4-MUNANA для 1,4 × 10 6 клеток. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднее значение ± SEM активности сиалидазы из двух-трех независимых экспериментов ( n ). Звездочка (*) представляет собой значимые различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета по сравнению с контролем в каждой группе.

Рис. 8.

NGF-индуцированная сиалидазная активность в клеточных суспензиях клеток TrkA-PC12.Клетки TrkA-PC12 при 90% конфлюэнтности в 25-см колбах 2 ресуспендировали в 500 мкл бессывороточной среды. ( A ) К 3–4 × 10 5 общих клеток добавляли 50 нг / мл NGF в указанные моменты времени, а оставшиеся клетки оставляли необработанными в качестве контроля. Активность сиалидазы в образцах клеток рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы и выражали в наноединицах на мг 4-MUNANA после вычитания эндогенной фоновой активности сиалидазы в необработанных клетках. Среднее значение ± SEM фоновой активности эндогенной сиалидазы в контрольных необработанных клетках TrkA-PC12 составляло 1.07 ± 0,43 нЕ на мг 4-MUNANA, взятого из четырех независимых экспериментов. ( B ) К 1,4 × 10 6 общих клеток добавляли 50 нг / мл NGF в течение 15 мин, а оставшиеся клетки оставляли необработанными в качестве контроля. Обработанные NGF и необработанные клетки добавляли к субстратному буферу (20 мМ Трис и 30 мМ NaCl), содержащему апротинин, лейпептин, PMSF и 0,05 мМ 4-MUNANA, в кюветах с присутствием или без присутствия 200 мкМ Тамифлю, BCX- 1812 или BCX-1827. Показания интенсивности флуоресценции были немедленно сняты в течение 15 минут с использованием флуоресцентного спектрофотометра Varian Cary Eclipse при низких и средних настройках детектора напряжения ФЭУ.Субстрат, 4-MUNANA, гидролизуется сиалидазами с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм после возбуждения при 365 нм. Активность сиалидазы в образцах клеток рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы и выражали в наноединицах на мг 4-MUNANA для 1,4 × 10 6 клеток. Каждая полоса на рисунке представляет собой среднее значение ± SEM активности сиалидазы из двух-трех независимых экспериментов ( n ). Звездочка (*) представляет собой значимые различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета по сравнению с контролем в каждой группе.

Первичные корковые нейроны экспрессируют активность мембранной сиалидазы после стимуляции BDNF

Мы также проверили, может ли BDNF-индуцированная сиалидазная активность наблюдаться в первичных корковых нейронах. Нейроны выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, в течение 4 дней в нейробазальной среде с добавлением B27 и пенициллина-стрептомицина (Brewer 1995). После удаления среды 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) в трис-буферном солевом растворе pH 7,4 добавляли в каждую лунку отдельно (Ctrl) с 200 нг / мл BDNF или в комбинации с 200 нг / мл BDNF и 400 мкМ Тамифлю. добавление.Как показано на фиг. 9А, обработка первичных кортикальных нейронов BDNF индуцирует сильную активность сиалидазы в течение 1 мин. на что указывает ореол флуоресценции (синий цвет), окружающий клетки, вызванный испусканием свободного 4-метилумбеллиферона, гидролизованного из субстрата 4-MUNANA, по сравнению с необработанными контрольными нейронами. Тамифлю блокирует индуцированную BDNF активность клеточной сиалидазы в этих нейронах.

Рис. 9.

( A ) Стимулированные BDNF первичные кортикальные нейроны экспрессируют активность мембранной сиалидазы, которая блокируется Тамифлю.Первичные кортикальные нейроны выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, в течение 4 дней в нейробазальной среде, дополненной B27 и пенициллин-стрептомицином (100 МЕ / мл). После удаления среды в каждую лунку добавляли 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] (Sigma) в буферном растворе Трис, pH 7,4. отдельно (Ctrl), с 200 нг / мл BDNF или в комбинации с 200 нг / мл BDNF и 400 мкМ Тамифлю. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты.( B ) Тамифлю блокирует индуцированное BDNF фосфорилирование TrkB в первичных корковых нейронах. Кортикальные нейроны стимулировали либо 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, либо в комбинации с 200 мкМ Тамифлю в течение 30 минут, а затем 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, или оставляли без лечения (Ctrl). Клетки фиксировали параформальдегидом, пермеабилизировали и окрашивали козьим анти-pY490 (pTrk), а затем кроличьим анти-козьим IgG Alexa Fluor 594. Флуоресцентные изображения получали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии (объектив 40 ×).Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в пределах соответствующих изображений из двух экспериментов. Данные представляют два из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты. Существенные различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с группой BDNF, как указано.

Рис. 9.

( A ) BDNF-стимулированные первичные кортикальные нейроны экспрессируют активность мембранной сиалидазы, которая блокируется Тамифлю. Первичные кортикальные нейроны выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, в течение 4 дней в нейробазальной среде, дополненной B27 и пенициллин-стрептомицином (100 МЕ / мл). После удаления среды 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] (Sigma) в буферном растворе Трис, pH 7.4 добавляли в каждую лунку отдельно (Ctrl) с 200 нг / мл BDNF или в комбинации с 200 нг / мл BDNF и 400 мкМ Тамифлю. Данные представляют собой представление одного из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты. ( B ) Тамифлю блокирует индуцированное BDNF фосфорилирование TrkB в первичных корковых нейронах. Кортикальные нейроны стимулировали либо 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, либо в комбинации с 200 мкМ Тамифлю в течение 30 минут, а затем 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, или оставляли без лечения (Ctrl). Клетки фиксировали параформальдегидом, пермеабилизировали и окрашивали козьим анти-pY490 (pTrk), а затем кроличьим анти-козьим IgG Alexa Fluor 594.Флуоресцентные изображения получали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии (объектив 40 ×). Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток в пределах соответствующих изображений из двух экспериментов. Данные представляют два из трех экспериментов, показывающих идентичные результаты. Существенные различия с достоверностью 95% с использованием теста множественного сравнения Даннета были определены по сравнению с группой BDNF, как указано.

Если Тамифлю блокирует BDNF-индуцированную активность сиалидазы в первичных нейронах, мы предположили, что ингибитор нейраминидазы также будет блокировать BDNF-индуцированное фосфорилирование TrkB в первичных кортикальных нейронах. Кортикальные нейроны стимулировали либо 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, либо в сочетании с добавлением 200 мкМ Тамифлю в течение 30 минут с последующим добавлением 200 нг / мл BDNF в течение 15 минут, или оставляли без лечения (Ctrl). Клетки фиксировали, пермеабилизировали и окрашивали козьим анти-pY490 (pTrk), а затем кроличьим анти-козьим IgG Alexa Fluor594 и визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии.Как показано на Фигуре 9B, Тамифлю значительно блокировал BDNF-индуцированное фосфорилирование TrkB в первичных корковых нейронах.

Обсуждение

Представленные здесь данные являются первыми наблюдениями, которые устанавливают прямую связь между гликозилированием рецептора и активацией рецепторов, передающих сигнал, таких как Trk. Эти находки подтверждают новый механизм активации Trk за счет связывания нейротрофического фактора роста. Известно, что, когда NGF связывается с TrkA, последующие события передачи сигналов, по-видимому, включают доставку рецептора в эндосомы (Barker et al.2002; Битти и др. 2000; Бутовт и фон Бартельд 2001; Haucke 2002; Jullien et al. 2002; Shao et al. 2002; Whitmarsh and Davis 2001; Уайли и Берк 2001; York et al. 2000), где они остаются активными (Beattie et al. 1996; Grimes et al. 1997; Grimes et al. 1996; Wiley and Burke 2001). Для TrkA может использоваться исключительно эндосомная передача сигналов. Напротив, система рецепторов EGFR инсулина может обладать двойными свойствами: одни сигналы специфически генерируются с поверхности клетки, тогда как другие, по-видимому, генерируются внутри эндосом (Wiley and Burke 2001).Результаты, показанные на фиг. 7 и 8, указывают на начальную быструю активацию активности мембранной сиалидазы в TrkA-экспрессирующих клетках PC12, которая запускается только обработкой клеток NGF. Полученные данные свидетельствуют о том, что начальная активация TrkA с помощью NGF включает в себя мембранную сиалидазу, предшествующую доставке рецептора в эндосомы. Как этот процесс клеточной сиалидазы индуцируется связыванием NGF с его рецептором, остается неизвестным, как и точная природа мембранной сиалидазы (ов).

Несколько сиалидаз млекопитающих были клонированы, очищены и классифицированы в соответствии с их субклеточной локализацией (Miyagi et al.1990). Они являются лизосомными (Neu1), цитозольными (Neu2) и связанными с плазматической мембраной (Neu3). Новая сиалидаза, названная Neu4, была клонирована из мозга мыши и имеет сходство с Neu3 (Comelli et al. 2003). Имеются данные о человеческой сиалидазе (Neu4), локализованной в митохондриальном (Yamaguchi et al. 2005) или лизосомном просвете (Seyrantepe et al. 2003). Сиалидаза плазматической мембраны (Neu3), по-видимому, специфически гидролизует ганглиозиды GM1 (Papini et al. 2004; Rodriguez et al. 2001; Sasaki et al. 2003). Лизосомальная сиалидаза (Neu1) представляет собой гликопротеиновый фермент, который активен только как часть молекулярного мультиферментного комплекса, который содержит β-галактозидазу и катепсин A (Lukong et al.2000). Недавние наблюдения показали, что внутриклеточное распределение сиалидазы, кодируемой геном Neu1 , регулируется сигнальной последовательностью в цитоплазматическом хвосте, и что сиалидаза может быть обнаружена в матриксе лизосом, а также в плазматической мембране в условиях стимуляции клеток. (Луконг и др., 2001). Более свежие данные показали, что лизосомальная карбоксипептидаза, катепсин А, которая образует комплекс с Neu1 и активирует его в лизосоме, сортируется на плазматическую мембрану дифференцирующихся клеток моноцитов аналогично Neu1.Оба белка сначала направляются в лизосомы, а затем сортируются в LAMP-2-отрицательные, MHC II-положительные везикулы, которые позже сливаются с плазматической мембраной (Liang et al. 2006). Среди сиалидаз цитозольная форма Neu2 обычно показывает самый низкий уровень экспрессии. Цитозольная сиалидаза высоко экспрессируется в скелетных мышцах (Fanzani et al. 2003; Sato and Miyagi 1996), а также в печени (Miyagi and Tsuiki 1985), тимусе (Kotani et al. 2001) и при низких уровнях в головном мозге ( Hasegawa et al.2001). Было обнаружено, что ферментативная активность цитозольной сиалидазы Neu2 временно увеличивается только во время дифференцировки клеток PC12. Эти данные подтверждают возможное участие цитозольной сиалидазы Neu2 в дифференцировке клеток PC12 (Fanzani et al. 2004). Сообщалось о кристаллической структуре сиалидазы Neu2 человека в ее свободной форме и в комплексе с ингибитором нейраминидазы, 2-дезокси-2,3-дегидро- N -ацетилнейраминовой кислотой (DANA) (Chavas et al. 2005). Взаимодействие между Neu2 и DANA показало сходство с бактериальными и вирусными аналогами, но также обнаружило некоторые различия в расположении активных сайтов и динамической природе петель, содержащих остатки, ответственные за катализ и распознавание субстрата.Для сиалидазы Neu3 плазматической мембраны было показано, что рецептору TrkA необходимо взаимодействовать с ганглиозидом GM1, чтобы димеризоваться, фосфорилироваться и запускать его сигнальный путь (Duchemin et al. 2002; Kimura et al. 2001; Rabin and Mocchetti 1995 ). GM1 является продуктом Neu3, который, кроме того, является истинной мембранной сиалидазой в плазматической мембране (Kopitz et al. 1998; Miyagi and Tsuiki 1986). Фактически, ингибитор нейраминидазы, осельтамивир, блокирует регулируемое ганглиозидом GM1 возбуждение при гипералгезии, опосредованной опиоидными рецепторами (Crain and Shen 2004).Поскольку сиалидаза Neu3 плазматической мембраны специфична для ганглиозидов GM1, эта сиалидаза Neu3 может участвовать в нашей активности сиалидазы, индуцированной NGF. Интересно предположить, что Neu3 не действует напрямую на сиаловую кислоту Trk, но, тем не менее, может активироваться при связывании NGF, что, в свою очередь, продуцирует GM1, делая возможным димеризацию TrkA и, в конечном итоге, играет роль в дальнейшей активации других сиалидаз, которые будут мишень Trk сиаловой кислоты. Собственно, да Силва и др. (2005) недавно продемонстрировали, что сверхэкспрессия ганглиозидной сиалидазы Neu3 плазматической мембраны (PMGS) в первичных нейронах вызывает значительное увеличение фосфорилированного TrkA (pTrkA), которое дополнительно усиливается NGF.Фактически, pTrkA осаждается с GM1, когда PMGS чрезмерно экспрессируется, и было показано, что PMGS взаимодействует с pTrkA, особенно после стимуляции NGF (da Silva et al. 2005). Эти результаты показывают, что PMGS может приводить к локальной активности рецепторов Trk, но их эффекты могут быть направлены только на pTrkA. Другие исследования показали, что клетки Neuro-2a и NG108-15, выросшие в присутствии нейраминидазы, фермента, увеличивающего содержание GM1 на клеточной поверхности, вызывают рост нейритов, который, в случае Neuro-2a, может быть заблокирован GM1-специфическая субъединица B холерного токсина (CTX-B).Однако агент CTX-B, нанесенный на клетки NG108-15, не оказывал ингибирующего действия (Fang et al. 2000). Поскольку DANA (2-дезокси-2,3-дегидро- N -ацетилнейраминовая кислота) является ингибитором, специфичным для PMGS (da Silva et al. 2005) и цитозольной сиалидазы Neu2 (Chavas et al. 2005), а также CTX- B блокирует ганглиозид GM1 от взаимодействия Neu3, и DANA, и CTX-B не оказывают какого-либо ингибирующего эффекта на нашу NGF-индуцированную активность сиалидазы в клетках TrkA-PC12 (на фигурах 4 и 7E). Взятые вместе, мы предполагаем, что кандидатная клеточная сиалидаза в наших исследованиях может быть лизосомальной сиалидазой Neu1 (Liang et al.2006) или митохондриальный / лизосомный просвет Neu4 (Seyrantepe et al. 2004; Yamaguchi et al. 2005).

Когда клетки TrkA-PC12 были предварительно обработаны лектином MAL-2, NGF-индуцированная pTrkA полностью ингибировалась дозозависимым образом (рис. 2А). Связывание MAL-2 с сиалильными α-2,3-связанными β-галактозильными остатками на TrkA не блокирует связывание NGF с TrkA. Эти результаты предполагают, что индуцированная NGF активность клеточной сиалидазы нацелена на сиалил-α-2,3-связанные β-галактозильные остатки TrkA, удаленные от связывающих NGF остатков.Для рецепторов Trk, анализ делеции и мутагенеза эктодоменов выявил необходимый и достаточный лиганд-связывающий фрагмент, а также отдельные остатки, важные для сродства и специфичности (Arevalo et al. 2000; Arevalo et al. 2001; Ultsch et al. 1999 ). Более того, кристаллическая структура комплекса между NGF и лиганд-связывающим доменом TrkA четко определяет ориентацию NGF по отношению к мембране и выясняет специфичность и связывание для всего семейства (см. Обзор (Wiesmann and de Vos 2001)).Из пяти доменов, составляющих его внеклеточную часть, иммуноглобулиноподобный домен, проксимальный к мембране (домен TrkA-d5), необходим и достаточен для связывания NGF (Wiesmann et al. 1999). Структура соответствует результатам экспериментов по мутагенезу для всех нейротрофинов. Фактически, Аревало и др. (2000), используя различные мутанты внеклеточных областей TrkA, обнаружили, что удаление первого или второго Ig-подобного домена приводит к активации рецептора. Эти результаты предполагают роль обоих Ig-подобных доменов в стабилизации мономерной формы рецептора, возможно, посредством отталкивания, которое может быть нейтрализовано связыванием лиганда.Активация рецептора, вызванная делецией первого Ig-подобного домена, была слабой по сравнению с активацией, вызванной удалением второго домена. Второй Ig-подобный домен 5, по-видимому, более важен для предотвращения спонтанной димеризации рецепторов, и это коррелирует с более важной ролью, которую играет этот домен в связывании NGF (Arevalo et al. 2000; Wiesmann et al. 1999). Хотя два Ig-подобных лиганд-связывающих домена TrkA могут участвовать в блокировании гомодимеризации рецепторов в отсутствие лиганда, неясно, взаимодействуют ли и как внутриклеточные части Trks друг с другом.

В этом отчете мы идентифицируем специфическое десиалирование Trk мембранной сиалидазой (ами), которое индуцируется связыванием нейротропного фактора с рецептором Trk. Мы предполагаем, что индуцированная NGF активность сиалидазы может быть нацелена на второй Ig-подобный домен 5. Фактически, остатки TrkA, которые находятся в контакте с NGF в комплексе NGF-TrkA-d5, секвенированы (Wiesmann and de Vos 2001). Есть три N-связанных остатка аспарагина, которые контактируют с NGF, но всего шесть остатков, которые могут быть доступны для взаимодействия с сиалидазой.Связывание лиганда с его рецептором активирует мембраносвязанную сиалидазу (ы), которая может специфически нацеливаться и гидролизовать один или несколько из этих шести N-связанных сиалил-α-2,3-связанных β-галактозильных остатков эктодомена TrkA-d5. Это последующее удаление сахара будет способствовать гомодимеризации, интернализации и активации рецепторов. Действительно, мы обнаружили, что первичные нейроны коры после стимуляции специфическими нейротрофическими факторами роста также проявляют высокую активность мембранной сиалидазы. Ингибитор нейраминидазы Тамифлю блокирует активность сиалидазы, индуцированную BDNF в первичных корковых нейронах.Ростки нейритов, продуцируемые обработанными NGF TrkA-PC12 и обработанными BDNF клетками TrkB-nnr5, также значительно ингибируются Тамифлю. Результаты в этом отчете впервые устанавливают новый способ регуляции активации рецептора его естественным лигандом, а также определяют новую функцию клеточной сиалидазы.

Материалы и методы

Рекомбинантный TS

Рекомбинантный TS и мутантный TSΔAsp98-Glu, использованные в этих экспериментах, были выделены с использованием системы метилотрофных дрожжей Pichia pastoris и дополнительно очищены с использованием колонки с аффинными антителами против E-tag (Laroy and Contreras 2000).И TS дикого типа, и мутантный TSΔAsp98-Glu имели последовательность E-tag (pCAGGS-TSE), связанную с С-концевым доменом (Laroy and Contreras 2000). Мутант TSΔAsp98-Glu имеет точечную мутацию в каталитическом домене TS, снижающую активности сиалидазы и сиалилтрансферазы примерно до 3,6% и 4,5% соответственно от TS дикого типа (Woronowicz et al. 2004). Сиалидазную активность ферментов измеряли в трис-буферном физиологическом растворе (TBS) pH 7,6, содержащем 0,2 мМ 4-метилумбеллиферил- N -ацетилнейраминовую кислоту (MUNANA) при температуре 25 ° C.После 15 мин инкубации реакцию останавливали и измеряли флуоресценцию свободного 4-метилумбеллиферона с помощью многолуночного ридера CYTOFLUOR ® серии 4000 (PerSeptive Biosystems, Брюссель, Бельгия). Сиалилтрансферазную активность TS дикого типа и мутантного TSΔAsp98-Glu измеряли в буфере HEPES pH 7,2, содержащем 20 мкМ N -ацетилнейраминиллактозы и 220 нМ APTS-меченных структур сахара NA2FB (асиало-, галактозилированных двухантеннальных, замещенных ядром фукоза и с пополам GlcNAc).Сахарные структуры NA2FB были помечены и очищены в соответствии с Callewaert et al. (Callewaert et al. 2001). Для анализа структур гликанов использовали метод DSA-FACE, как описано ранее (Callewaert et al. 2001). Оптимальная доза 200 нг TS или мутантного TS на мл была определена ранее (Woronowicz et al. 2004).

Нейротрофические факторы роста и ингибиторы нейраминидазы

NGF (50 нг / мл) и BDNF (100 нг / мл) (Sigma, Сент-Луис, Миссури) использовали в заранее определенной оптимальной дозировке.Тамифлю (чистый фосфат осельтамивира, Hoffmann-La Roche Ltd., Миссиссауга, Онтарио, номер партии BS00060168), BCX-1812 или BCX-1827 (BioCryst Pharmaceuticals Inc., Бирмингем, AL), DANA (2-дезокси-2,3 -дегидро-d- N -ацетилнейраминовая кислота) (Sigma) и субъединица B холерного токсина (CTX-B) (Sigma) использовали в указанных концентрациях.

Лектины

M. amurensis лектин 2 (MAL-2) (Vector Laboratories Inc., Берлингтон, Онтарио, Канада) специфически связывается с α-2,3 сиаловой кислотой, связанной с концевой галактозой. лектин S. nigra (SNA, которая связывается с α-2,6 сиаловой кислотой, связанной с концевой галактозой и, в меньшей степени, с α-2,3 связью), арахисовый агглютинин (PNA, галактозил (β-1,3) N -ацетилгалактозамин), сукцинилированный агглютинин зародышей пшеницы (sWGA, N, -ацетилглюкозаминовые остатки), агглютинин соевых бобов (SBA, концевой α- или β-связанный N, -ацетилгалактозамин), U. europaeus aglutinin I (U. α-связанная фукоза), R. communis агглютинин I (RCA-1, галактоза и N -ацетилгалактозамин) и D.biflorus (грамм лошади) агглютинин (DBA, α-связанный N -ацетилгалактозамин).

Клеточные линии

Клеточная линия феохромоцитомы крысы PC12, чувствительная к NGF, PC12 nnr5 (мутант с дефицитом тирозинкиназы, невосприимчивый к NGF) (Kaplan and Miller 1997; Kaplan and Miller 2000) и клеточная линия TrkA-PC12 (чрезмерно экспрессирующая рецепторы TrkA человека) (Hemps-рецепторы) et al. 1992), использовались в этих исследованиях, как описано ранее (Woronowicz et al.2004 г.). Клетки TrkB-nnr5 представляют собой клетки PC12 nnr5 , стабильно трансфицированные для экспрессии рецепторов TrkB крысы (любезно предоставлены доктором Сьюзан Микин, Лаборатория нейронных сигналов, Группа клеточной биологии, Исследовательский институт Робартса, Лондон, Онтарио, Канада) (Baskey et al. 2002). В присутствии BDNF клетки TrkB-nnr5 отвечают остановкой деления и удлинением нейритов, что аналогично активности NGF на клетках TrkA-PC12. Все клеточные линии выращивали при 37 ° C в 5% CO 2 в культуральной среде, содержащей DMEM (Gibco Rockville, MD) с добавлением 5% лошадиной сыворотки (Gibco) и 3% фетальной сыворотки теленка (Cansera International Inc., Рексдейл, Онтарио, Канада).

Первичные нейроны коры

Первичные культуры кортикальных нейронов мышей получали, как описано ранее (Brewer 1995; Brewer 1997). Беременных мышей CD-1 умерщвляли на 17-й день гестации и сразу же извлекали плоды из матки. Кора головного мозга этих плодов была собрана и обработана трипсином (0,1%) и ДНКазой I (50 мкг / мл). Ткани объединяли в стерильной нейробазальной среде с добавлением 2% B27 и пенициллин-стрептомицин (100 МЕ / мл) (Invitrogen Canada Inc., Life Technologies, Берлингтон, Онтарио), растирали и фильтровали через нейлоновую сетку 37 мкМ. Фильтрат центрифугировали 10 мин при 1000 об / мин и ресуспендировали в нейробазальной среде при концентрации 3 × 10 5 клеток / мл. Клетки высевали на 24-луночные планшеты, содержащие 12-мм круглые покровные стекла, предварительно покрытые поли-d-лизином (50 мкг / мл), инкубировали в атмосфере 5% CO 2 при 37 ° C и выращивали в течение 4 дней перед тестированием. . По данным иммунохимического исследования с использованием антитела MAP-2, культуры состоят на 95% из нейронов.

Лектиновый блот TrkA и фосфорилированного Trk (pTyr490)

Клеточная линия

TrkA-PC12 выращивалась при 37 ° C в 5% CO. 2 в культуральной среде. Клетки стимулировали либо 50 нг / мл NGF в течение 15 минут, либо 200 нг / мл TS в течение 60 минут, или оставляли без обработки в качестве контроля (Ctrl) (см. Рисунок 1). Клетки лизировали и обрабатывали для иммунопреципитации фосфорилированного TrkA (pTrkA) с помощью аффинно очищенного поликлонального кроличьего антитела против pTyr490 (Abcam Ltd., Кембриджшир, Великобритания) или неактивированного TrkA (Ctrl) с помощью пан-антитела против TrkA (любезный подарок от доктора Грегори Росс, Королевский университет).Иммунопреципиированные рецепторы TrkA разделялись с помощью 8% SDS-PAGE геля с последующим анализом лектинового блоттинга MAL-2, антителами против pTrkA или против pan Trk. Блоты исследовали биотинилированным лектином 2 M. amurensis (MAL-2; Vector Laboratories Inc., Берлингтон, Онтарио, Канада), затем стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс). Для определения белковой нагрузки гель окрашивали кумасси бриллиантовым синим (Sigma).Количественный анализ проводился путем оценки плотности полос геля после коррекции фона с помощью программы Corel Photo Paint 8.0.

Колокализация лектина с pTrkA и TrkA

Клетки

TrkA-PC12 выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых стеклянных предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином, в течение 24 ч перед стимуляцией 50 нг / мл NGF (15 мин), 200 нг / мл ИР. (60 мин), 200 нг / мл мутантного TSΔAsp98-Glu (60 мин) или оставались без обработки. Клетки фиксировали 4% параформальдегидом, проницаемым 0.2% Triton X-100 в фосфатно-солевом буфере (PBS) и окрашивали биотинилированным-MAL-2 в течение 30 мин. После обширной промывки клетки иммуноокрашивали кроличьим антителом против Pan Trk или кроличьим антителом против pTyr490 из Trk, как указано, с последующим одновременным применением стрептавидина, конъюгированного с флуоресцеином (FITC) (Roche Diagnostics, Mannheim, Германия) и Alexa Fluor 568 против кроличьего IgG (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон). Изображения визуализировали с помощью конфокального инвертированного микроскопа (инвертированный конфокальный микроскоп Leica TCS SP2 MP, Мангейм, Германия) с использованием 100-кратного объектива (масло).Изображения были получены с использованием z-стадии из 8–10 изображений на ячейку с шагом 0,5 мм. Чтобы вычислить степень колокализации (желтый цвет) в выбранных изображениях, был измерен коэффициент корреляции Пирсона и выражен в процентах с помощью программного обеспечения Image Pro Plus.

Ингибирование фосфорилирования Trk ингибиторами нейраминидазы

Клетки

TrkA-PC12 предварительно обрабатывали чистым тамилфу (осельтамивир фосфат), BCX-1812, BCX-1827, DANA или субъединицей чистого холерного токсина B (CTX-B) в указанных концентрациях в течение 1 ч с последующим добавлением 50 нг / мл NGF в течение 15 мин.Первичные нейроны коры предварительно обрабатывали 200 мкМ Тамифлю в течение 30 мин с последующим введением 200 нг / мл BDNF или оставляли без обработки (Ctrl). Клетки фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали козьим анти-pTyr490 Trk, а затем кроличьим анти-козьим IgG Alexa Fluor594. Окрашенные клетки визуализировали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии с использованием объектива 40x. Количественный анализ проводился путем оценки плотности окрашивания клеток с поправкой на фон на каждой панели с использованием программного обеспечения Corel Photo Paint 8.0. Каждая полоса на рисунках представляет собой среднюю скорректированную плотность окрашивания ± SEM для всех клеток ( n ) в пределах соответствующих изображений (см. Фигуру 4A).Звездочка (*) представляет значимые различия с достоверностью 95% при использовании теста множественного сравнения Даннета по сравнению с контролем (Ctrl) в каждой группе.

Оценка роста нейритов

Клетки

(приблизительно 5 × 10 6 / предметное стекло) выращивали в 24-луночных планшетах для тканевых культур на круглых стеклянных предметных стеклах диаметром 12 мм, покрытых поли-d-лизином (Sigma), в течение 24 часов до экспериментальной обработки. Через 2–3 дня обработки клетки фиксировали в 3,7% параформальдегиде в течение 30 мин, проницаемом с помощью 0.2% Triton X-100 в TBS на льду в течение 5 минут с последующим блокирующим раствором 3% бычьего сывороточного альбумина на льду в течение 20 минут. Клетки окрашивали фаллоидин-родамином (Sigma) в течение 1 ч при 37 ° C. Окрашивание клеток анализировали качественно, используя эпифлуоресцентную микроскопию, и количественно, подсчитывая количество клеток с множественными отростками нейритов (≥200 от общего числа клеток; одно или несколько отростков больше, чем 2 клеточных тела в длину).

Проточная цитометрия

Клетки, выращенные в 25-см колбах 2 при 90% конфлюэнтности, обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки.Их стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 мин и немедленно фиксировали, пермеабилизировали и иммуноокрашивали конъюгированным с флуоресцеином козьим антителом IgG против pY490 Trk. 7000 клеток собирали на проточном цитометре Epics XL-MCL Beckman Coulter (Майами, Флорида) и анализировали с помощью программного обеспечения Expo32 ADC (Beckman Coulter). Для наложенных гистограмм необработанные контрольные ячейки представлены гистограммой с черным заполнением. Клетки, предварительно обработанные Тамифлю и стимулированные NGF, изображены гистограммой, заполненной серым цветом.Клетки, обработанные NGF, показаны незаполненной гистограммой с черной линией. Средняя флуоресценция для каждой гистограммы указана для 98% закрытых клеток (см. Фиг. 5A).

Вестерн-блот

Клетки

TrkA-PC12 выращивали в колбах размером 75 см 2 при 90% конфлюэнтности. Клетки обрабатывали 500 мкМ Тамифлю в бессывороточной среде в течение 24 часов или оставляли без обработки. Клетки стимулировали 50 нг / мл NGF в течение 15 мин и немедленно лизировали в 500 мкл 1 × буфера для образцов SDS.К каждому клеточному лизату добавляли 3% 2-меркаптоэтанол и кипятили 10 мин. Лизаты клеток разделяли 8% гелем SDS-PAGE и блоты зондировали поликлональным козьим антителом против pY490 Trk, затем конъюгированным с HRP вторичным антителом против козьего IgG и реагентом Western Lightning Chemiluminescence Reagent Plus. Концентрация образца для загрузки геля определялась реагентом BioRad.

Активность сиалидазы в жизнеспособных клетках

TrkA-PC12, TrkA-дефицитные клетки PC12 nnr5 или первичные кортикальные нейроны выращивали на круглых предметных стеклах диаметром 12 мм, предварительно покрытых поли-d-лизином, в среде, содержащей 5% лошадиной и 4% фетальной сыворотки теленка.После удаления среды к каждому добавляли 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA (4-MU) [2 '- (4-метилумбеллиферил) -α-d- N -ацетилнейраминовая кислота] (Sigma) в буферном растворе Трис pH 7,4. хорошо отдельно (Ctrl), с 50 нг / мл NGF для клеток, экспрессирующих TrkA, и 100 нг / мл BDNF для первичных кортикальных нейронов или в комбинации NGF или BDNF и 200–500 мкМ Тамифлю (см. рисунки 7 и 9). Кроме того, клетки TrkA-PC12 предварительно обрабатывали 100 мкг / мл MAL-2 в течение 45 минут или оставляли без обработки. После удаления среды и промывки 2.В каждую лунку добавляли 04 мМ субстрата 4-MUNANA в трис-буферном солевом растворе с pH 7,4 либо отдельно, либо в комбинации с 50 нг / мл NGF или 100 нг / мл BDNF. Кроме того, среду (20 мкл) отбирали из лунок с клетками и добавляли к 20 мкл субстрата 4-MUNANA. Положительный контроль сиалидазы ( Clostridium perfringens ) (Sigma) (10 мкл; с удельной активностью 1 ед. На 1,0 мкмоль N -ацетилнейраминовой кислоты в минуту) добавляли к 20 мкл 2,04 мМ субстрата 4-MUNANA. Субстрат гидролизуется сиалидазой с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм (синий цвет) после возбуждения при 365 нм.Флуоресцентные изображения получали через 1–10 мин с помощью эпифлуоресцентной микроскопии (объектив 40 ×). Данные представляют собой представление одного из пяти независимых экспериментов, показывающих аналогичные результаты.

NGF-индуцированная сиалидазная активность в клеточных суспензиях клеток TrkA-PC12

TrkA-PC12 клетки при 90% конфлюэнтности в 25-см колбах 2 ресуспендировали в 500 мкл бессывороточной среды. К 100 мкл или 400 мкл суспензии клеток (3–4 × 10 6 клеток / мл) добавляли 50 нг / мл NGF в разное время, а оставшиеся клетки не обрабатывали в качестве контроля.Обработанные NGF и необработанные клетки добавляли (всего 30 × 10 6 клеток) к субстратному буферу (20 мМ Трис и 30 мМ NaCl), содержащему апротинин, лейпептин, PMSF и 0,05 мМ 4-MUNANA в кюветах с или без присутствие 200 мкМ Тамифлю, BCX-1812 или BCX-1827. Показания интенсивности флуоресценции были немедленно сняты в течение 15 минут с использованием флуоресцентного спектрофотометра Varian Cary Eclipse при низких и средних настройках детектора напряжения ФЭУ. Субстрат, 4-MUNANA, гидролизуется сиалидазами с образованием свободного 4-метилумбеллиферона, который имеет флуоресцентное излучение при 450 нм после возбуждения при 365 нм.Активность сиалидазы в образцах клеток рассчитывали по стандартной кривой активности сиалидазы, скорректированной на фоновую эндогенную активность сиалидазы в необработанных клетках, и выражали в наноединицах на мг 4-MUNANA, всего 3 × 10 7 клеток.

Статистика

Сравнения между двумя группами проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа с доверительным интервалом 95% с использованием теста множественного сравнения Бонферрони или теста множественного сравнения Даннета для сравнений между более чем двумя группами.

Благодарности

Авторы благодарят д-ра Эмилию Ф. Казмерчак из отдела биохимии и г-на Джеффа Мьюберна из конфокальной микроскопии биологии и генетики рака Королевского университета за их квалифицированную техническую помощь. Мы также благодарим докторов наук. Д. Муньос (директор Центра нейробиологических исследований Королевского университета) и А. Крой (факультет анатомии и клеточной биологии Королевского университета) за рецензию на рукопись. Особая благодарность Dr.Саймону Велли, научному сотруднику отделения медицины (нейробиология) Королевского университета, за изоляцию и подготовку первичных корковых нейронов. A.W. является стипендиатом Национального совета по науке и инженерным исследованиям Канады (NSERC). S.R.A. является лауреатом исследовательской премии Королевского университета и стипендии Роберта Дж. Уилсона. Эти исследования частично поддерживаются грантами NSERC, Фонда нейробиологических исследований Гарри Боттерелла, ARC и Фонда кардиоваскулярных исследований и разработок Гарфилда Келли.Исследования в Генте, Бельгия, поддерживаются GOA и FWO Flanders.

Сокращения

Список литературы

,,,.

Структуры высокого разрешения свободной и связанной с ингибитором сиалидазы Trypanosoma rangeli и их сравнение с транс-сиалидазой T. cruzi

,

J Mol Biol

,

2003

, vol.

325

(стр.

773

-

784

),,,,,.

TrkA иммуноглобулин-подобные лигандсвязывающие домены ингибируют спонтанную активацию рецептора

,

Mol Cell Biol

,

2000

, vol.

20

(стр.

5908

-

5916

),,,,,.

Новая мутация во внеклеточном домене TrkA вызывает конститутивную активацию рецептора

,

Онкоген

,

2001

, vol.

20

(стр.

1229

-

1234

),,.

Ретроградная передача сигналов нейротрофинами следует за привычным trk

,

Trends Neurosci

,

2002

, vol.

25

(стр.

379

-

381

),,,,.

Клетки PC12 (nnr5), экспрессирующие рецепторы TrkA, подвергаются морфологической, но не холинергической фенотипической дифференцировке в ответ на фактор роста нервов.

,

J Neurochem

,

2002

, vol.

80

(стр.

501

-

511

),,,,.

NGF передает сигналы через TrkA для увеличения клатрина на плазматической мембране и усиления клатрин-опосредованного переноса через мембрану.

,

J Neurosci

,

2000

, vol.

20

(стр.

7325

-

7333

),,,,,.

Гипотеза сигнальной эндосомы для объяснения действия NGF: потенциальные последствия для нейродегенерации

,

Cold Spring Harb Symp Quant Biol

,

1996

, vol.

61

(стр.

389

-

406

),,,,,. Рецепторы

Trk действуют как быстрые ретроградные носители сигналов в нервной системе взрослого человека

,

J Neurosci

,

1997

, vol.

17

(стр.

7007

-

7016

).

Бессывороточная B27 / нейробазальная среда поддерживает дифференцированный рост нейронов из полосатого тела, черной субстанции, перегородки, коры головного мозга, мозжечка и зубчатой ​​извилины

,

J Neurosci Res

,

1995

, vol.

42

(стр.

674

-

683

).

Выделение и культивирование нейронов гиппокампа взрослых крыс

,

J Neurosci Meth

,

1997

, vol.

71

(стр.

143

-

155

),.

Сортировка интернализованных нейротрофинов в путь эндоцитарного трансцитоза через систему Гольджи: ультраструктурный анализ ганглиозных клеток сетчатки

,

J Neurosci

,

2001

, vol.

21

(стр.

8915

-

8930

),,,.

Сверхчувствительное профилирование и секвенирование N -связанных олигосахаридов с использованием стандартного оборудования для ДНК-секвенирования

,

Glycobiology

,

2001

, vol.

11

(стр.

275

-

281

),.

Ретроградный транспорт нейротрофинов: факт и функция

,

J Neurobiol

,

2004

, vol.

58

(стр.

217

-

229

),,,,,.

Бета 2-адренорецепторы клеток эпидермоидной карциномы человека несут два разных типа олигосахаридов, которые влияют на экспрессию на поверхности клетки

,

Biochem J

,

1988

, vol.

250

(стр.

133

-

143

),,,,,,,.

Кристаллическая структура цитозольной сиалидазы человека Neu2. Доказательства динамической природы распознавания субстрата

,

J Biol Chem

,

2005

, vol.

280

(стр.

469

-

475

),.

Паразит при болезни Шагаса способствует выживанию и дифференцировке нейронов через рецептор фактора роста нервов TrkA

,

J Neurochem

,

2004

, vol.

91

(стр.

385

-

394

),.

Трипаносомальная транс-сиалидаза: две каталитические функции, связанные с одним каталитическим сайтом

,

Структура (Camb)

,

2002

, т.

10

(стр.

1466

-

1468

),,,.

Идентификация и экспрессия Neu4, новой мышиной сиалидазы

, ген

,

2003

, vol.

321

(стр.

155

-

161

),.

Ингибитор нейраминидазы, озельтамивир блокирует гипералгезию, опосредованную возбуждающими опиоидными рецепторами, регулируемую ганглиозидами GM1, усиливает опиоидную анальгезию и снижает толерантность у мышей

,

Brain Res

,

2004

, vol.

995

(стр.

260

-

266

),,,,.

Активность асимметричной мембранной ганглиозидной сиалидазы определяет судьбу аксонов

,

Nat Neurosci

,

2005

, vol.

8

(стр.

606

-

615

),,,,.

Ганглиозид GM1 индуцирует фосфорилирование и активацию Trk и Erk в мозге

,

J Neurochem

,

2002

, vol.

81

(стр.

696

-

707

),,,,.

Эндогенный ганглиозид GM1 плазматической мембраны способствует нейритогенезу с помощью двух механизмов

,

Neurochem Res

,

2000

, vol.

25

(стр.

931

-

940

),,,,.

Повышение активности цитозольной сиалидазы Neu2 во время дифференцировки клеток PC12

,

FEBS Lett

,

2004

, vol.

566

(стр.

178

-

182

),,,,,,.

Сверхэкспрессия цитозольной сиалидазы Neu2 индуцирует дифференцировку миобластов в клетках C2C12

,

FEBS Lett

,

2003

, vol.

547

(стр.

183

-

188

),,.

Сигнальная органелла, содержащая тирозинкиназу рецептора, активируемого фактором роста нервов, TrkA

,

Proc Natl Acad Sci USA

,

1997

, vol.

94

(стр.

9909

-

9914

),,,,,,,,.

Эндоцитоз активированного TrkA: доказательства того, что фактор роста нервов индуцирует образование сигнальных эндосом

,

J Neurosci

,

1996

, vol.

16

(стр.

7950

-

7964

),,,,.

Дифференциальная экспрессия трех генов сиалидазы в развитии крыс

,

Biochem Biophys Res Commun

,

2001

, vol.

280

(стр.

726

-

732

).

TrkAing сигналы с клатрином

,

Trends Cell Biol

,

2002

, т.

12

стр.

159

,,,,,.

Сверхэкспрессия тирозинкиназы trk быстро ускоряет дифференцировку, индуцированную фактором роста нервов

,

Neuron

,

1992

, vol.

9

(стр.

883

-

896

),,,.

Молекулярная кинетика переноса и активации рецепторов фактора роста нервов

,

J Biol Chem

,

2002

, vol.

277

(стр.

38700

-

38708

),.

Передача сигнала рецепторами нейротрофина

,

Curr Opin Cell Biol

,

1997

, vol.

9

(стр.

213

-

221

),.

Передача сигнала нейротрофина в нервной системе

,

Curr Opin Neurobiol

,

2000

, vol.

10

(стр.

381

-

391

),,,,.

Вовлечение эндогенного ганглиозида GM1a индуцирует фосфорилирование тирозина, участвующего в нейроноподобной дифференцировке клеток PC12

,

Glycobiology

,

2001

, vol.

11

(стр.

335

-

343

),,,,.

Галектин-1 является основным рецептором ганглиозида GM1, продукта контролирующей рост активности ганглиозид сиалидазы клеточной поверхности, на клетках нейробластомы человека в культуре

,

J Biol Chem

,

1998

, vol.

273

(стр.

11205

-

11211

),,,,,.

Клонирование, хромосомное картирование и характерная последовательность 5'-UTR цитозольной сиалидазы мыши

,

Biochem Biophys Res Commun

,

2001

, vol.

286

(стр.

250

-

258

),.

Клонирование транс-сиалидазы Trypanosoma cruzi и экспрессия в Pichia pastoris

,

Protein Expr Purif

,

2000

, vol.

20

(стр.

389

-

393

),.

, катализируемое транс-сиалидазой сиалилирование бета-галактозилдисахарида с введением бета-галактозидазы

,

Enzyme Microb Technol

,

2001

, vol.

28

(стр.

161

-

167

),,,,,,.

Дифференцировка моноцитов усиливает экспрессию лизосомальной сиалидазы neu1 и запускает ее нацеливание на плазматическую мембрану через MHC класса II-положительные компартменты

,

J Biol Chem

,

2006

, vol.

281

(стр.

27526

-

27538

),,,,,,,,,,,.

Характеристика молекулярных дефектов сиалидазы у пациентов с сиалидозом предполагает структурную организацию лизосомного мультиферментного комплекса

,

Hum Mol Genet

,

2000

, vol.

9

(стр.

1075

-

1085

),,,,,,,.

Внутриклеточное распределение лизосомальной сиалидазы контролируется сигналом интернализации в ее цитоплазматическом хвосте.

,

J Biol Chem

,

2001

, vol.

276

(стр.

46172

-

46181

),.

Ретроградная поддержка выживания нейронов без ретроградного транспорта фактора роста нервов

,

Science

,

2002

, vol.

295

(стр.

1536

-

1539

),.

Синтез и сборка рецептора ацетилхолина, многосубъединичного мембранного гликопротеина

,

J Membr Biol

,

1986

, т.

91

(стр.

1

-

10

),.

Нейробиология: Trk делает ретроградным

,

Science

,

2002

, vol.

295

(стр.

1471

-

1473

),,,.

Иммунологическое различение интрализосомальной, цитозольной и двух мембранных сиалидаз, присутствующих в тканях крыс

,

J Biochem (Tokyo)

,

1990

, vol.

107

(стр.

794

-

798

),.

Очистка и характеристика цитозольной сиалидазы из печени крысы

,

J Biol Chem

,

1985

, vol.

260

(стр.

6710

-

6716

),.

Доказательства гидролизующих сиалидазой ганглиозидов GM2 и GM1 в плазматической мембране печени крысы

,

FEBS Lett

,

1986

, vol.

206

(стр.

223

-

228

),,,,,,,,,,,,.

Сиалидаза MmNEU3, ассоциированная с плазматической мембраной, модифицирует ганглиозидный паттерн соседних клеток, поддерживая его участие во взаимодействиях между клетками.

,

J Biol Chem

,

2004

, vol.

279

(стр.

16989

-

16995

),,,,,.

Мутант сиалидазы, проявляющий транс-сиалидазную активность

,

J Mol Biol

,

2005

, vol.

345

(стр.

923

-

934

),.

GM1 Ганглиозид активирует высокоаффинный рецептор фактора роста нервов trkA

,

Journal of Neurochemistry

,

1995

, vol.

65

(стр.

347

-

354

),,,,,.

Мутационный анализ гликозилирования бета-адренорецепторов

,

J Biol Chem

,

1990

, vol.

265

(стр.

10759

-

10764

),.

Структурный анализ и функциональная роль углеводного компонента рецепторов соматостатина

,

J Biol Chem

,

1991

, vol.

266

(стр.

20094

-

20102

),,,.

Опосредованный NGF-TrkA ретроградный сигнал к фактору транскрипции CREB в симпатических нейронах

,

Science

,

1997

, vol.

277

(стр.

1097

-

1100

),,,,.

Ганглиозид сиалидаза плазматической мембраны регулирует рост и регенерацию аксонов в нейронах гиппокампа в культуре

,

J Neurosci

,

2001

, vol.

21

(стр.

8387

-

8395

),,,,.

Роль гликозилирования в процессинге вновь транслированного инсулинового прорецептора в адипоцитах 3T3-L1

,

J Biol Chem

,

1984

, vol.

259

(стр.

4566

-

4575

),,,,,,,,.

Сверхэкспрессия сиалидазы, связанной с плазматической мембраной, ослабляет передачу сигналов инсулина у трансгенных мышей

,

J Biol Chem

,

2003

, vol.

278

(стр.

27896

-

27902

),.

Участие эндогенной сиалидазы в дифференцировке клеток скелетных мышц

,

Biochem Biophys Res Commun

,

1996

, vol.

221

(стр.

826

-

830

),.

Быстрое ретроградное фосфорилирование тирозином trkA и других белков в симпатических нейронах крыс в компартментированных культурах

,

J Cell Biol

,

1997

, vol.

138

(стр.

411

-

421

),,,,,.

Neu4, новая сиалидаза просвета лизосом человека, придает нормальный фенотип сиалидозным и галактозиалидозным клеткам.

,

J Biol Chem

,

2004

, vol.

279

(стр.

37021

-

37029

),,,,,.

Молекулярная патология гена NEU1 при сиалидозе

,

Hum Mutat

,

2003

, т.

22

(стр.

343

-

352

),,,,,,,.

Pincher, пиноцитарный шаперон для фактора роста нервов / сигнальных эндосом TrkA

,

J Cell Biol

,

2002

, vol.

157

(стр.

679

-

691

),.

Посттрансляционный процессинг рецептора эпидермального фактора роста. Зависимое от гликозилирования приобретение лиганд-связывающей способности

,

J Biol Chem

,

1985

, vol.

260

(стр.

687

-

690

),.

Гликозилирование рецептора эпидермального фактора роста в клетках A-431.Вклад углеводов в функцию рецепторов

,

J Biol Chem

,

1984

, vol.

259

(стр.

12586

-

12594

),.

Характеристика ретроградно-сигнального комплекса NGF-P-TrkA и возрастная регуляция фосфорилирования TrkA в симпатических нейронах

,

Journal of Neuroscience

,

1999

, vol.

19

(стр.

8207

-

8218

),,,,,,,.

Кристаллические структуры нейротрофин-связывающего домена TrkA, TrkB и TrkC

,

J Mol Biol

,

1999

, т.

290

(стр.

149

-

159

).

Биологическая роль олигосахаридов - все теории верны

,

Glycobiology

,

1993

, vol.

3

(стр.

97

-

130

),,,.

Количественная визуализация латерального распространения сигнала рецептора ErbB1 в плазматической мембране

,

Science

,

2000

, vol.

290

(стр.

1567

-

1570

),,,,,,.

Быстрые ядерные ответы на нейротрофины, полученные из мишени, требуют ретроградного транспорта комплекса лиганд-рецептор.

,

J Neurosci

,

1999

, vol.

19

(стр.

7889

-

7900

),,,,.

Гликозилирование TrkA регулирует локализацию и активность рецептора

,

J Neurobiol

,

1999

, vol.

39

(стр.

323

-

336

),.

Углеводы как новый рубеж в фармацевтических исследованиях

,

Химия

,

2005

, т.

11

(стр.

3194

-

3206

),.

Передача сигнала нейротрофинами, производными от мишени

,

Nat Neurosci

,

2001

, vol.

4

(стр.

963

-

964

),.

Фактор роста нервов: структура и функции

,

Cell Mol Life Sci

,

2001

, vol.

58

(стр.

748

-

759

),,,.

Кристаллическая структура фактора роста нервов в комплексе с лиганд-связывающим доменом рецептора TrkA

,

Nature

,

1999

, vol.

401

(стр.

184

-

188

),.

Регуляция передачи сигналов рецепторной тирозинкиназы эндоцитарным трафиком

,

Трафик

,

2001

, vol.

2

(стр.

12

-

18

),,,,,,.

Трипаносомная транс-сиалидаза нацелена на рецептор тирозинкиназы TrkA и индуцирует интернализацию и активацию рецептора

,

Glycobiology

,

2004

, vol.

14

(стр.

987

-

998

),,,,,,,.

Доказательства митохондриальной локализации новой сиалидазы человека (NEU4)

,

Biochem J

,

2005

, vol.

390

(стр.

85

-

93

),,,,,.

Роль фосфоинозитид-3-киназы и эндоцитоза в активации киназы, индуцированной фактором роста нервов, регулируемой внеклеточными сигналами через Ras и Rap1

,

Mol Cell Biol

,

2000

, vol.

20

(стр.

8069

-

8083

)

© Автор 2006.Опубликовано Oxford University Press. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]

.

DDR-TRK-1 | SGC

Рецепторы дискоидиновых доменов (DDR), DDR1 и DDR2, уникальны среди рецепторных тирозинкиназ (RTK) в том, что они активируются взаимодействием с внеклеточным матриксом посредством связывания с трехспиральным коллагеном внеклеточными доменами рецептора. 1 DDR1 и DDR2 образуют конститутивные димеры, что делает их необычными для RTK, которые обычно димеризуются только при активации. 2 DDR регулируют ремоделирование внеклеточного матрикса, а также клеточную адгезию, пролиферацию и миграцию. 3 Киназы DDR связаны с прогрессированием различных заболеваний человека, включая фиброзные расстройства, атеросклероз и рак. 3-5 Важно отметить, что они считаются индикаторами плохого прогноза при раке яичников, груди и легких. 6 Сверхэкспрессия DDR1 связана с повышенной выживаемостью клеток и инвазией в гепатоцеллюлярные карциномы, аденому гипофиза и рак простаты, 7 , тогда как DDR2 мутирует при плоскоклеточном раке легких 8 и способствует метастазированию рака груди. 9 Перспективность киназ DDR в качестве терапевтической мишени была продемонстрирована путем нокдауна DDR1, который, как было показано, снижает метастатическую активность в моделях рака легких, 10 замедляет развитие атеросклероза, 5 и препятствует развитию фиброзных расстройств . 11

Киназы TRK представлены тремя членами, TRKA, TRKB и TRKC, которые избирательно экспрессируются в нейрональной ткани. Передача сигналов рецептора инициируется связыванием нейротрофических факторов NGF, BDNF и NTR соответственно.Последующая передача сигналов осуществляется через пути RAS, PLCγ и PI3γ. TRK играют жизненно важную роль в развитии и выживании ЦНС. Слияния генов, сверхэкспрессия белков и изменения единичных нуклеотидов вовлечены в патогенез определенных типов рака, включая глиобластому, папиллярную карциному щитовидной железы и секреторную карциному молочной железы, но при большинстве других видов рака они встречаются редко. 12

DDR-TRK-1 - это химический зонд для киназ DDR и TRK с хорошей активностью in vitro и in vivo .
DDR-TRK-1 ингибирует образование колоний и миграцию клеток рака поджелудочной железы Panc-1. В клеточных и мышиных моделях фиброза легких DDR-TRK-1 подавляет передачу сигналов, экспрессию фиброзных маркеров и фиброзные свойства, такие как экспрессия гидрокспролина. При ограниченном воздействии на ЦНС и, следовательно, отсутствии ингибирования TRK, in vivo эффекты DDR-TRK-1 можно отнести к ингибированию DDR1-2. DDR-TRK-1N - это соединение отрицательного контроля с очень минимальными различиями в структуре соединений, и его следует использовать параллельно с DDR-TRK-1.Зонд можно дополнить использованием BAY-826, который ингибирует киназы TIE1, TIE2, DDR1 и DDR2, но не имеет активности TRK, чтобы лучше понять цель, вовлеченную в фенотипический эффект.

Работа по этому зонду опубликована в J.Med.Chem. 2016 59 (12), p 5911-5916, «Структурный дизайн тетрагидроизохинолин-7-карбоксамидов в качестве селективных ингибиторов рецептора 1 дискоидинового домена (DDR1)» .

Эффективность против целевой семьи

DDR-TRK-1 представляет собой химический зонд для киназ DDR и TRK (IC 50 3-43 нМ) с соответствующей хорошей клеточной активностью в анализах взаимодействия с мишенью NanoBRET TM (IC 50 104-448 нМ).Было показано, что DDR-TRK-1 является селективным в панели киназ in vitro с последующим клеточным анализом NanoBRET TM .

Избирательность

DDR-TRK-1 является селективным в KINOMEscan® при концентрации 1 мкм. Ближайшим от мишени является CDK11 (370 нМ), который, однако, плохо ингибируется в клетках (~ 5 мкМ в NanoBRET TM ). Отрицательный контроль DDR-TRK-1N полностью очищен в KINOMEscan при концентрации 1 мкм.

Дозировка

Мы рекомендуем использовать DDR-TRK-1 в концентрации 5 мкМ в клетках.Отрицательный контроль DDR-TRK-1N следует использовать при концентрации в клетках 5 мкМ - он токсичен для клеток HeLa выше 10 мкМ.

Мы также рекомендуем использовать селективные ингибиторы TRK или зонд TIE-DDR BAY-826 параллельно для анализа биологии DDR1 / 2 по сравнению с TRKA / B / C.

Клеточная активность

В анализах NanoBRET TM DDR-TRK-1 показывает эффективность 104 нМ против DDR1, 175 нМ против DDR2, 448 нМ против TRKA и 142 нМ против TRKB.

Активность in vitro

В анализе активности в RBC (10 мкМ АТФ) DDR-TRK-1 показывает значение IC50 27 нМ по отношению к DDR1,4.5 нМ против DDR2, 43 нМ против TRKA, 3,6 нМ против TRKB и 2,9 нМ против TRKC.

% PDF-1.1 % 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 217615 СТРАНИЦА Aiken Tech: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 31 | 31 | 1,468,154 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 31 | 31 | 1,468,154 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 26 | 26 | 1,223,819 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 26 | 26 | 1,223,819 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 57 | 57 | 2,691,973 |) ' ET конечный поток эндобдж 8 0 объект 1417 эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 217712 Tech Coll.СТРАНИЦЫ Low Country: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 21 | 21 | 995430 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 21 | 21 | 995430 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 25 | 25 | 1 202 522 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 25 | 25 | 1 202 522 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 46 | 46 | 2,197,952 |) ' ET конечный поток эндобдж 11 0 объект 1417 эндобдж 12 0 объект > эндобдж 13 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ: 217819 Колледж Чарльстона СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 89 | 0 | 1 | 90 | 6,938,635 |) ' (02 доцента | 84 | 1 | 0 | 85 | 5 346 602 |) ' (03 доцента | 3 | 74 | 16 | 93 | 5 084 239 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 17 | 17 | 846 034 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 1 | 1 | 37 179 |) ' (07, всего мужчин | 176 | 75 | 35 | 286 | 18,252,689 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 24 | 0 | 0 | 24 | 1,719,075 |) ' (09 доцентов | 63 | 1 | 3 | 67 | 3,997,003 |) ' (10 доцентов | 2 | 56 | 20 | 78 | 3,886,595 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 40 | 40 | 1,705,974 |) ' (Всего 14 женщин | 89 | 57 | 63 | 209 | 11 308 647 |) ' (Всего 15 преподавателей-сотрудников | 265 | 132 | 98 | 495 | 29 561 336 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 2 | 0 | 0 | 2 | 202 471 |) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 84568 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 2 | 2 | 69,324 |) ' (07, всего мужчин | 3 | 0 | 2 | 5 | 356 363 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 42,716 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 1 | 1 | 38,567 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 0 | 2 | 2 | 81283 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 3 | 0 | 4 | 7 | 437 646 |) ' ET конечный поток эндобдж 14 0 объект 3062 эндобдж 15 0 объект > эндобдж 16 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 217837 Northeastern Tech PAGE: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 13 | 13 | 484 774 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 13 | 13 | 484,774 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 16 | 16 | 573,000 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 16 | 16 | 573,000 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 29 | 29 | 1,057,774 |) ' ET конечный поток эндобдж 17 0 объект 1417 эндобдж 18 0 объект > эндобдж 19 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 217864 СТРАНИЦА ЦИТАДЕЛИ: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 37 | 0 | 5 | 42 | 3 236 521 |) ' (02 доцента | 29 | 3 | 2 | 34 | 2 306 975 |) ' (03 доцента | 1 | 34 | 4 | 39 | 2,091,421 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 2 | 2 | 140,000 |) ' (07, всего мужчин | 67 | 37 | 13 | 117 | 7,774,917 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 11 | 0 | 0 | 11 | 890 413 |) ' (09 доцентов | 15 | 1 | 0 | 16 | 969 798 |) ' (10 доцентов | 0 | 15 | 1 | 16 | 825 952 |) ' (Всего 14 женщин | 26 | 16 | 1 | 43 | 2,686,163 |) ' (Всего 15 преподавателей-сотрудников | 93 | 53 | 14 | 160 | 10 461 080 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 1 | 0 | 0 | 1 | 103,554 |) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 105 670 |) ' (07, всего мужчин | 2 | 0 | 0 | 2 | 209 224 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 0 | 0 | 1 | 1 | 75,000 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 0 | 1 | 1 | 75 000 |) ' (15 всего факультет-тип контракта | 2 | 0 | 1 | 3 | 284 224 |) ' ET конечный поток эндобдж 20 0 объект 2642 эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 217882 Clemson University СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 263 | 0 | 2 | 265 | 27 569 850 |) ' (02 доцента | 132 | 16 | 1 | 149 | 11 154 396 |) ' (03 доцента | 0 | 155 | 11 | 166 | 11 201 900 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 1 | 1 | 93,500 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 67 | 67 | 2,825,263 |) ' (07, всего мужчин | 395 | 171 | 82 | 648 | 52 844 909 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 54 | 0 | 0 | 54 | 4,942,608 |) ' (09 доцентов | 60 | 5 | 0 | 65 | 4,328,142 |) ' (10 доцентов | 1 | 98 | 3 | 102 | 6 267 483 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 3 | 3 | 144 378 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 95 | 95 | 3,736,429 |) ' (Всего 14 женщин | 115 | 103 | 101 | 319 | 19 419 040 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 510 | 274 | 183 | 967 | 72 263 949 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 36 | 0 | 0 | 36 | 3 549 184 |) ' (02 доцента | 18 | 4 | 0 | 22 | 1,833,491 |) ' (03 доцентов | 0 | 6 | 0 | 6 | 421,566 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 17 | 17 | 872,413 |) ' (07, всего мужчин | 54 | 10 | 17 | 81 | 6 676 654 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 7 | 0 | 0 | 7 | 679 737 |) ' (09 доцентов | 1 | 0 | 0 | 1 | 71 038 |) ' (10 доцентов | 0 | 1 | 0 | 1 | 67,000 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 4 | 4 | 202,520 |) ' (Всего 14 женщин | 8 | 1 | 4 | 13 | 1 020 295 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 62 | 11 | 21 | 94 | 7 696 949 |) ' ET конечный поток эндобдж 23 0 объект 3482 эндобдж 24 0 объект > эндобдж 25 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (UNIT-ID: 217989 Дания ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 17 | 17 | 657 509 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 17 | 17 | 657 509 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 13 | 13 | 453296 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 13 | 13 | 453296 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 30 | 30 | 1,110,805 |) ' ET конечный поток эндобдж 26 0 объект 1417 эндобдж 27 0 объект > эндобдж 28 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218025 Флоренс-Дарлингтон, ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 53 | 53 | 2,537,158 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 53 | 53 | 2,537,158 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 53 | 53 | 2,489,898 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 53 | 53 | 2,489,898 |) ' (15 Всего преподавателей-сотрудников | 0 | 0 | 106 | 106 | 5 027 056 |) ' ET конечный поток эндобдж 29 0 объект 1417 эндобдж 30 0 объект > эндобдж 31 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218061 Университет Фрэнсиса Мариона СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 44 | 1 | 4 | 49 | 3,335,163 |) ' (02 доцента | 20 | 1 | 0 | 21 | 1,269,900 |) ' (03 доцентов | 7 | 25 | 4 | 36 | 1,839,860 |) ' (04 инструктора | 0 | 1 | 4 | 5 | 191 430 |) ' (07, всего мужчин | 71 | 28 | 12 | 111 | 6 636 353 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 10 | 0 | 1 | 11 | 732 743 |) ' (09 доцентов | 8 | 1 | 0 | 9 | 489 249 |) ' (10 доцентов | 2 | 27 | 10 | 39 | 1 803 609 |) ' (11 инструкторов | 0 | 1 | 12 | 13 | 558 417 |) ' (Всего 14 женщин | 20 | 29 | 23 | 72 | 3,584,018 |) ' (Всего 15 преподавателей-сотрудников | 91 | 57 | 35 | 183 | 10220371 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 4 | 0 | 0 | 4 | 361,335 |) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 70,000 |) ' (07, всего мужчин | 5 | 0 | 0 | 5 | 431,335 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 1 | 1 | 0 | 2 | 186 711 |) ' (14 женщин, всего | 1 | 1 | 0 | 2 | 186 711 |) ' (15 Всего преподавателей-типов сотрудников | 6 | 1 | 0 | 7 | 618 046 |) ' ET конечный поток эндобдж 32 0 объект 2747 эндобдж 33 0 объект > эндобдж 34 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218113 Greenville Tech СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 134 | 134 | 5,915,349 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 134 | 134 | 5 915 349 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 184 | 184 | 8,040,853 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 184 | 184 | 8 040 853 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 318 | 318 | 13,956,202 |) ' ET конечный поток эндобдж 35 0 объект 1417 эндобдж 36 0 объект > эндобдж 37 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218140 Техническая страница Хорри-Джорджтауна: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 59 | 59 | 2,850,427 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 59 | 59 | 2,850,427 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 74 | 74 | 3 233 639 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 74 | 74 | 3 233 639 |) ' (15 Всего преподавателей-сотрудников | 0 | 0 | 133 | 133 | 6 084 066 |) ' ET конечный поток эндобдж 38 0 объект 1417 эндобдж 39 0 объект > эндобдж 40 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ: 218229 СТРАНИЦА Университета Ландера: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 19 | 0 | 0 | 19 | 1,226,621 |) ' (02 доцента | 9 | 3 | 0 | 12 | 626 970 |) ' (03 доцента | 1 | 21 | 3 | 25 | 1,187,449 |) ' (04 инструктора | 0 | 1 | 4 | 5 | 171,335 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 2 | 2 | 69,723 |) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 1 | 1 | 24075 |) ' (07, всего мужчин | 29 | 25 | 10 | 64 | 3 306 173 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 11 | 0 | 0 | 11 | 662 469 |) ' (09 доцентов | 8 | 5 | 0 | 13 | 724 657 |) ' (10 доцентов | 0 | 14 | 4 | 18 | 810 918 |) ' (11 инструкторов | 0 | 5 | 14 | 19 | 722,230 |) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 3 | 3 | 99,351 |) ' (Всего 14 женщин | 19 | 24 | 21 | 64 | 3 019 625 |) ' (Всего 15 факультетов-контрактников | 48 | 49 | 31 | 128 | 6,325,798 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (02 доцента | 1 | 1 | 0 | 2 | 112 022 |) ' (03 доцентов | 0 | 1 | 0 | 1 | 40,110 |) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 3 | 3 | 293 731 |) ' (07, всего мужчин | 1 | 2 | 3 | 6 | 445 863 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 0 | 1 | 0 | 1 | 89,563 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 1 | 1 | 33,136 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 1 | 1 | 2 | 122699 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 1 | 3 | 4 | 8 | 568 562 |) ' ET конечный поток эндобдж 41 0 объект 3272 эндобдж 42 0 объект > эндобдж 43 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (UNIT-ID: 218335 Медицинский университет С.С. СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 9 | 6 | 0 | 15 | 2,222,928 |) ' (02 доцента | 3 | 16 | 2 | 21 | 2 317 479 |) ' (03 доцента | 0 | 18 | 1 | 19 | 1,848,957 |) ' (04 инструктора | 0 | 1 | 3 | 4 | 328 648 |) ' (07, всего мужчин | 12 | 41 | 6 | 59 | 6,718,012 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 6 | 0 | 0 | 6 | 659,185 |) ' (09 доцентов | 2 | 20 | 1 | 23 | 2,048,205 |) ' (10 доцентов | 0 | 25 | 5 | 30 | 2,408,226 |) ' (11 инструкторов | 0 | 7 | 4 | 11 | 777 614 |) ' (Всего 14 женщин | 8 | 52 | 10 | 70 | 5 893 230 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 20 | 93 | 16 | 129 | 12 611 242 |) ' ET конечный поток эндобдж 44 0 объект 2054 г. эндобдж 45 0 объект > эндобдж 46 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218353 СТРАНИЦА ТЕХНИЧЕСКОЙ ОБЛАСТИ Мидлендса: 1) () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 95 | 95 | 4,535,193 |) ' (07 Всего мужчин | 0 | 0 | 95 | 95 | 4,535,193 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 126 | 126 | 5,817,755 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 0 | 126 | 126 | 5,817,755 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 221 | 221 | 10,352,948 |) ' ET конечный поток эндобдж 47 0 объект 1417 эндобдж 48 0 объект > эндобдж 49 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218487 ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА Orangeburg-Calhoun: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 29 | 29 | 1,190,258 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 29 | 29 | 1,190,258 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 55 | 55 | 2,319,404 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 55 | 55 | 2 319 404 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 84 | 84 | 3,509,662 |) ' ET конечный поток эндобдж 50 0 объект 1417 эндобдж 51 0 объект > эндобдж 52 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218520 Piedmont Tech PAGE: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 46 | 46 | 1,961,149 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 46 | 46 | 1,961,149 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 61 | 61 | 2,548,097 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 61 | 61 | 2,548,097 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 107 | 107 | 4,509,246 |) ' ET конечный поток эндобдж 53 0 объект 1417 эндобдж 54 0 объект > эндобдж 55 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218645 U.S.C. - Aiken СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 16 | 0 | 0 | 16 | 1,168,888 |) ' (02 доцента | 17 | 2 | 0 | 19 | 1,139,670 |) ' (03 доцента | 1 | 18 | 0 | 19 | 952 441 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 8 | 8 | 353,092 |) ' (07, всего мужчин | 34 | 20 | 8 | 62 | 3 614 091 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 9 | 0 | 0 | 9 | 614,517 |) ' (09 доцентов | 12 | 0 | 0 | 12 | 717 803 |) ' (10 доцентов | 4 | 21 | 0 | 25 | 1 207 826 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 22 | 22 | 967,661 |) ' (Всего 14 женщин | 25 | 21 | 22 | 68 | 3 507 807 |) ' (15 всего факультет-тип контракта | 59 | 41 | 30 | 130 | 7,121,898 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 6 | 0 | 0 | 6 | 491 972 |) ' (02 доцента | 4 | 0 | 0 | 4 | 271 206 |) ' (03 доцентов | 1 | 1 | 0 | 2 | 125,138 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 2 | 2 | 73 065 |) ' (07, всего мужчин | 11 | 1 | 2 | 14 | 961 381 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 1 | 0 | 0 | 1 | 75,140 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 2 | 2 | 140 301 |) ' (14 женщин, всего | 1 | 0 | 2 | 3 | 215 441 |) ' (15 всего факультет-тип контракта | 12 | 1 | 4 | 17 | 1,176,822 |) ' ET конечный поток эндобдж 56 0 объект 3062 эндобдж 57 0 объект > эндобдж 58 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218654 U.S.C. - Beaufort СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 5 | 0 | 0 | 5 | 330 289 |) ' (02 доцента | 7 | 3 | 0 | 10 | 565 803 |) ' (03 доцентов | 0 | 5 | 0 | 5 | 252 222 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 7 | 7 | 288 083 |) ' (07, всего мужчин | 12 | 8 | 7 | 27 | 1,436,397 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 3 | 0 | 0 | 3 | 200 473 |) ' (09 доцентов | 1 | 2 | 0 | 3 | 162,114 |) ' (10 доцентов | 0 | 3 | 0 | 3 | 132,240 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 9 | 9 | 366,171 |) ' (Всего 14 женщин | 4 | 5 | 9 | 18 | 860 998 |) ' (15 Всего преподавателей-сотрудников | 16 | 13 | 16 | 45 | 2,297,395 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 51615 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 0 | 1 | 1 | 51615 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 1 | 1 | 51615 |) ' ET конечный поток эндобдж 59 0 объект 2417 эндобдж 60 0 объект > эндобдж 61 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218663 U.S.C. - Columbia СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 244 | 1 | 2 | 247 | 25 679 355 |) ' (02 доцента | 141 | 25 | 7 | 173 | 12,748,200 |) ' (03 доцента | 3 | 160 | 6 | 169 | 11 964 146 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 36 | 36 | 1,523,102 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 13 | 13 | 817,584 |) ' (07, всего мужчин | 388 | 186 | 64 | 638 | 52,732,387 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 46 | 1 | 0 | 47 | 4,449,394 |) ' (09 доцентов | 103 | 8 | 5 | 116 | 8,036,549 |) ' (10 доцентов | 1 | 128 | 19 | 148 | 8 582 095 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 68 | 68 | 2,671,196 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 11 | 11 | 597 747 |) ' (Всего 14 женщин | 150 | 137 | 103 | 390 | 24 336 981 |) ' (Всего 15 преподавателей | 538 | 323 | 167 | 1028 | 77 069 368 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 41 | 0 | 1 | 42 | 5,440,845 |) ' (02 доцента | 9 | 1 | 2 | 12 | 1,114,426 |) ' (03 доцентов | 0 | 1 | 6 | 7 | 516,161 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 10 | 10 | 511 041 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 12 | 12 | 927 635 |) ' (07, всего мужчин | 50 | 2 | 31 | 83 | 8,510,108 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 7 | 0 | 0 | 7 | 850 907 |) ' (09 доцентов | 4 | 1 | 4 | 9 | 758,299 |) ' (10 доцентов | 0 | 0 | 16 | 16 | 1,218,610 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 11 | 11 | 545 062 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 10 | 10 | 670,383 |) ' (Всего 14 женщин | 11 | 1 | 41 | 53 | 4 043 261 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 61 | 3 | 72 | 136 | 12,553,369 |) ' ET конечный поток эндобдж 62 0 объект 3692 эндобдж 63 0 объект > эндобдж 64 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218672 U.S.C. - Ланкастер СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 3 | 0 | 0 | 3 | 182053 |) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 52 467 |) ' (03 доцента | 0 | 4 | 1 | 5 | 227764 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 6 | 6 | 244 037 |) ' (07, всего мужчин | 4 | 4 | 7 | 15 | 706 321 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 4 | 0 | 0 | 4 | 233 679 |) ' (10 доцентов | 0 | 5 | 0 | 5 | 221 500 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 3 | 3 | 112,255 |) ' (Всего 14 женщин | 4 | 5 | 3 | 12 | 567 434 |) ' (15 всего факультет-тип контракта | 8 | 9 | 10 | 27 | 1,273,755 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 77 451 |) ' (07, всего мужчин | 1 | 0 | 0 | 1 | 77 451 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 1 | 0 | 0 | 1 | 74 475 |) ' (14 женщин, всего | 1 | 0 | 0 | 1 | 74 475 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 2 | 0 | 0 | 2 | 151 926 |) ' ET конечный поток эндобдж 65 0 объект 2537 эндобдж 66 0 объект > эндобдж 67 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218681 U.S.C. - Salkehatchie СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 2 | 0 | 0 | 2 | 122 809 |) ' (02 доцента | 2 | 0 | 0 | 2 | 99080 |) ' (03 доцентов | 1 | 2 | 0 | 3 | 123,189 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 1 | 1 | 41042 |) ' (07, всего мужчин | 5 | 2 | 1 | 8 | 386,120 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 1 | 0 | 0 | 1 | 48 351 |) ' (10 доцентов | 0 | 3 | 0 | 3 | 122821 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 2 | 2 | 77,332 |) ' (Всего 14 женщин | 1 | 3 | 2 | 6 | 248 504 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 6 | 5 | 3 | 14 | 634 624 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (02 доцента | 1 | 0 | 0 | 1 | 41382 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 1 | 1 | 51 947 |) ' (07, всего мужчин | 1 | 0 | 1 | 2 | 93 329 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 1 | 0 | 1 | 2 | 93 329 |) ' ET конечный поток эндобдж 68 0 объект 2421 эндобдж 69 0 объект > эндобдж 70 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИНДИКАТОР: 218690 U.S.C. - Самтер СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 7 | 0 | 0 | 7 | 437 651 |) ' (02 доцента | 8 | 1 | 0 | 9 | 488,886 |) ' (03 доцентов | 0 | 6 | 0 | 6 | 279 964 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 5 | 5 | 174 288 |) ' (07, всего мужчин | 15 | 7 | 5 | 27 | 1,380,789 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 1 | 0 | 0 | 1 | 61618 |) ' (09 доцентов | 4 | 0 | 0 | 4 | 227 046 |) ' (10 доцентов | 0 | 3 | 0 | 3 | 122,492 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 40,000 |) ' (Всего 14 женщин | 5 | 3 | 1 | 9 | 451 156 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 20 | 10 | 6 | 36 | 1,831,945 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 2 | 0 | 0 | 2 | 167,548 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 1 | 1 | 64 045 |) ' (07, всего мужчин | 2 | 0 | 1 | 3 | 231 593 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 1 | 0 | 0 | 1 | 84 238 |) ' (09 доцентов | 1 | 0 | 0 | 1 | 78 618 |) ' (Всего 14 женщин | 2 | 0 | 0 | 2 | 162 856 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 4 | 0 | 1 | 5 | 394 449 |) ' ET конечный поток эндобдж 71 0 объект 2852 эндобдж 72 0 объект > эндобдж 73 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИНДИКАТОР: 218706 U.S.C. - Union PAGE: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (03 доцента | 0 | 1 | 0 | 1 | 51,300 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 2 | 2 | 84 235 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 1 | 2 | 3 | 135 535 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (10 доцентов | 0 | 2 | 0 | 2 | 80 200 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 40,520 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 2 | 1 | 3 | 120,720 |) ' (15 Всего преподавателей-типов сотрудников | 0 | 3 | 3 | 6 | 256,255 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 2 | 2 | 111917 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 2 | 2 | 111917 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 2 | 2 | 111917 |) ' ET конечный поток эндобдж 74 0 объект 2001 г. эндобдж 75 0 объект > эндобдж 76 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218724 Прибрежный университет Каролины СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 21 | 0 | 0 | 21 | 1,577,419 |) ' (02 доцента | 40 | 4 | 0 | 44 | 2,760,954 |) ' (03 доцентов | 4 | 41 | 5 | 50 | 2,779,225 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 12 | 12 | 436 474 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 8 | 8 | 296 231 |) ' (07, всего мужчин | 65 | 45 | 25 | 135 | 7,850,303 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 9 | 0 | 0 | 9 | 585,257 |) ' (09 доцентов | 14 | 1 | 0 | 15 | 886 292 |) ' (10 доцентов | 6 | 34 | 1 | 41 | 2 134 412 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 12 | 12 | 434 049 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 3 | 3 | 97,998 |) ' (Всего 14 женщин | 29 | 35 | 16 | 80 | 4 138 008 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 94 | 80 | 41 | 215 | 11,988,311 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 10 | 0 | 0 | 10 | 911,660 |) ' (02 доцента | 5 | 0 | 0 | 5 | 364,225 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 1 | 1 | 70,700 |) ' (05 преподавателей | 0 | 0 | 1 | 1 | 59,460 |) ' (07, всего мужчин | 15 | 0 | 2 | 17 | 1 406 045 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 4 | 0 | 0 | 4 | 383250 |) ' (09 доцентов | 6 | 1 | 0 | 7 | 568 892 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 41,374 |) ' (12 преподавателей | 0 | 0 | 2 | 2 | 98,125 |) ' (Всего 14 женщин | 10 | 1 | 3 | 14 | 1 091 641 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 25 | 1 | 5 | 31 | 2,497,686 |) ' ET конечный поток эндобдж 77 0 объект 3482 эндобдж 78 0 объект > эндобдж 79 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (UNIT-ID: 218733 South Carolina State Univ.СТРАНИЦА 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 23 | 4 | 0 | 27 | 1,760,217 |) ' (02 доцента | 17 | 14 | 1 | 32 | 1 906 542 |) ' (03 доцентов | 10 | 23 | 0 | 33 | 1,718,813 |) ' (04 инструктора | 1 | 10 | 0 | 11 | 426 347 |) ' (06 Без ученого звания | 0 | 0 | 6 | 6 | 235 041 |) ' (07, всего мужчин | 51 | 51 | 7 | 109 | 6,046,960 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 4 | 0 | 0 | 4 | 291 761 |) ' (09 доцентов | 11 | 8 | 0 | 19 | 1,159,276 |) ' (10 доцентов | 9 | 35 | 0 | 44 | 2 204 710 |) ' (11 инструкторов | 0 | 8 | 0 | 8 | 322 437 |) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 3 | 3 | 119 908 |) ' (Всего 14 женщин | 24 | 51 | 3 | 78 | 4 098 092 |) ' (Всего 15 преподавателей-сотрудников | 75 | 102 | 10 | 187 | 10,145,052 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (02 доцента | 1 | 4 | 0 | 5 | 382 172 |) ' (03 доцента | 2 | 1 | 0 | 3 | 179 857 |) ' (07, всего мужчин | 3 | 5 | 0 | 8 | 562029 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 2 | 3 | 0 | 5 | 365,144 |) ' (10 доцентов | 0 | 6 | 0 | 6 | 399 783 |) ' (11 инструкторов | 0 | 6 | 0 | 6 | 275,490 |) ' (Всего 14 женщин | 2 | 15 | 0 | 17 | 1 040 417 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 5 | 20 | 0 | 25 | 1 602 446 |) ' ET конечный поток эндобдж 80 0 объект 3167 эндобдж 81 0 объект > эндобдж 82 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218742 U.S.C. - северная часть штата СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА НЕТ СЕКСА И УЧЕБНЫЙ ЗНАК | КОЛИЧЕСТВО | КОЛИЧЕСТВО НЕЗАПИСАННЫХ КЛИЕНТОВ | ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО | ОБЩАЯ ЗАРПЛАТА |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 18 | 0 | 1 | 19 | 1,325,015 |) ' (02 доцента | 10 | 3 | 0 | 13 | 736,177 |) ' (03 доцентов | 0 | 28 | 0 | 28 | 1,453,616 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 15 | 15 | 652 965 |) ' (07, всего мужчин | 28 | 31 | 16 | 75 | 4 167 773 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 15 | 1 | 0 | 16 | 1,016,132 |) ' (09 доцентов | 10 | 7 | 0 | 17 | 910 007 |) ' (10 доцентов | 0 | 29 | 0 | 29 | 1,394,585 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 40 | 40 | 1,724,934 |) ' (Всего 14 женщин | 25 | 37 | 40 | 102 | 5 045 658 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 53 | 68 | 56 | 177 | 9 213 431 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 3 | 0 | 0 | 3 | 257 306 |) ' (02 доцента | 3 | 0 | 0 | 3 | 236 620 |) ' (03 доцента | 0 | 1 | 0 | 1 | 84 295 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 2 | 2 | 108,861 |) ' (07, всего мужчин | 6 | 1 | 2 | 9 | 687 082 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 3 | 0 | 0 | 3 | 283 352 |) ' (09 доцентов | 3 | 0 | 0 | 3 | 206 804 |) ' (10 доцентов | 1 | 1 | 0 | 2 | 124058 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 2 | 2 | 111,459 |) ' (Всего 14 женщин | 7 | 1 | 2 | 10 | 725 673 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 13 | 2 | 4 | 19 | 1,412,755 |) ' ET конечный поток эндобдж 83 0 объект 3272 эндобдж 84 0 объект > эндобдж 85 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ОТДЕЛ: 218830 Spartanburg Community College СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без ученого звания | 0 | 0 | 47 | 47 | 2,034,279 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 47 | 47 | 2 034 279 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 58 | 58 | 2,481,758 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 58 | 58 | 2 481 758 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 105 | 105 | 4,516,037 |) ' ET конечный поток эндобдж 86 0 объект 1417 эндобдж 87 0 объект > эндобдж 88 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218858 ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА в Центральной Каролине: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 38 | 38 | 1 601 896 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 38 | 38 | 1 601 896 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 41 | 41 | 1 808 576 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 41 | 41 | 1 808 576 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 79 | 79 | 3 410 472 |) ' ET конечный поток эндобдж 89 0 объект 1417 эндобдж 90 0 объект > эндобдж 91 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218885 ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА округа Три-Каунти: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Нет академического звания | 0 | 0 | 44 | 44 | 1,930,692 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 44 | 44 | 1 930 692 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 59 | 59 | 2,460,898 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 59 | 59 | 2,460,898 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 103 | 103 | 4,391,590 |) ' ET конечный поток эндобдж 92 0 объект 1417 эндобдж 93 0 объект > эндобдж 94 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218894 Trident Tech PAGE: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 121 | 121 | 5 597 138 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 121 | 121 | 5 597 138 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 150 | 150 | 6 527 879 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 150 | 150 | 6 527 879 |) ' (15 Всего преподавателей-типов сотрудников | 0 | 0 | 271 | 271 | 12,125,017 |) ' ET конечный поток эндобдж 95 0 объект 1417 эндобдж 96 0 объект > эндобдж 97 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218955 Вильямсбург, ТЕХНИЧЕСКАЯ СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без ученого звания | 0 | 0 | 8 | 8 | 276 246 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 8 | 8 | 276 246 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 10 | 10 | 336,325 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 10 | 10 | 336 325 |) ' (15 Всего преподавателей-типов сотрудников | 0 | 0 | 18 | 18 | 612 571 |) ' ET конечный поток эндобдж 98 0 объект 1417 эндобдж 99 0 объект > эндобдж 100 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАТОР: 218964 Winthrop University СТРАНИЦА: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 42 | 3 | 1 | 46 | 3,384,422 |) ' (02 доцента | 42 | 6 | 1 | 49 | 3,245,120 |) ' (03 доцента | 4 | 25 | 8 | 37 | 1 947 407 |) ' (04 инструктора | 0 | 0 | 5 | 5 | 212087 |) ' (07, всего мужчин | 88 | 34 | 15 | 137 | 8,789,036 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (08 профессоров | 20 | 1 | 0 | 21 | 1,486,656 |) ' (09 доцентов | 31 | 4 | 0 | 35 | 2 050 224 |) ' (10 доцентов | 0 | 40 | 11 | 51 | 2 634 606 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 24 | 24 | 970 937 |) ' (Всего 14 женщин | 51 | 45 | 35 | 131 | 7 142 423 |) ' (Всего 15 преподавателей и типов сотрудников | 139 | 79 | 50 | 268 | 15 931 459 |) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 11/12 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (01 профессора | 1 | 0 | 0 | 1 | 84,592 |) ' (03 доцента | 0 | 0 | 1 | 1 | 52,600 |) ' (07, всего мужчин | 1 | 0 | 1 | 2 | 137,192 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (09 доцентов | 0 | 0 | 1 | 1 | 86 497 |) ' (10 доцентов | 0 | 1 | 0 | 1 | 80,000 |) ' (11 инструкторов | 0 | 0 | 1 | 1 | 60,000 |) ' (14 женщин, всего | 0 | 1 | 2 | 3 | 226 497 |) ' (15 Всего преподавателей-типов сотрудников | 1 | 1 | 3 | 5 | 363,689 |) ' ET конечный поток эндобдж 101 0 объект 2957 эндобдж 102 0 объект > эндобдж 103 0 объект > ручей BT 1 0 0 1 25 580 тм / F1 9 Tf 8 TL () ' (Осень 2006 г. FACULTY SA) ' () ' (ИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ НОМЕР: 218991 York Tech PAGE: 1) ' () ' (ДАТА ОБРАТНОГО ОТЧЕТА ОКОНЧАТЕЛЬНОГО IPEDS: 02/05/07) ' () ' (ЧАСТЬ A - ЗАРПЛАТЫ И НАПИСАНИЕ ФАКУЛЬТЕТА ПОСТОЯННОГО ВРЕМЕНИ) ' (СТРОКА NO SEX & ACAD.РАНГ | КОЛИЧЕСТВО | НОМЕР НЕТЕНЮРИРОВАННЫХ ФАК. | ИТОГО НОМ. ОБЩЕЙ ЗАРПЛАТЫ |) ' (| TENURED | TENURE TRK NOT TEN TRK. | FACULTY | OUTLAY $ |) ' () ' (------------------------------------------------- -------------------------------------------------- ----------) ' () ' (ФАКУЛЬТЕТ ПО КОНТРАКТАМ НА 9/10 МЕСЯЦЕВ) ' () ' (МУЖЧИНЫ) ' (06 Без академического звания | 0 | 0 | 50 | 50 | 2,296,863 |) ' (07, всего мужчин | 0 | 0 | 50 | 50 | 2,296,863 |) ' (ЖЕНЩИНЫ) ' (13 без академического звания | 0 | 0 | 66 | 66 | 3 067 008 |) ' (Всего 14 женщин | 0 | 0 | 66 | 66 | 3 067 008 |) ' (15 Всего преподавателей и типов сотрудников | 0 | 0 | 116 | 116 | 5 363 871 |) ' ET конечный поток эндобдж 104 0 объект 1417 эндобдж 1 0 объект > >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > эндобдж 5 0 obj > эндобдж xref 0 105 0000000000 65535 ф 0000077586 00000 п. 0000077668 00000 п. 0000077781 00000 п. 0000077899 00000 п. 0000078251 00000 п. 0000000017 00000 н. 0000000105 00000 н. 0000001581 00000 н. 0000001604 00000 н. 0000001693 00000 н. 0000003171 00000 п. 0000003195 00000 н. 0000003285 00000 н. 0000006408 00000 п. 0000006432 00000 н. 0000006522 00000 н. 0000008000 00000 н. 0000008024 00000 н. 0000008114 00000 п. 0000010817 00000 п. 0000010841 00000 п. 0000010931 00000 п. 0000014474 00000 п. 0000014498 00000 п. 0000014588 00000 п. 0000016066 00000 п. 0000016090 00000 н. 0000016180 00000 п. 0000017658 00000 п. 0000017682 00000 п. 0000017772 00000 п. 0000020580 00000 п. 0000020604 00000 п. 0000020694 00000 п. 0000022172 00000 п. 0000022196 00000 п. 0000022286 00000 п. 0000023764 00000 п. 0000023788 00000 п. 0000023878 00000 п. 0000027211 00000 п. 0000027235 00000 п. 0000027325 00000 н. 0000029440 00000 п. 0000029464 00000 н. 0000029554 00000 п. 0000031032 00000 п. 0000031056 00000 п. 0000031146 00000 п. 0000032624 00000 п. 0000032648 00000 н. 0000032738 00000 п. 0000034216 00000 п. 0000034240 00000 п. 0000034330 00000 п. 0000037453 00000 п. 0000037477 00000 п. 0000037567 00000 п. 0000040045 00000 п. 0000040069 00000 п. 0000040159 00000 п. 0000043912 00000 п. 0000043936 00000 п. 0000044026 00000 п. 0000046624 00000 н. 0000046648 00000 н. 0000046738 00000 п. 0000049220 00000 н. 0000049244 00000 п. 0000049334 00000 п. 0000052247 00000 п. 0000052271 00000 п. 0000052361 00000 п. 0000054423 00000 п. 0000054447 00000 п. 0000054537 00000 п. 0000058080 00000 п. 0000058104 00000 п. 0000058194 00000 п. 0000061422 00000 п. 0000061446 00000 п. 0000061536 00000 п. 0000064869 00000 п. 0000064893 00000 п. 0000064983 00000 п. 0000066461 00000 п. 0000066485 00000 п. 0000066575 00000 п. 0000068053 00000 п. 0000068077 00000 п. 0000068167 00000 п. 0000069645 00000 п. 0000069669 00000 п. 0000069759 00000 п. 0000071237 00000 п. 0000071261 00000 п. 0000071351 00000 п. 0000072829 00000 п. 0000072853 00000 п. 0000072944 00000 п. 0000075964 00000 п. 0000075989 00000 п. 0000076081 00000 п. 0000077561 00000 п. трейлер > startxref 78306 %% EOF 4 0 obj> эндобдж 5 0 obj> эндобдж 105 0 obj> / Кодировка >>>>> эндобдж 106 0 obj> эндобдж 107 0 obj> эндобдж 108 0 obj> эндобдж 109 0 obj> эндобдж 110 0 obj> поток 2007-04-06T16: 28: 20-04: 002007-04-06T16: 28: 20-04: 002007-04-06T16: 28: 20-04: 00application / pdfuuid: 62e989da-7a26-4aa2-a5ff-27bb473bf09duuid: 22b71cbc-bee5-4a81-bd24-8012333982ca конечный поток эндобдж xref 0 1 0000000021 65535 ф 4 2 0000080485 00000 п. 0000080761 00000 п. 12 1 0000000000 00001 е 18 1 0000000012 00001 е 21 1 0000000018 00001 е 105 6 0000080839 00000 п. 0000080967 00000 п. 0000081044 00000 п. 0000081135 00000 п. 0000082327 00000 п. 0000082419 00000 п. трейлер ] / Назад 78306 >> startxref 85554 %% EOF 4 0 obj> эндобдж 5 0 obj> эндобдж 109 0 obj> эндобдж 111 0 obj> поток 2007-04-06T16: 31: 14-04: 002007-04-06T16: 28: 20-04: 002007-04-06T16: 31: 14-04: 00application / pdfuuid: 62e989da-7a26-4aa2-a5ff-27bb473bf09duuid: fe83c4e5-3e65-42fd-8076-d3dd9d5163ec конечный поток эндобдж xref 0 1 0000000030 65535 ф 4 2 0000085993 00000 п.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *