Бульвар яна райниса д 2 к 2: О доме бульвар Яна Райниса дом 2 корпус 1 в Москве

Содержание

Как доехать до бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино на автобусе, метро, маршрутке или поезде?

Построить маршрут сейчас

Показать бульвар Яна Райниса 2, корп. 1, Северное Тушино, на карте

Маршруты до бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино на общественном транспорте

Эти транспортные маршруты проходят рядом с бульвар Яна Райниса 2, корп. 1

Как доехать до бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 на автобусе?

Нажмите на маршрут автобуса, чтобы увидеть пошаговую инструкцию с картами, временем прибытия и обновленным расписанием.

  • От точки Рублёво, null

    88 мин
  • От точки Aшан, Крылатское

    92 мин
  • От точки НМИЦ сердечно-сосудистой хирургии имени А.

    Н. Бакулева, null 122 мин
  • От точки Метро Крылатское, Крылатское

    118 мин
  • От точки Пляж Рублёво, Барвихинское

    72 мин
  • От точки ТП «Отрада», Отрадное

    48 мин
  • От точки Школа №1440, Крылатское

    119 мин
  • От точки Starbucks, Крылатское

    95 мин

Как доехать до бульвар Яна Райниса 2, корп.

1 на поезде?

Нажмите на маршрут поезда, чтобы увидеть пошаговую инструкцию с картами, временем прибытия и обновленным расписанием.

  • От точки Левобережный, Химки

    136 мин

Как доехать до бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 на метро?

Нажмите на маршрут метро, чтобы увидеть пошаговую инструкцию с картами, временем прибытия и обновленным расписанием.

  • От точки Метро Крылатское, Крылатское

    53 мин
  • От точки Школа №1440, Крылатское

    53 мин

Остановки Автобус рядом с бульвар Яна Райниса 2, корп.

1 в Северное Тушино

Остановки Маршрутка рядом с бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северное Тушино

Остановки Трамвай рядом с бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северное Тушино

Автобус линии до бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северное Тушино

Направления с бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в городе Северное Тушино к популярным местам:

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Продуктовый магазин

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Молл

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Кофейня

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1 до Колледж
  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Школа

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Торговый центр

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Университет

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Аэропорт

  • От бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1 до Больница
  • От бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 до Стадион

Вопросы и Ответы

  • Какие остановки находятся рядом с бульвар Яна Райниса 2, корп. 1?

    Ближайшие остановки к бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 :

    • Нелидовская ул. находится в 59 метров, 2 минут пешком.
    • Аэродромная находится в 293 метров, 5 минут пешком.
    • Метро Сходненская находится в 307 метров, 5 минут пешком.
    • Метро «Сходненская» находится в 347 метров, 5 минут пешком.
    • Аэродромная ул. находится в 471 метров, 7 минут пешком.
    • Бульв. Яна Райниса, 10 находится в 553 метров, 8 минут пешком.
    Подробная информация
  • Какие маршруты автобуса останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1

    Эти маршруты автобуса останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1: 199, 267, 400К, 96, Т70.

    Подробная информация
  • Какие маршруты поезда останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1

    Эти маршруты поезда останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1: D2.

    Подробная информация
  • Какие маршруты метро останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1

    Эти маршруты метро останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1: 7.

    Подробная информация
  • Какие маршруты маршрутки останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1

    Эти маршруты маршрутки останавливаются около адреса: бульвар Яна Райниса 2, корп. 1: 492К.

    Подробная информация
  • На каком расстоянии находится станция трамвая от бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино?

    Ближайшая станция трамвая около бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино находится в 5 мин ходьбы.

    Подробная информация
  • Какая ближайшая станция трамвая к бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1 в Северном Тушино?

    станция Метро «Сходненская» находится ближе всего к бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино.

    Подробная информация
  • На каком расстоянии находится остановка автобуса от бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино?

    Ближайшая остановка автобуса около бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино находится в 2 мин ходьбы.

    Подробная информация
  • Какая ближайшая остановка автобуса к бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1 в Северном Тушино?

    остановка Нелидовская ул. находится ближе всего к бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино.

    Подробная информация
  • На каком расстоянии находится станция маршрутки от бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино?

    Ближайшая станция маршрутки около бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино находится в 5 мин ходьбы.

    Подробная информация
  • Какая ближайшая станция маршрутки к бульвар Яна Райниса 2, корп.

    1 в Северном Тушино?

    Аэродромная и Метро Сходненская это ближайшие станции маршрутки к бульвар Яна Райниса 2, корп. 1 в Северном Тушино.

    Подробная информация

бульвар Яна Райниса : Северное Тушино : СЗАО : Организации Москвы

Список организаций, находящихся на бульвар Яна Райниса

Москва / СЗАО

125373, Москва, б-р Яна Райниса, д. 47, к.2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, б-р Яна Райниса, д. 4

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 47

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 47

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 4

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 4, корп. 6

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125363, г.Москва, б-р Яна Райниса, 1, к.1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, г.Москва, б-р Яна Райниса, 30, к.1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

123373, Москва, бульвар Яна Райниса, д.18, к.2; д.18, к.3

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, Москва, б-р Яна Райниса, д. 30, корп.2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125373, Москва, б-р Яна Райниса, д. 39, корп.1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125373, Москва, Яна Райниса бульв., д.47, корп.2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125373, Москва, б-р Яна Райниса, д. 35, корп. 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, Яна Райниса бульвар, д. 2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

Москва, Яна Райниса бульвар, 10

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

Москва, Яна Райниса бульвар, 24, корпус 2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

Москва, Яна Райниса бульвар, 19, корпус 2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

Москва, Яна Райниса бульвар, 43, корпус 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

123459, Москва, бульвар Яна Райниса, д. 17

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

123459, Москва, бульвар Яна Райниса, д. 17

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, б-р Яна Райниса, д. 2, к.5

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, Москва, бул. Яна Райниса, 22

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125459, Москва, бул. Яна Райниса, 12

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125373, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 47

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125480, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 4

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125363, Москва, б-р Яна Райниса, д. 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, Бульвар Яна Райниса, д. 2, корп. 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, Яна Райниса бульвар, д. 4, к. 2

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125373, Москва, Яна Райниса бульвар, 43, корп. 2

• Метро: Сходненская

Список организаций, обслуживающих бульвар Яна Райниса

СЗАО / Северное Тушино

125373, Москва, ул. Героев Панфиловцев, д. 51

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, ул. Туристская, д. 31, к. 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125480, Москва, б-р Яна Райниса, д. 4

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

Москва, ул. Пехотная, д.3, с.2

• Метро: Октябрьское поле

Москва / СЗАО

125363, г. Москва, Строительный проезд, 14А

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

125364, Москва, ул. Героев Панфиловцев, д.7, корп.5

• Метро: Сходненская

СЗАО / Южное Тушино

125363, г. Москва, ул. Штурвальная, д. 5, корп. 1

• Метро: Сходненская

СЗАО / Северное Тушино

23480, Москва, ул. Вилиса Лациса, д. 25, корп. 1

• Метро: Планерная

СЗАО / Северное Тушино

125480, г. Москва, ул. Вилиса Лациса, д. 4

• Метро: Планерная

СЗАО / Северное Тушино

125373, г. Москва, бульвар Яна Райниса, д. 47

• Метро: Сходненская

Почта Банк Москва бул. Яна Райниса, д. 12

Адреса Почта Банка поблизости

  • Почта Банк

    Отделение Банкомат

    г. Москва, бул. Яна Райниса, д. 22, корп. 1

    622 м

  • Почта Банк

    Банкомат

    г. Москва, ул. Героев Панфиловцев, д. 12, корп. 1

    941 м

  • Почта Банк

    Отделение

    г. Москва, ул. Героев Панфиловцев, д. 12, стр. 1

    941 м

  • Почта Банк

    Отделение

    г. Москва, ул. Героев Панфиловцев, д. 12, стр. 2

    1 км

  • Почта Банк

    Отделение

    г. Москва, ул. Сходненская, д. 44/17

    1 км

  • Почта Банк

    Отделение Банкомат

    г. Москва, ул. Планерная, д. 12

    1,3 км

  • Почта Банк

    Банкомат

    г. Москва, Химкинский бул., д. 1

    1,6 км

  • Почта Банк

    Отделение

    г. Москва, бул. Химкинский, д. 1

    1,6 км

Адреса других банков поблизости

  • МТС Банк

    Банкомат

    г. Москва, бул. Яна Райниса, д. 8

    127 м

  • СберБанк

    Отделение Банкомат

    г. Москва, ул. Туристская, д. 19, корп. 1

    307 м

  • Росбанк

    Отделение

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 4, корп. 1

    315 м

  • Росбанк

    Банкомат

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 4

    321 м

  • ВТБ

    Банкомат

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 18, корп. 1

    462 м

  • Россельхозбанк

    Отделение

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 2, корп. 1

    575 м

  • Банк Русский Стандарт

    Отделение Банкомат

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 2, корп. 1

    575 м

  • Альфа-Банк

    Отделение Банкомат

    г. Москва, б-р Яна Райниса, д. 2, корп. 1

    575 м

Еще немного про Почта Банк в Москве

услуги, рейтинги, отзывы

Смотреть рейтинги

Отзывы

Читать отзывы

Вам так же будет интересно

Полезные статьи

  • Самые выгодные банки для малого бизнеса

    Открытие расчётного счёта в банке становится всё более востребованной услугой. И не только среди коммерческих компаний. Многие фрилансеры открывают ИП и тоже нуждаются расчётно-кассовом обслуживании. О том, в каком банке их примут радушнее, и поговорим сегодня.

  • Договор эквайринга

    При подключении услуги эквайринга с клиентом заключают договор. Как выглядит договор эквайринга и на что обратить внимание, подписывая его, расскажем далее.

  • Расчётный счёт в СМП

    В статье расскажем, как открыть расчётный счёт для ИП и ООО в СМП Банке, какие документы для этого потребуются.

  • Эквайринг банка Точка

    «Точка» – совместный финансовый проект банков «Киви» и «ФК Открытие». Эквайринг – одно из ключевых направлений деятельности Точки. В статье расскажем, какие виды эквайринга предлагает Точка, каковы их особенности и стоимость.

  • Как привлечь деньги на стартап

    Какой бы гениальной ни была бизнес-идея, ей будет сложно воплотиться в жизнь без финансирования. Разберёмся, каковы этапы финансирования стартапа и как привлечь инвестиции для развития проекта.

  • 9 вещей, которые нужно знать перед открытием ИП

    Статус ИП даёт возможность заниматься предпринимательством без образования юридического лица. Разберёмся, что нужно знать перед тем, как зарегистрироваться в качестве ИП.

  • Читать все статьи

Популярные разделы

  • Микрозаймы

  • Вклады

  • Ипотека

  • Автокредиты

  • Рейтинги банков

    2022
  • Дебетовые карты

  • Потреб кредиты

  • Кредитные карты

Предложение месяца

  • Альфа-БанкКредит наличными

    от 4,5 %

    до 7 500 000 ₽до 5 лет

  • СберБанкРефинансирование кредитов

    от 4,9 %

    до 10 000 000 ₽до 5 лет

  • Банк СинараЗапросто

    от 6,9 %

    до 1 550 000 ₽до 5 лет

  • РоссельхозбанкКредит на любые цели

    от 7,5 %

    до 5 000 000 ₽до 5 лет

  • Норвик БанкЗалоговый кредит+

    от 8,8 %

    до 20 000 000 ₽до 20 лет

  • Центр-инвестЧестный (без страховки)

    от 13 %

    до 300 000 ₽до 4 лет

На сайте www. finuslugi.ru предоставляются услуги оператора финансовой платформы ПАО Московская Биржа, а также услуги ООО «МБ Маркетплейс», организации, не являющейся оператором финансовой платформы в соответствии с Федеральным законом от 20.07.2020 №211-ФЗ «О совершении финансовых сделок с использованием финансовой платформы». Услуги оператора финансовой платформы ПАО Московская Биржа обозначены пометкой «Открыть онлайн». Иная информация на сайте www.finuslugi.ru считается размещенной ООО «МБ Маркетплейс», если иное явно не следует из существа размещаемой информации. ООО «МБ Маркетплейс» входит в Группу «Московская Биржа».

Группа «Московская Биржа» — ПАО Московская Биржа и юридические лица, находящиеся под прямым или косвенным контролем ПАО Московская Биржа.

Copyright © Московская Биржа, 2011-2022. Все права на информацию, результаты интеллектуальной деятельности и средства индивидуализации юридических лиц, размещенные на настоящем сайте ПАО Московская Биржа, защищены в соответствии с российским законодательством. Прежде чем приступить к использованию сайта предлагаем ознакомиться с Пользовательским соглашением и Политикой конфиденциальности. Воспроизведение, распространение и иное использование информации, результатов интеллектуальной деятельности и средств индивидуализации, размещенных на сайте, или их частей допускается только с предварительного письменного согласия ПАО Московская Биржа. Включено Банком России в реестр операторов финансовых платформ 27.08.2020.

Нужна помощь?

Напишите в чат

Отвечаем с 7.00 до 23.00
по московскому времени

Whatsapp
Telegram

Рукавная гастрэктомия в разных возрастных группах: сравнительное исследование 5-летних результатов

Сохранить цитату в файл

Формат: Резюме (текст)PubMedPMIDAbstract (текст)CSV

Добавить в коллекции

  • Создать новую коллекцию
  • Добавить в существующую коллекцию

Назовите свою коллекцию:

Имя должно содержать менее 100 символов

Выберите коллекцию:

Не удалось загрузить вашу коллекцию из-за ошибки
Повторите попытку

Добавить в мою библиографию

  • Моя библиография

Не удалось загрузить делегатов из-за ошибки
Повторите попытку

Ваш сохраненный поиск

Название сохраненного поиска:

Условия поиска:

Тестовые условия поиска

Эл. адрес: (изменить)

Который день? Первое воскресеньеПервый понедельникПервый вторникПервая средаПервый четвергПервая пятницаПервая субботаПервый деньПервый рабочий день

Который день? ВоскресеньеПонедельникВторникСредаЧетвергПятницаСуббота

Формат отчета: SummarySummary (text)AbstractAbstract (text)PubMed

Отправить максимум: 1 шт. 5 шт. 10 шт. 20 шт. 50 шт. 100 шт. 200 шт.

Отправить, даже если нет новых результатов

Необязательный текст в электронном письме:

Создайте файл для внешнего программного обеспечения для управления цитированием

Полнотекстовые ссылки

Спрингер

Полнотекстовые ссылки

Сравнительное исследование

. 2016 фев; 26 (2): 289-95.

doi: 10.1007/s11695-015-1735-2.

Д Керен 1 2 , Я имею значение 3 , Т Райнис 4

Принадлежности

  • 1 Отделения гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль. Dr.deankeren@gmail.com.
  • 2 Клиника бариатрической гастроэнтерологии: Отделение гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, проспект Голомб, 47, а/я 4840, Хайфа, 31048, Израиль. Dr.deankeren@gmail.com.
  • 3 Общая хирургия, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль.
  • 4 Отделения гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль.
  • PMID: 25986430
  • DOI: 10.1007/s11695-015-1735-2

Сравнительное исследование

D Keren et al. Обес Сур. 2016 фев.

. 2016 фев; 26 (2): 289-95.

doi: 10.1007/s11695-015-1735-2.

Авторы

Д Керен 1 2 , Я имею значение 3 , Т Райнис 4

Принадлежности

  • 1 Отделения гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль. Dr.deankeren@gmail.com.
  • 2 Клиника бариатрической гастроэнтерологии: Отделение гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, проспект Голомб, 47, а/я 4840, Хайфа, 31048, Израиль. Dr.deankeren@gmail.com.
  • 3 Общая хирургия, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль.
  • 4 Отделения гастроэнтерологии, Медицинский центр Бнай-Цион, филиал Медицинского факультета Раппапорта, Технион-Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль.
  • PMID: 25986430
  • DOI: 10. 1007/s11695-015-1735-2

Абстрактный

Фон: Лапароскопическая рукавная гастрэктомия (ЛСГ) в последние 10 лет используется чаще. По мере старения населения все больше пожилых людей будут страдать от сопутствующих заболеваний, связанных с весом, в результате чего бариатрическая хирургия становится доминирующим решением для улучшения здоровья и качества жизни. Мы оценили отдаленные результаты ЛСГ у пациентов пожилого возраста.

Методы: Мы провели ретроспективный обзор карт пациентов, перенесших ЛСГ в период с января 2007 г. по август 2009 г. Мы разделили 123 пациента на возрастные группы до 35 лет (n = 43), 35-55 лет (n = 59) и > 55 лет (n = 21). .

Полученные результаты: Соответствующая средняя потеря индекса избыточной массы тела и потеря избыточной массы тела составила 42,5% ± 3,1% и 41,3% ± 12,3% для возрастной группы до 35 лет, 48,7% ± 4,1% и 45,6% ± 10,6% для возрастной группы 35-55 лет. и 53,6% ± 4,6% и 52,1% ± 11,1% для возрастной группы старше 55 лет. Последующие показатели приверженности при посещении через 5 лет составили 23,85, 31,11 и 47,61% для возрастных групп <35, 35-55 и >55 лет соответственно. Соответствующие баллы Бариатрического анализа и системы отчетности составили 3,7 ± 1,1, 4,0 ± 0,7 и 5,3 ± 1,3. Сопутствующие заболевания у всех пациентов значительно улучшились, с недостоверным распределением между тремя группами для каждого сопутствующего заболевания.

Выводы: LSG — полезный инструмент для людей, которые хотят изменить свои привычки в еде и похудеть здоровым образом. Это исследование предполагает, что долгосрочная потеря веса, улучшение сопутствующих заболеваний и соблюдение режима наблюдения имеют важное значение для пациентов старше 55 лет.

Ключевые слова: Бариатрической хирургии; пожилые люди; Долгосрочные результаты; Рукавная гастрэктомия.

Похожие статьи

  • Результаты лапароскопической рукавной резекции желудка и обходного желудочного анастомоза по Ру у пациентов старше 60 лет.

    Аббас М., Кумелла Л., Чжан Ю., Чой Дж., Вемулапалли П., Мелвин В.С., Камачо Д. Аббас М. и др. Обес Сур. 2015 декабря; 25 (12): 2251-6. doi: 10.1007/s11695-015-1712-9. Обес Сур. 2015. PMID: 26001882

  • Лапароскопическая рукавная гастрэктомия как одномоментная процедура лечения морбидного ожирения и связанное с этим качество жизни, разрешение сопутствующих заболеваний, пищевая толерантность и снижение массы тела в течение 6 лет.

    Д’Ондт М., Ваннесте С., Поттел Х., Девриндт Д., Ван Рой Ф., Ванстенкисте Ф. Д’Ондт М. и соавт. Surg Endosc. 2011 августа; 25 (8): 2498-504. doi: 10.1007/s00464-011-1572-x. Epub 2011 27 февраля. Surg Endosc. 2011. PMID: 21359900

  • Лапароскопическая рукавная гастрэктомия: отдаленные результаты снижения веса.

    Хирт Д.А., Джонс Э.Л., Ротшильд К.Б., Митчелл Б.К., Шон Дж.А. Хирт Д.А. и соавт. Surg Obes Relat Dis. 2015 сен-октябрь;11(5):1004-7. doi: 10.1016/j.soard.2015.02.016. Epub 2015 24 февраля. Surg Obes Relat Dis. 2015. PMID: 25980329

  • Бариатрическая хирургия у пожилых пациентов. Сравнение бандажирования желудка и рукавной гастрэктомии с пятилетним наблюдением.

    Musella M, Milone M, Maietta P, Bianco P, Coretti G, Pisapia A, Gaudioso D, Milone F. Муселла М. и др. Int J Surg. 2014;12 Приложение 2:S69-S72. doi: 10.1016/j.ijsu.2014.08. 377. Epub 2014 23 августа. Int J Surg. 2014. PMID: 25159229

  • Обзор долгосрочных результатов потери веса после лапароскопической рукавной гастрэктомии.

    Диамантис Т., Апостолу К.Г., Александру А., Гриниатсос Дж., Фелекоурас Э., Цигрис К. Диамантис Т. и др. Surg Obes Relat Dis. 2014 янв-февраль;10(1):177-83. doi: 10.1016/j.soard.2013.11.007. Epub 2013 21 ноября. Surg Obes Relat Dis. 2014. PMID: 24507083 Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Исходы бариатрической хирургии у гериатрических пациентов ≥ 65 лет: исследование в одном учреждении.

    Бхандари М., Матхур В., Фоби М., Коста С. Бхандари М. и др. Обес Сур. 2019 май; 29(5):1470-1476. doi: 10.1007/s11695-019-03718-6. Обес Сур. 2019. PMID: 30721427

  • Пятилетние результаты автономной первичной рукавной гастрэктомии.

    Бойл М., Каррутерс Н., Махавар К.К. Бойл М. и др. Обес Сур. 2019 май; 29(5):1607-1613. doi: 10.1007/s11695-019-03756-0. Обес Сур. 2019. PMID: 30719651

  • Перспектива пациента в хирургии ожирения: цели по снижению веса и улучшению формы тела в проспективном когортном исследовании.

    Никель Ф., Шмидт Л., Сандер Дж., Тапкинг С., Брукнер Т., Мюллер-Штич Б.П., Фишер Л. Никель Ф. и др. Обес Факты. 2018;11(6):466-474. дои: 10.1159/000493372. Epub 2018 11 декабря. Обес Факты. 2018. PMID: 30537759 Бесплатная статья ЧВК.

  • Влияет ли инфекция Helicobacter pylori на частоту основных послеоперационных осложнений после рукавной гастрэктомии? Ретроспективное когортное исследование в эндемичном регионе.

    Серин К.Р., Акюз Ю., Батман Б., Уймаз Д.С., Алтун Х. Серин К.Р. и соавт. Терк Дж. Гастроэнтерол. 2018 июль; 29 (4): 379-383. doi: 10.5152/tjg.2018.17373. Терк Дж. Гастроэнтерол. 2018. PMID: 30249550 Бесплатная статья ЧВК.

  • Заболеваемость, показания и прогностические факторы для госпитализации в отделение интенсивной терапии у пожилых пациентов с высоким риском, перенесших лапароскопическую рукавную гастрэктомию.

    Хидир Н., Эль-Матбули М., Аль Кувари М., Гагнер М., Башах М. Хидир Н. и др. Обес Сур. 2018 Сен;28(9)):2603-2608. doi: 10.1007/s11695-018-3221-0. Обес Сур. 2018. PMID: 29616465

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

использованная литература

    1. Энн Интерн Мед. 1985 декабрь; 103 (6 (часть 2)): 1073-77 — пабмед
    1. БМЖ. 2010, 26 августа; 341:c4296 — пабмед
    1. Surg Obes Relat Dis. 2007 март-апрель;3(2):163-9; обсуждение 169-70 — пабмед
    1. Обес Сур. 2013 авг; 23 (8): 1286-9 — пабмед
    1. Surg Endosc. 2011 августа; 25 (8): 2498-504 — пабмед

Типы публикаций

термины MeSH

Полнотекстовые ссылки

Спрингер

Укажите

Формат: ААД АПА МДА НЛМ

Отправить по номеру

Цепь процессивного фосфорилирования с множественными киназными входами и взаимно отклоняющимися путями контролирует решение G1/S

Введение

Недавние работы по многосайтовым сетям фосфорилирования циклинзависимой киназы (CDK) выявили новый уровень сложности обработки сигналов, основанный на сигнальных путях, закодированных в неупорядоченных белках или неупорядоченных участках белков 1,2,3, 4 . Как основные регуляторы цикла клеточного деления, CDK используют комбинацию различных стыковочных взаимодействий и порогов активности для временного упорядочения фосфорилирования сотен своих мишеней в клеточном цикле 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . Большинство мишеней CDK фосфорилированы во многих сайтах, распределенных по неупорядоченным участкам этих белков -14-. В фазе G1, C иклин-зависимая K иназа I ингибиторы (CKI), такие как неупорядоченный белок Sic1 ( S субстрат I ингибитор C dk) p27 у людей 17 , убедитесь, что S- и M-фазы, способствующие активности CDK, подавлены, чтобы разрешить лицензирование происхождения и другие процессы G1, требующие низкой активности CDK 16,18 . Интересно, что как Sic1, так и p27 имеют, казалось бы, противоречивые функции, действуя одновременно как ингибитор и субстрат для CDK. Хотя его ингибирующая функция удерживает активность CDK на низком уровне за счет высокой наномолярной аффинности, функция субстрата включает индуцированную фосфорилированием деградацию CKI через убиквитин-протеасомный путь в G1/S, чтобы высвободить свободную активность CDK в S-фазе 19,20 .

В таких взаимно антагонистических отношениях Sic1, внутренне неупорядоченный белок с 10 сайтами фосфорилирования CDK, ингибирует комплекс S-фазы CDK у почкующихся дрожжей, тогда как тот же самый S-CDK нацелен на его деградацию путем мультисайтового фосфорилирования N-конца Sic1 на переходе G1/S (рис. 1а). Деградация фосфорилированного Sic1 19,21 вызывает высвобождение свободного S-CDK, что, в свою очередь, дополнительно ускоряет фосфорилирование и деградацию Sic1 за счет положительной обратной связи 1,16,22,23,24,25 . Результирующий выброс свободного S-CDK запускает S-фазу. Первые стадии процесса мультисайтового фосфорилирования Sic1 инициируются G1-CDK, комплексом, который не ингибируется Sic1 1,26,27 . Фосфаты добавляются ступенчато путем докинга фосфоадаптером Cks1 в направлении N-C-конца с помощью сложной сети взаимодействий (рис. 1б, в). Свободно возникающая S-CDK завершает каскад, завершая фосфорилирование двух дифосфодегронов, необходимых для деградации.

Рис. 1: Процессуальное фосфорилирование Sic1 в составе ингибирующего комплекса S-CDK–Sic1.

a Модель для переходного переключателя G1/S в S. cerevisiae . Ингибитор S-CDK Sic1 сначала подвергается первичному фосфорилированию с помощью G1-CDK, за которым следует фосфорилирование дегронов небольшой фракцией неингибированного S-CDK, направляя Sic1 к опосредованному Cdc4-SCF убиквитинированию и протеолизу. Дальнейшее высвобождение свободного S-CDK ускоряет деградацию Sic1. b Общая динамика последовательного фосфорилирования Sic1 комплексами циклин–Cdk1–Cks1. Показано, что неупорядоченный N-концевой неингибирующий фрагмент (аминокислоты 1–215) принимает другую конфигурацию при связывании с комплексами CDK, чтобы облегчить N-C-концевое многосайтовое фосфорилирование. c Схема, показывающая ключевые взаимодействия, модули и мотивы последовательности, участвующие в регуляции Sic1. d Авторадиограмма анализа киназы 32 P, показывающая внутрикомплексное фосфорилирование Sic1 в восстановленном комплексе S-CDK-Sic1 (Clb5-Cdk1-Cks1-Sic1) при различных концентрациях Sic1. В качестве внешнего субстрата использовали гистон h2. Версия Sic1 со всеми сайтами CDK, мутировавшими в аланин, была включена в качестве контроля (правая панель). e Анализы киназ с превышением концентрации Sic1 над комплексом S-CDK или превышением концентрации S-CDK над Sic1 проводили с помощью Phos-tag и обычного (нижние панели) SDS-PAGE. Показаны соответствующие авторадиограммы. В случае управления без Sic1, нет 32 P-сигнал наблюдался в геле Phos-tag. Эксперименты для d и e проводились дважды с аналогичным результатом. Полные рентгенограммы геля представлены на дополнительном рисунке 7. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Полноразмерное изображение

Однако остается загадкой, как возможно, что S-CDK ингибируется Sic1, но также действует как основная движущая сила для фосфорилирования и деградации Sic1 при переходе G1/S. Эта двойная отрицательная петля обратной связи также предполагает противоречивую одновременную роль Sic1 в качестве фосфоразлагаемого субстрата и ингибитора, для чего потребуется барьер, предотвращающий преждевременное фосфорилирование Sic1 из-за утечки киназной активности внутри ингибирующего комплекса или, иным образом, жесткого контроля над G1. /S будет потерян.

В текущем исследовании мы показываем, что внутри ингибирующего комплекса, несмотря на ингибирование по отношению к другим мишеням, комплекс S-CDK (Clb5–Cdk1–Cks1) по-прежнему эффективно фосфорилирует Sic1. Мы обнаружили, что эта внутрикомплексная мультисайтовая сеть фосфорилирования содержит два конкурирующих пути, один из которых ведет к фосфорилированию degron, а другой функционирует как отклоняющий путь, который завершает путь degron. Используя флуоресцентную микроскопию живых клеток, мы продемонстрировали, как диверсионное фосфорилирование с помощью S-CDK в ингибиторном комплексе предотвращает утечку киназного сигнала через фосфо-дегроновый путь. Мы также показываем, что диверсионный путь может быть инициирован МАРК с феромонового пути, чтобы гарантировать остановку G1, или, альтернативно, дивергенция может быть преодолена за счет инициирования фосфорилирования в пределах фосфо-дегронового пути комплексом G1-CDK, который накапливается после старта. решение. В этой статье будет описан механизм, который позволяет неупорядоченной молекуле Sic1 с ее линейно закодированным паттерном фосфорилирования действовать как процессор, который интегрирует множественные киназные входы.

Результаты

Процессуальное фосфорилирование в ингибирующем комплексе

Для изучения утечки фосфорилирования в ингибирующем комплексе Sic1–Clb5–Cdk1–Cks1 мы восстановили комплекс in vitro и провели стандартный киназный анализ с последующим SDS-PAGE 32 P авторадиография. Мы заметили, что в восстановленном комплексе, несмотря на ингибирование контрольного гистона-мишени h2, комплекс S-CDK (Clb5-Cdk1-Cks1) по-прежнему эффективно фосфорилирует Sic1 (рис. 1d). Использование реагента Phos-tag, обеспечивающего лучшее разрешение фосфорилированных форм в гелях 28 мы наблюдали начальную очень быструю стадию многосайтового фосфорилирования с последующей терминацией (рис. 1e; дополнительная рис. 1a). Было обнаружено, что интенсивность и общий характер фосфорилирования не зависят от кратного превышения Sic1 над Clb5-Cdk1-Cks1 (комплекс CDK). Напротив, смесь для анализа с избытком CDK по сравнению с Sic1 давала полный нетерминированный паттерн фосфорилирования с несколькими сайтами, по-видимому, из-за внекомплексного нацеливания на Sic1 в ингибирующем комплексе неингибируемой CDK (рис. 1e). Мы также провели эксперимент, аналогичный показанному на рис. 1e, за исключением того, что ингибиторный комплекс был предварительно сформирован с использованием избытка версии Sic1 с аланин-мутированными N-концевыми мотивами CDK (8AP-Sic1). Затем был добавлен полноразмерный Sic1 дикого типа или неингибирующий Sic1ΔC (дополнительный рисунок 1b). Значительного фосфорилирования добавленного Sic1 не наблюдалось, что ясно указывает на то, что фосфорилирование происходит только внутри комплекса и не является мишенью для экзогенного субстрата.

Качественный масс-спектрометрический анализ терминированного ингибиторного комплекса выявил пептиды, содержащие фосфорилированные сайты CDK T5, T45 и T173 (дополнительный рисунок 1c). Сайт T5 является сайтом праймирования N-C-концевого Cks1-зависимого пути дегрона 1,2 (рис. 1b, c). Сайт T173, однако, еще не имеет хорошо объясненной механистической функции, но предполагается, что он либо препятствует связыванию Cdc4-SCF, либо способствует ингибированию S-CDK 29,30,31,32 . Мы предположили, что сайт T173, несущий идеальный Cks1-связывающий фосфомотив 33 и расположенный примерно на сотню аминокислот ниже N-концевых участков дергона, может служить отвлекающим сайтом связывания Cks1, который может вызывать терминацию внутри комплекса быстрого процессивного фосфорилирования N-концевого пути.

Мутации T173S и T173A вызывали быстрое накопление гиперфосфорилированных форм (рис. 2а, б), что согласуется с гипотезой, поскольку фосфосвязывающий карман Cks1 связывает только фосфо-треонин, содержащий сайты CDK, а не фосфосерины 2,33 . Аналогичный результат был получен, когда Cks1 был исключен из реакции (дополнительный рисунок 1a). Напротив, фосфорилирование неингибирующей укороченной на С-конце версии Sic1ΔC 34 не показало какой-либо чувствительности к мутации T173 (дополнительный рисунок 1d). Наконец, важно отметить, что мутации T173A или T173S не влияли на способность Sic1 ингибировать фосфорилирование h2, что свидетельствует против роли T173 в ингибирующем взаимодействии 31 (рис. 2a).

Рис. 2: Внутрикомплексное фосфорилирование N-концевой мультисайтовой сети фосфорилирования Sic1.

a Внутрикомплексное фосфорилирование различных мутантов сайта фосфорилирования Sic1 с помощью Clb5-Cdk1 отслеживали в присутствии или в отсутствие фосфоадапторного белка Cks1. 9SP-Sic1 обозначает мутантную форму, в которой все сайты фосфорилирования TP были заменены на SP. Верхние гели содержали Phos-tag для разделения фосфорилированных форм. Контрольные инкубации, показанные на нижних панелях, являются обычным SDS-PAGE и также содержат внешний субстрат Histone h2. b Количественное изменение во времени гиперфосфорилированных форм из анализов, показанных в a . Количественный сегмент обозначен красной скобкой слева в a . 100% фосфорилирование соответствует общей радиоактивности, определяемой количественно по всем фосфополосам соответствующей дорожки. c Три разные версии Sic1 с замененными областями вокруг сайтов T5 и T173 Cdk1, как указано на схемах, были проанализированы с использованием киназного анализа Phos-tag, как в и . Эксперименты для a и c проводились дважды с одинаковым результатом. d Два альтернативных и взаимно конкурирующих способа фосфорилирования Sic1 в составе ингибирующего комплекса. S-CDK фосфорилирует Sic1 внутри ингибирующего комплекса, нацеливаясь как на N-, так и на C-концевые сайты. В случае, если фосфорилированный Т173 связывается с карманом Cks1, процесс N-концевого фосфорилирования прекращается. e Схематическое изображение стадий внутрикомплексного фосфорилирования и повышение вероятности их завершения за счет диверсионного фосфорилирования. Полные рентгенограммы геля представлены на дополнительном рисунке 7. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Полноразмерное изображение

Напротив, когда N-концевой сайт праймирования T5 был мутирован серином или аланином, наблюдались относительно менее гиперфосфорилированные формы по сравнению с Sic1 дикого типа (рис. 2a, b; дополнительный рис. . 1д). Кроме того, когда все сайты CDK на основе треонина были заменены на серины (9SP-Sic1), лестница внутрикомплексного фосфорилирования напоминала эксперимент без Cks1 (рис. 2a, b). Интересно, что мотивы стыковки RXL, специфичные для S-CDK 35,36,37,38 не влиял на внутрикомплексный процесс, тогда как мутация в ингибиторном домене, которая, как известно, снижает ингибиторную активность Sic1 34 , увеличивала общее фосфорилирование (дополнительная рис. 1e). Точно так же митотические циклиновые комплексы B-типа Clb3- и Clb2-Cdk1-Cks1 демонстрировали аналогичные модели внутрикомплексного фосфорилирования, что предполагает его роль также в митотическом выходе, когда Sic1 начинает накапливаться (дополнительная рис. 1f). Эти результаты предполагают, что внутрикомплексное фосфорилирование N-концевого пути дегрона поддерживается механизмом докинга Cks1 и взаимодействием ингибиторного домена.

Чтобы ответить на вопрос, почему N-концевой T5 может действовать как Cks1-связывающий праймерный сайт, который усиливает многосайтовое фосфорилирование, а потенциальный диверсионный сайт T173 действует через Cks1 как тупиковый терминатор, мы поменяли местами три разных сегмента последовательности, окружающих сайты T5. и T173, и измерили внутрикомплексное фосфорилирование in vitro с помощью анализа Phos-tag (рис. 2c). Замена минимального мотива CDK (замена 1) лишь слегка повлияла на терминацию и динамику лестницы фосфорилирования. Напротив, когда замененный сегмент содержал более длинные последовательности, идущие в направлении С-конца от Т5 или Т173 (замена 2, 3), терминация не наблюдалась (рис. 2с). Эти данные свидетельствуют о том, что сегмент последовательности на С-концевой стороне консенсусного сайта T173 CDK содержит мотив, который, по-видимому, добавляет аффинность к взаимодействию pT173-Cks1, возможно, посредством связывания с поверхностью модуля Cks1-Cdk1. Кроме того, аминокислотная последовательность, окружающая положение T173, высококонсервативна даже среди отдаленных видов дрожжей (дополнительное примечание 1). Это открытие неожиданно и демонстрирует, что разные сайты pTP могут иметь значительно различную аффинность к Cks1, что зависит от более широкого контекста последовательности вдоль сегмента неупорядоченного белка. Это позволяет сайтам pTP действовать либо как энхансеры, либо как ингибиторы процесса многосайтового фосфорилирования, и это объясняет причину наблюдаемого диверсионного паттерна терминации внутри комплекса.

Наконец, чтобы продемонстрировать, что Cks1 был связан с ингибирующим комплексом через сайт pT173 in vivo, мы провели коиммунопреципитацию комплекса Clb5-TAP-Cdk1-Cks1-Sic1-6HA через TAP-метку из двух штаммов с либо аллели SIC1–6HA дикого типа, либо аллели T173A–SIC1–6HA. Cks1 был ко-иммунопреципитирован из штамма, экспрессирующего белок Sic1-6HA дикого типа, но не T173A-Sic1-6HA (дополнительный рисунок 1g), что подтверждает, что T173 фосфорилирован, а терминированный комплекс образуется in vivo. Представленные эксперименты подтверждают модель двух альтернативных путей фосфорилирования, конкурирующих за фосфокарман Cks1 и за активный центр CDK в составе ингибиторного комплекса, при этом праймированный путь Т173 ведет к терминации фосфорилирования N-концевого пути дегрон (рис. 2г, д).

Специфичность сайта фосфорилирования теряется в комплексе

Мы оценили стехиометрию внутрикомплексного фосфорилирования Sic1 по сравнению с ингибированным комплексом CDK, используя титрование активного сайта Cdk1 ингибирующей тирозинкиназой Swe1 (рис. 3a, b). Выявлено, что в случае Cks1 дикого типа к Sic1 добавлялось до 6 фосфатов на комплекс CDK, тогда как в случае реакции без Cks1, поразительно, количество фосфатов на Sic1 значительно превышало количество консенсусных сайтов CDK (рис. 3б). Этот результат свидетельствует о том, что в случае отсутствия терминации, опосредованной pT173-Cks1, S-CDK продолжает фосфорилировать различные сайты в ингибиторном комплексе. Поскольку количество добавленных фосфатов превышает количество консенсусных сайтов CDK в Sic1, неконсенсусные сайты также должны быть нацелены. Это говорит о том, что в тесном ингибиторном комплексе сайт-специфичность CDK утрачивается.

Рис. 3: Специфичность к сайту фосфорилирования утрачивается в пределах ингибирующего комплекса.

a Стехиометрию внутрикомплексного фосфорилирования Sic1 in vitro определяли с использованием ингибирующей тирозинкиназы Swe1. Монофосфорилирование Y19-Cdk1 с помощью Swe1 использовали в качестве количественного эталона для оценки количества фосфатов, добавленных на молекулу Sic1 в отдельном анализе киназы S-CDK (Clb5-Cdk1-Cks1), загруженном в тот же гель. Столбцы представляют собой средний уровень, полученный из данных двух значений, полученных из двух независимых экспериментов. Значения нанесены по отдельности незаштрихованными кружками. b Стехиометрия внутрикомплексного фосфорилирования Sic1 в присутствии или отсутствии Cks1 в анализируемой смеси. Пунктирные линии представляют собой стандартное отклонение временного хода, полученное в результате двух независимых экспериментов. c Графики, демонстрирующие динамику внутрикомплексного фосфорилирования Clb5-Cdk1-Cks1-Sic1 версий Sic1, содержащих только выбранные сайты CDK, при этом остальные сайты CDK мутированы в аланин. Графики, полученные из двух независимых экспериментов, почти перекрывались. d Индивидуальные профили фосфорилирования, показанные на c , нанесены вместе с профилем фосфорилирования Sic1 дикого типа для сравнения. 9AP обозначает версию, в которой все сайты CDK мутированы в аланин. Пунктирные линии представляют собой стандартное отклонение временного хода, полученное в результате двух независимых экспериментов. Полные аминокислотные последовательности Sic1 можно найти в файле исходных данных. e Фосфорилирование in vitro версий Sic1ΔC, содержащих указанные сайты CDK, при этом остальные сайты CDK мутировали в аланины, чтобы продемонстрировать Cks1-опосредованное двойное фосфорилирование диверсионных сайтов с использованием комплекса Clb5-Cdk1-Cks1. Показаны авторадиограммы Phos-tag SDS-PAGE. f График, демонстрирующий дефосфорилирование Sic1 в комплексе Sic1–Clb5–Cdk1–Cks1 лямбда-фосфатазой. Нанесенные линии тренда были получены путем подгонки точек данных, как описано в разделе «Методы». Графики, полученные из двух независимых экспериментов, перекрывались. Эксперименты для a f проводились дважды с аналогичным результатом. Полные рентгенограммы геля представлены на дополнительном рисунке 7. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Изображение в натуральную величину

Интересно, что когда версии Sic1, содержащие только отдельные одиночные сайты, тестировались в анализе ингибиторного комплекса, мы наблюдали, что по сравнению с относительно медленными сайтами N-концевого фосфорилирования оба сайта T173 и S191 фосфорилировались быстро почти до 1 фосфата на молекулу Sic1 (рис. 3в). В случае T173 процесс был впоследствии прекращен, в то время как версия S191 продолжала накапливать фосфаты, указывая на то, что pT173 блокирует процесс посредством Cks1-зависимого тупикового режима терминации. Поразительно, но все версии Sic1, содержащие один сайт CDK, за исключением конструкции, содержащей только Т173, демонстрировали линейное увеличение сигнала фосфорилирования, которое превышало стехиометрию 1:1 на ингибиторный комплекс (рис. 3c, d). Версия Sic1 только с сайтом T5 могла получить до 9фосфаты, несмотря на то, что это единственный консенсусный сайт CDK в молекуле. Это указывает на то, что взаимодействие pT5-Cks1 в сочетании с ингибирующим докингом через С-концевой домен Sic1 создает мощную индуцированную близость между киназой и ее субстратом, и консенсусная сайт-специфичность перестает быть важной. Это, однако, будет представлять огромный риск утечки сигнала — парадокс конструкции переключателей киназы-ингибитора на основе двойной отрицательной обратной связи, обсуждаемый во вступительном абзаце. Кроме того, сайт T45, как и в T5, несет идеальный консенсусный мотив для связывания Cks1, PxTP 9.0069 2,33 , который накапливает более четырех фосфатов на ингибированную CDK внутрикомплексным путем. Хотя стехиометрия фосфорилирования других конструкций с одним сайтом была ниже, все они, включая 9AP-Sic1, накапливали более одного фосфата на комплекс, что предполагает фосфорилирование случайных серинов и треонинов. Мы также продемонстрировали, что в присутствии Cks1 более высокая стехиометрия была достигнута во всех конструкциях, кроме T173-Sic1, что позволяет предположить, что помимо взаимодействия с ингибирующим доменом Cks1 способствует фосфорилированию неконсенсусных сайтов (рис. 3d).

Кроме того, сайты T173 и S191 находятся в оптимальном положении друг от друга для стадии Cks1-опосредованного фосфорилирования. Действительно, в анализе киназы Phos-tag конструкция, которая содержала только сайты T173 и S191, быстро накапливала двойную фосфорилированную форму зависимым от фосфо-кармана Cks1 образом (рис. 3e). Кроме того, добавленная извне лямбда-фосфатаза может удалить все, кроме двух, фосфаты, добавленные внутрикомплексным процессом в случае Sic1 дикого типа (рис. 3f). Однако в случае версии с одним сайтом CDK с T173 (T173-Sic1) фосфатаза не действует, что позволяет предположить, что терминация, вызванная pT173, является в высшей степени необратимой. Важно отметить, что концевой комплекс отличается от ингибирующего комплекса, так как оба ингибируются по отношению к внешним субстратам, но только концевой комплекс ингибируется по отношению к N-концевой дегроновой сети.

Эти данные дополнительно подтвердили нашу гипотезу о том, что отвлекающий путь T173-S191 может использоваться в качестве блокировки для предотвращения преждевременной утечки N-концевого сигнала посредством высокоэффективного фосфорилирования N-концевых сайтов. Система может даже действовать как реостат, интегрируя противоположные пути передачи сигналов киназы в T173 для настройки и контроля порогов утечки CDK для предотвращения преждевременного перехода G1/S. Эта идея подтверждается тем фактом, что сайт T173, как сообщается, является мишенью MAPK Hog1 и Mpk1 в ответ на стресс, которые задерживают переход G1/S 9.0069 29,31,32 .

MAPK Fus3 фосфорилирует T173 in vivo и in vitro

Присутствие феромона в окружающей среде приводит к периоду удлинения G1, когда клетке необходимо сделать выбор между двумя противоположными верованиями клеток: клеточным циклом или спариванием. Чтобы увидеть, сместил ли сигнал феромона баланс дегрона Sic1 и диверсионного пути, мы изучили фосфорилирование Sic1 в ответ на феромон. Используя Phos-tag SDS-PAGE и вестерн-блоттинг экстрактов из клеток, арестованных в G1 с помощью α-фактора, мы наблюдали картину из трех полос фосфорилирования с использованием как полноразмерного Sic1, так и неингибирующего Sic1ΔC (дополнительная рис. 2a). Затем, анализируя полосы фосфорилирования в конструкциях Sic1ΔC с одним сайтом, можно было экстраполировать, что картина сдвигов подвижности в основном состоит из фосфорилирования в положениях T5, T173 и меньше в положениях S19.1 и T45 (рис. 4а; дополнительный рис. 2а). Кроме того, сдвиги фосфорилирования не зависели от Cln3, единственного циклина, связанного с клеточным циклом, присутствующего в G1 39,40 (дополнительная рис. 2b). Однако киназа, активная во время остановки, конечный выходной сигнал пути феромона, MAPK Fus3, эффективно фосфорилировала Sic1 in vitro в сайте T173 и в меньшей степени в сайте T45 (рис. 4b). Чтобы подтвердить, что T173 является мишенью Fus3 in vivo, мы использовали фон штамма, где вместо α-фактора арест G1 был вызван подавлением экспрессии циклинов G1. После ареста клеток в G1 наблюдался лишь незначительный сдвиг T173 (рис. 4c, d). Добавление феромона вызывало сдвиг pT173, что позволяет предположить, что Fus3 является киназой, которая фосфорилирует T173 (рис. 4d). Сдвига Т173 не наблюдалось после удаления FUS3 , в то время как делеция HOG1 не имела эффекта, а делеция KSS1 , MAPK, частично избыточной с Fus3 41 , вызвала промежуточный сдвиг (рис. 4d). Эти данные свидетельствуют о том, что путь феромонов может усиливать отклоняющее окончание фосфорилирования пути Sic1 degron в качестве дополнительного механизма для поддержки ареста G1, вызванного Far1. Во-вторых, анализируя динамику фосфорилирования праймирующего сайта T5 N-концевого пути, мы наблюдали, что после вычитания Cdk1-зависимого фосфорилирования во время S- и M-фаз посредством специфического ингибирования Cdk1 постоянное соотношение фосфорилированных/нефосфорилированных примерно 1: 1 оставалось на протяжении всего клеточного цикла (дополнительная рис. 2c). Сдвиг T5 не изменился во время остановки G1 независимо от активации пути феромонов (рис. 4e). Возможно, этот постоянный статус фосфорилирования может быть вызван суммой различных пролин-направленных киназ, потому что мы не смогли выделить какую-либо отдельную ответственную из большого набора делеций-кандидатов киназы (дополнительная рис. 2d). Возможно, что поддержание постоянного 50% равновесия фосфорилирования по отношению к фосфатазе могло бы стать хорошим буфером против колебаний активности любых отдельных пролин-направленных киназ в G1 и, таким образом, защитить от праймирования деградации Sic1 ошибочными сигналами. В совокупности оба сайта праймирования альтернативных путей, Т5 и Т173, фосфорилируются во время ареста феромонов (рис. 4f). Это говорит о том, что появляющийся комплекс S-CDK будет соответствовать фиксированному соотношению входных сигналов начального пути. Это соотношение, однако, может смещаться, когда G1-CDK накапливается, а сигнал феромона затухает в G1/S.

Рис. 4: Анализ паттерна фосфорилирования Sic1 в клетках с остановкой G1.

a A Вестерн-блот-анализ фосфорилирования версий Sic1ΔC-3HA, содержащих только указанные консенсусные сайты CDK, при этом все остальные сайты CDK мутированы в аланин. Все вестерн-блоты на этом рисунке были выполнены с использованием 3HA-меченых версий Sic1ΔC, экспрессированных под промотором ADh2. b Анализ киназы in vitro, показывающий фосфорилирование версий Sic1 с одиночными сайтами фосфорилирования с помощью MAPK Fus3. Показана авторадиограмма обычного SDS-PAGE. Гистограммы на этом рисунке представляют собой средний уровень, полученный из данных двух значений, полученных из двух независимых экспериментов. Значения нанесены по отдельности незаштрихованными кружками. c Сдвиги фосфорилирования версий Sic1ΔC, несущих только сайты фосфорилирования T5, T173 или S191, визуализированные вестерн-блоттингом Phos-tag клеточных экстрактов, полученных из культур с остановкой G1. Клетки останавливали в G1 путем подавления экспрессии GAL-CLN3 путем добавления глюкозы на фоне штамма Δcln1 Δcln2. В качестве контроля использовали версию Sic1ΔC, в которой все девять сайтов консенсусного фосфорилирования CDK были заменены на аланины. Значения сдвига рассчитывали как процент количественно определенных фосфорилированных полос от суммы нефосфорилированных и фосфорилированных полос. d Влияние феромона на сдвиг фосфорилирования Т173 в клетках, арестованных в G1, как в c . Сравнивали штаммы, экспрессирующие T173-Sic1ΔC на фоне делеций FUS3, HOG1 и KSS1 дикого типа и MAPK. Средние значения, представленные на диаграмме, были рассчитаны как в c и получены из двух независимых экспериментов. e Арест G1 индуцировали, как в c и d , затем к культурам и временным точкам, собранным после указанного времени, добавляли α-фактор Sic1ΔC дикого типа, T5-Sic1ΔC и 9Использовали штаммы AP-Sic1ΔC. f Диаграмма, показывающая входные сайты фосфорилирования MAPK Fus3, мотив стыковки MAPK KRXXFXF, перекрывающийся с мотивом стыковки S-CDK RXLF, и T5 в качестве сайта входа для общего сигнала киназы, направленной на пролин. Эксперименты для a e проводились дважды с одинаковым результатом. Полные гелевые рентгенограммы и пятна представлены на дополнительном рисунке 7. Исходные данные представлены в виде файла исходных данных.

Изображение в полный размер

Чтобы напрямую проверить, действует ли путь феромона через T173 в Sic1, мы провели классический анализ гало для проверки чувствительности к феромонам, погрузив бумажные диски в раствор α-фактора и поместив диски на чашки с агаром, чтобы проверить чувствительность к феромонам. создайте радиально распространяющийся градиент феромона (дополнительный рис. 3a). Таким образом, остановку феромонов можно оценить, визуально исследуя рост клеток вокруг дисков. Мы обнаружили, что T173 необходим для индуцированной α-фактором остановки в контексте сверхэкспрессии циклина Clb5 S-фазы, что позволяет предположить, что Fus3 непосредственно нацеливается на T173, чтобы вызвать внутрикомплексное терминирование фосфорилирования Sic1 degron с помощью S-CDK.

Путь отклонения предотвращает утечку активности CDK

Чтобы изучить функциональную роль механизма отклонения в деградации Sic1, мы провели микроскопию живых клеток в микрофлюидном устройстве со штаммами, экспрессирующими Whi5- mCherry , и мутантными версиями Sic1-EGFP 42 . В качестве контрольной точки для начала мы использовали момент времени при 50% выходе из ядра Whi5- mCherry , как описано ранее 43 (дополнительный рисунок 3b). Для измерения уровней Sic1 и деградации в присутствии сигнала феромона мы использовали недавно хорошо охарактеризованный режим с начальным коротким импульсом высокой концентрации феромона, за которым следовали постоянные низкие уровни феромона 9.0069 44,45 (рис. 5а). Сигналы флуоресценции количественно определяли для клеток, которые встретили высокий импульс феромона во время G1. Сообщалось, что такие эксперименты особенно полезны для анализа пограничных ситуаций остановки, которые, возможно, происходят в естественной среде, когда решение о судьбе клетки — делиться или оставаться в G1 и спариваться — не предопределено четко и процесс принятия решения требует больше времени и предположительно больше информации 44,45 . В таком пограничном состоянии при низком уровне феромонов одновременно присутствуют множественные антагонистические киназные входы — G1-CDK и S-CDK против MAPK Fus3, и уровни Sic1-EGFP можно анализировать как при длительной остановке G1, так и при G1/ С переход. Мы также провели контрольные эксперименты, чтобы убедиться, что используемая метка EGFP не влияет на взаимодействие Sic1 с комплексами CDK (дополнительная рис. 3c, d).

Рис. 5: Одноклеточный анализ деградации Sic1 с использованием штаммов, экспрессирующих Whi5-mCherry и Sic1-EGFP.

a Схема, показывающая профиль концентрации феромонов, применяемый во время экспериментов с микрофлюидным импульсом α-фактора, предназначенный для изучения динамики Sic1 во время длительной пограничной остановки. b , c Примеры количественного определения ядерных сигналов флуоресценции Sic1-EGFP и T173S-Sic1-EGFP в клетках, которые получили импульс с высоким α-фактором в G1. d Примеры изображений цейтраферной микроскопии вокруг начала, которое происходит в момент времени 0. Образцы клеток были выбраны из 94 или 34 клеток из штаммов WT-Sic1 и T173S-Sic1 соответственно. e Графики, показывающие распределение значений времени разрушения Sic1 для отдельных клеток для указанных штаммов, рассчитанных для 50% выхода из ядра Whi5. Черные линии обозначают медианное значение с доверительным интервалом 95%. Количество клеток ( х ), наблюдаемое в ряде колоний ( Y ) задается в виде n  =  X ( Y ). 8 клеток из T173S находятся за пределами этого графика. f Средние уровни флуоресценции для временных курсов Whi5-mCherry и Clb5-yeCitrine во время импульсного эксперимента, полученные путем объединения профилей флуоресценции отдельных клеток. Заштрихованные области вокруг среднего профиля здесь и на панелях ниже представляют собой ±sem. г i Средние уровни флуоресценции для штаммов с Whi5-mCherry и различными мутантными версиями Sic1-EGFP. О значении цифр, данных в скобках, см. I ниже. j , k Сравнение средних уровней флуоресценции Sic1-EGFP в указанных штаммах из импульсного эксперимента. В j , k Whi5-mCherry показан только для штамма с Sic1 дикого типа. l Схема, объясняющая взаимодействия, разъединенные или созданные мутациями в Sic1. Число над крестиками или красной стрелкой указывает номер штамма в г к на этом рисунке и на дополнительном рисунке 4g. Подробные пояснения см. в дополнительном примечании 2.  m Средние уровни флуоресценции для конструкций Sic1 с добавленными модулями N-концевого фосфорилирования в импульсном эксперименте с α-фактором. Whi5-mCherry показан только для штамма с Sic1 дикого типа. n Схема, объясняющая эффект добавления модулей N-концевого фосфорилирования. Исходные данные доступны в Интернете, дополнительная статистическая информация представлена ​​в дополнительной таблице 1. медленное снижение Sic1 во время ареста. Sic1 дикого типа быстро деградировал после Start, тогда как мутация T173S сдвигала время 50%-ной доли деградации Sic1 примерно на 40 минут раньше по сравнению с Sic1 дикого типа, и это происходило до Start в большинстве клеток. Кроме того, деградация, наблюдаемая во время ареста, была значительно медленнее по сравнению с Sic1 дикого типа при G1 / S (рис. 5b – e, g, h; дополнительные рис. 4i, j; для T173A-Sic1 см. Дополнительный рис. 3e). и дополнительную таблицу 1). Мутация треонинов на серины в N-концевых сайтах CDK повторно вводила характер медленного накопления Sic1, подобный дикому типу, во время длительной пограничной остановки, несмотря на наличие мутации T173S (рис. 5e, i). Это указывает на то, что снижение уровней T173S-Sic1, вероятно, было связано с неспособностью ингибированного комплекса S-CDK, который накапливался во время ареста (рис. 5f), прекращать внутрикомплексное фосфорилирование N-концевого пути дегрона, опосредованное Cks1. -Взаимодействия стыковки pTP. Мы не наблюдали каких-либо значительных различий в динамике версий дикого типа или T173S неингибирующего Sic1ΔC-EGFP, что дополнительно поддерживает внутрикомплексный механизм (дополнительная рис. 3f). Кроме того, мутации VLLPP и T2,5S-VLLPP повышали уровни Sic1, что означает, что накопление G1-CDK также способствует корректировке уровней Sic1 во время пограничного ареста (рис. 5j, l, дополнительные рис. 3g, 4g). Неожиданно мутация в мотивах RXL, специфичных для S-CDK (AXA2,3), подавляла уровни Sic1, хотя и не оказывала значительного влияния на внутрикомплексный процесс in vitro (рис. 5k, дополнительная рис. 1e). 89 Мотив RXL перекрывается с предсказанным сайтом стыковки MAPK KR TL F Q F , что указывает на то, что этот мутант был дефектен в Fus3-зависимом фосфорилировании T173. Мы очистили конструкции Sic1 дикого типа и 89 RXL-мутированных с одиночными сайтами Fus3, T173-Sic1 и T45-Sic1, и проверили их фосфорилирование с помощью Fus3 in vitro (дополнительная рис. 3h). Скорость фосфорилирования T173 была значительно снижена в 89 RXL-мутированной форме по сравнению с T45, что указывает на то, что измененный баланс между путями degron и diversion может вызывать более низкие уровни Sic1.

Для дальнейшего анализа концепции баланса между двумя альтернативными путями мы ввели консенсусные элементы, специфичные для G1-CDK, лизин в положении +2 от T173 и пролин в положении -2 (T173-2P+2KA, конечная последовательность PGT 173 PKA) 46 (рис.  5k). Как и предполагалось, уровни этого мутанта увеличивались, предположительно, из-за большей доли праймированного T173. Поскольку Sic1 не деградирует во время ареста с высоким содержанием феромонов (дополнительный рис. 3i), мы можем сделать вывод, что один только Fus3 не способен полностью фосфорилировать N-концевую сеть дегрон и вызывать деградацию. Т.о., накопление активности G1- и S-CDK отвечает за деградацию Sic1 во время пограничной остановки перед выходом из ядра Whi5. Однако частично из-за внутрикомплексного фосфорилирования с помощью S-CDK и частично из-за входа Fus3 pT173 завершает N-концевой путь на ранних этапах, и Sic1 удерживается от снижения до накопления достаточных уровней G1- и S-CDK. . Прерывание терминации внутрикомплексного фосфорилирования мутацией T173S приводит к сильному снижению уровней Sic1 в G1, в то время как направление входа G1-CDK в T173 (T173-2P+2KA) или снижение входа Fus3 в T173 (RXL) либо увеличивает, либо снижает стабильность Sic1 соответственно. (рис. 5л). И наоборот, снижение первичного фосфорилирования в N-концевых сайтах за счет мутации сайта стыковки T5 или VLLPP приводит к повышению уровней Sic1 (рис. 5l), что указывает на то, что первичное фосфорилирование либо дегронового, либо диверсионного путей влияет на стабильность Sic1 в Г1.

Чтобы выяснить, возможно ли превзойти диверсионный путь путем добавления модулей фосфорилирования к N-концу Sic1 и, таким образом, настроить уровни Sic1 во время ареста, мы ввели три оптимальных сайта CDK, на расстояниях стыковки Cks1 2 с N-конец (рис. 5m, n, дополнительный рис. 4a – c). Уровни Sic1 были значительно ниже по сравнению с Sic1 дикого типа во время ареста, как и в случае мутации T173S. Это указывает на то, что расширенный внутрикомплексный путь дегрона эффективно конкурирует с диверсионным путем. Однако, поскольку T173S-Sic1 не подвергается диверсионной терминации, профиль, по-видимому, снижается больше по сравнению с 3xN-Sic1 и, несмотря на более сильную внутрикомплексную конкуренцию, все еще имеет некоторую вероятность терминации из-за интактного T173.

Кроме того, помимо пограничной остановки α-фактора, мы провели эксперименты в среде с глицерином и этанолом с медленным ростом, чтобы проверить, является ли подобная утечка активности CDK универсальной для ситуаций с длительным G1. Действительно, мы обнаружили, что T173S-Sic1 демонстрирует довольно похожий профиль снижения в клеточных циклах, которые претерпели переход от богатой к бедной среде, как это наблюдалось в эксперименте с импульсом α-фактора (дополнительная рис. 4d – f).

Механизм деградации Sic1 в G1/S

Когда решение о начале будет окончательно принято, баланс между дегроновым и диверсионным путями сместится в сторону первого, и накопление S-CDK встретится с большим количеством G1-CDK-примированных N-концевых сайты для окончательного переключения деградации, в то время как путь MAPK Fus3, нацеленный на диверсионный сайт T173, выключен 47,48,49 . Модель фосфорилирования Sic1 в G1/S, начиная с праймирования G1-CDK и сопровождаемого Cks1-зависимым процессом, где свободная S-CDK завершает фосфорилирование degron 1,24 , подтверждается открытием, что время деградации Sic1 было задерживается в мутантных версиях, влияющих на этапы прайминга, зависящие от G1-CDK, стыковку Cks1 и стыковку свободного S-CDK (мутанты VLLPP, T2,5S-VLLPP, 9SP и RXL). Мы наблюдали быстрое постстартовое накопление Sic1 в случае VLLPP, T2,5S-VLLPP и 9Мутации SP (рис. 5i, j, дополнительные рис. 3g, 4g, h). Мы можем исключить общую активацию транскрипции, поскольку SIC1 активация транскрипции в начале не наблюдалась ранее 16,50,51 . Мы можем предположить, что волна синтеза Clb5 в Start также сопровождается большим транспортом Sic1 в ядро ​​в составе тормозного комплекса 52 . Однако в случае Sic1 дикого типа деградация начинается сразу в момент начала, и накопление после начала не наблюдается.

Чтобы проанализировать, играет ли внутрикомплексный процесс, катализируемый S-CDK, роль в деградации Sic1 также и в свободно циклирующих клетках, мы проанализировали один и тот же набор мутантов как в случае полноразмерного Sic1 (Sic1), так и в случае укороченного с конца C неингибирующего Sic1. (Sic1ΔC) в ненарушенном клеточном цикле (без α-фактора). В случае полноразмерного Sic1 все мутации T2,5S, VLLPP, T2,5S-VLLPP и RXL задерживают время деградации (рис. 6a, c). Напротив, эти мутации, за исключением мутации RXL, не оказали влияния на время в экспериментах с неингибирующим Sic1ΔC (рис. 6b, c, дополнительные рис. 5a–c). Кроме того, деградация неингибирующего Sic1ΔC задерживается по сравнению с полноразмерным Sic1 (рис. 6c). Таким образом, первичное фосфорилирование с помощью G1-CDK, вероятно, становится важным благодаря внутрикомплексному механизму, поскольку деградация полноразмерного Sic1 задерживается мутациями T2,5S и VLLPP, но это не относится к Sic1ΔC. Поскольку С-концевой ингибиторный домен не влияет на скорость фосфорилирования Sic1 с помощью G1-CDK 26 , и мутация VLLPP влияет на фосфорилирование как полноразмерного Sic1, так и Sic1ΔC 1,46 , но только полноразмерный Sic1 показал эффект на VLLPP in vivo, можно сделать вывод, что S-CDK является основной движущей силой за деградацией Sic1ΔC. Более того, присутствие сайта праймирования G1-CDK T5 в Sic1ΔC не важно, возможно потому, что альтернативный сайт праймирования T33 является хорошей мишенью для S-CDK RXL-специфического фосфорилирования 1 . С другой стороны, вклад мотивов стыковки VLLPP и RXL и сайта праймирования T5 в деградацию полноразмерного Sic1 указывает на то, что G1- и S-CDK действуют совместно, способствуя деградации Sic1. Взятые вместе, мы можем заключить, что механизм деградации Sic1 в G1/S может включать три основных компонента: (i) праймирование с помощью G1-CDK, (ii) этап внутрикомплекса, управляемый ингибированным S-CDK, и (iii) положительную обратную связь. -управляемый сверхсложный шаг, управляемый свободно возникающим S-CDK.

Рис. 6: Внутрикомплексное фосфорилирование связывает примирование G1-CDK и активность S-CDK.

a , b Графики, показывающие распределение значений времени разрушения Sic1 для отдельных клеток в случае ненарушенного клеточного цикла для штаммов, экспрессирующих мутантные варианты либо полноразмерного Sic1-EGFP в a , либо Sic1ΔC-EGFP в б . В случае штаммов Sic1ΔC-EGFP эндогенный Sic1 экспрессировался на заднем плане. Среднее значение вместе с 95% доверительными интервалами обозначены черными линиями на графике. Количество отдельных ячеек ( X ), наблюдаемое в ряде отдельных колоний ( Y ), представлено в виде n  =  X ( Y ). Значения для материнских и дочерних клеток отдельно и дополнительная информация представлены в дополнительной таблице 1 и в файле исходных данных для рис. 6. c Таблица измеренных медианных значений времени разрушения Sic1 для указанных штаммов. d Анализ жизнеспособности штаммов с геномными заменами sic1::sic1(9SP) и sic1::sic1(8SP-T173) и условной сверхэкспрессией GAL1-CLB5. e Анализ жизнеспособности штаммов с делецией sic1 и геномной заменой sic1::sic1(T173A) на фоне делеции cln1,2 и условной гиперэкспрессии GAL1-CLN3. Эксперименты для панелей «d» и «e» были проведены дважды с аналогичным результатом. f , g Схемы, показывающие разницу в механизме прекращения отвлечения для пограничной остановки феромона ( f ) и для перехода G1/S ( g ). Исходные данные предоставляются в виде файла исходных данных.

Изображение в полный размер

В условиях отсутствия стресса мутация T173S не влияла на время деградации Sic1, но приводила к постоянно более низким уровням Sic1 в случае полноразмерного Sic1, указывая на то, что снижение M-CDK и накопление сигнала S-CDK утечка была предотвращена за счет внутрикомплексного фосфорилирования T173 с помощью CDK и диверсионного прекращения (дополнительные рисунки 5c, d, 6a). Этот эффект уровней Sic1 не наблюдался в случае Sic1ΔC, что позволяет предположить, что он зависит от комплекса ингибитора (дополнительная рис. 6b).

В предыдущем исследовании с 9AP-Sic1 в штамме Δclb5 было обнаружено, что отключение экспрессии GAL-CLB5 приводит к летальному исходу 53 . Поразительно, но 9SP-Sic1 в аналогичных условиях является жизнеспособным, а 8SP-T173-Sic1 — нет (рис. 6d). Это предполагает, что внутрикомплексное фосфорилирование T173 с помощью S-CDK становится летальным, когда порог CDK для деградации Sic1 смещается вверх из-за дистрибутивного (непроцессивного) Cks1-независимого способа многосайтового фосфорилирования 9SP-Sic1, как показано нами ранее 2 . Поскольку T173 не влиял на эффективность ингибирования (рис. 1d), этот результат дополнительно предполагает, что ингибированная S-CDK не может расщеплять 8SP-T173-Sic1, поскольку баланс конкурирующих внутрикомплексных путей смещен в пользу диверсионного фосфорилирования. Кроме того, был проведен еще один эксперимент in vivo, чтобы дополнительно показать важность T173 для предотвращения утечки Clb5 и, следовательно, для удерживания Sic1-барьера для сохранения ареста. Известно, что штамм, в котором подавлены все циклины G1, нежизнеспособен, и что делеция SIC1 восстанавливает жизнеспособность этих клеток. Однако наш эксперимент показывает, что T173A-SIC1 также спасает эти клетки, что предполагает утечку Clb5 в случае T173A (рис. 6e).

Тот факт, что мутация T173S в мультимедиа не повлияла на время деградации Sic1, предполагает, что блокировка предотвращает утечку до начала, чтобы поддерживать Sic1 на необходимом уровне в качестве барьера для G1/S. Однако, когда принято решение «Старт» (50% выхода ядра Whi5), предотвращение утечки больше не является приоритетом, и быстрое накопление G1-CDK эффективно запускает N-концевые сайты в Sic1, и диверсионный замок выходит за пределы, потому что вероятность pT173-зависимой терминации низкая из-за меньшего количества шагов, необходимых для того, чтобы S-CDK достигла дегронов (рис. 6f, g). С другой стороны, G1-CDK не может управлять этим переключателем в одиночку, тем самым создавая систему, подобную вентилю И, которая работает, когда накапливаются достаточные уровни как G1-, так и S-CDK для перехода G1/S (рис. 7a). , б). Однако в среде с медленным ростом (глицерин-этанол) с более длительным временем от начала до G1/S влияние T173S также наблюдалось на время деградации Sic1, что указывает на то, что утечка сигнала S-CDK, возможно, начала проявляться. воздействие (дополнительный рис. 4f). Кроме того, мутация T2,5S в сочетании с T173S уравновешивала два конкурирующих пути (дополнительный рисунок 4e, f), дополнительно демонстрируя явление баланса между N-концевым и диверсионным путями фосфорилирования.

Рис. 7: Регуляция p27 млекопитающих и Sic1 дрожжей функционально аналогична.

a , b Внутрикомплексное фосфорилирование и последующее высвобождение активности CDK регулируется логической логикой AND-gate. a В случае дрожжевого Sic1 увеличение сигнала пролиферации G1-CDK и уменьшение сигнала спаривания Fus3 примирует Sic1 к ингибированному S-CDK, который выполняет деградацию Sic1 и запускает S-фазу. b Аналогично, в случае р27 млекопитающих тирозинкиназы в качестве сигналов пролиферации инициируют фосфорилирование внутри комплекса для ингибированного комплекса CDK S-фазы.

Изображение полного размера

Обсуждение

В настоящем исследовании мы предприняли попытку объяснить парадокс механизма двойной отрицательной обратной связи CKI-CDK: высокая специфичность фосфорилирования CDK по отношению к CKI может поставить под угрозу жесткий контроль над G1, и вызывают зависимую от фосфорилирования деградацию CKI, тем самым затрудняя поддержание состояния G1. Мы наблюдали, что высокая активность внутрикомплексного фосфорилирования проявляется в процессивном фосфорилировании Sic1 в составе ингибирующего комплекса. Как и в CKI p27 человека, внутрикомплексное фосфорилирование с помощью CDK опосредовано деградацией ингибитора 9. 0069 54,55,56,57 .

Мы описываем здесь механизм двух конкурирующих путей внутрикомплексного фосфорилирования в составе ингибирующего комплекса Sic1-Clb5-Cdk1-Cks1: сайт отклонения pT173 способен предотвращать утечку через альтернативный путь фосфорилирования degron. Мы также демонстрируем, что этот диверсионный захват может быть усилен дополнительным входом от MAPK Fus3 в случае активности феромонного пути, функционально перекрывающейся роли Sic1 и Far1, чтобы обеспечить надежную остановку G1 58 . С другой стороны, после решения Start блокировка нарушается, потому что баланс между двумя путями смещается в пользу N-концевого пути degron из-за эффективного праймирующего фосфорилирования за счет быстрого накопления G1-CDK.

Это исследование раскрывает еще один уровень сложности многосайтовых механизмов фосфорилирования CDK-мишеней. Сложная сеть сайтов фосфорилирования и линейные стыковочные мотивы вдоль неупорядоченных участков Sic1 обеспечивают дифференциальный процессинг как минимум четырех киназ с альтернативными входными сайтами: G1-CDK в качестве праймера для N-концевых сайтов при переходе G1/S, S-CDK в качестве драйвер зависимого от прайминга фосфорилирования пути дегрон, а также в качестве отвлекающего входа в T173, MAPK в качестве внешних входов для отвлекающего сайта T173 и большого количества пролин-направленных киназ в качестве постоянно действующих праймеров сайта T5 (рис. 6f) .

В функционально аналогичной системе в клетках млекопитающих присущая гибкость ингибитора р27 в комплексе с Cdk2/циклином А делает возможной его фосфорилирование митогенными тирозинкиназами, что приводит к открытию активного сайта на CDK, который осуществляет внутрикомплексный дегрон-сайт (T187) фосфорилирование 17,54,55,57,59,60,61,62,63 . В этом случае, однако, проблема утечки решается за счет ортогональности тирозина и серин-треонинкиназы (CDK), что предотвращает фосфорилирование дегрона тирозинкиназой и обеспечивает условный И-воротоподобный триггер G1/S только тогда, когда оба сигнала киназы активны. отдельно присутствующие выше критических порогов. Передача сигналов тирозинкиназы у дрожжей развита не так сильно, как у высших эукариот, и роль сигналов пролиферации у дрожжей выполняют комплексы G1-CDK, которые связывают начало клеточного цикла с системой контроля размера клеток, или, альтернативно, снижение активности MAPK Fus3 после освобождения от ареста спаривания (рис. 7а, б). Отдельные входы сами по себе не запустят логический элемент И: G1-CDK не может удовлетворить требованию двух степеней 9.0069 1 , и только внутрикомплексный маршрут S-CDK будет заканчиваться на pT173. Таким образом, менее ортогональные входы киназы потребуют более сложной системы обработки, в то время как усилия по разработке сильно ортогональных входов окупаются, поскольку они дают возможность использовать более простую систему.

Методы

Конструирование штамма дрожжей

Все использованные штаммы дрожжей описаны в дополнительной таблице 2. Делеции, замены генов и мечение эндогенных локусов выполняли с использованием методов гомологичной рекомбинации на основе ПЦР 64,65 . Для количественного определения эндогенных белков Whi5, Sic1 и Clb5 соответствующие локусы рекомбинировали на 3′-конце с помощью ORF mCherry, EGFP или Citrine tag и маркерной кассеты селекции 64,65 . Аналогичный подход был использован для пометки Sic1 С-концевым 6xHA для вестерн-блоттинга на дополнительном рисунке 2a 65 . Чтобы ввести геномные замены гена SIC1 мутантными версиями, фрагменты ДНК, полученные с помощью ПЦР, были использованы для создания точных геномных замен в течение sic1::URA3 с использованием выбора 5FOA. Для получения штаммов для покадровой микроскопии Sic1ΔC вектор pRS306 с кассетой P SIC1 -Sic1ΔC-EGFP интегрировали в локус URA3 штамма с фоном WHI5-mCherry:SpHis7 . Для создания штаммов для вестерн-блоттинга Sic1ΔC использовали вектор pRS316 с кассетой P ADh2 -Sic1ΔC-3xHA. Для дополнительного рисунка 2c использовались штаммы с делецией геномного гена 9.0069 66 . На дополнительном рисунке 2a плазмида pRS306, несущая P SIC1 -Sic1ΔC-6xHA, использовалась для интеграции в локус URA3 . Количество копий интегрированных конструкций pRS306, несущих Sic1ΔC-EGFP, оценивали путем измерения количественных уровней экспрессии EGFP и анализа геномной ДНК методом количественной ПЦР. См. Дополнительную таблицу 3 для всех плазмид и Дополнительную таблицу 4 для праймеров, использованных в этом исследовании.

Очистка белка

Рекомбинантные белки Sic1 с N-концом, меченные 6xHis, экспрессировали из плазмиды pET28a(+) в E. coli BL21RP и очищали с использованием аффинной хроматографии с кобальтом 2+ . Циклины совместно очищали в виде стехиометрических комплексов с активным Cdk1 из штамма дрожжей Δ sic1 с использованием тандемной аффинной очистки (TAP) 1,67,68,69 . Cks1 экспрессировали и очищали из E. coli BL21RP , как описано ранее 70 . Swe1 экспрессировали и очищали из клеток дрожжей с использованием аффинной очистки TAP-tag 67 .

Анализ фосфорилирования и дефосфорилирования in vitro

Общий состав реакционной смеси для фосфорилирования был следующим: 50 мМ HEPES-KOH pH 7,4, 5 мМ MgCl 2 , 150 мМ NaCl, 0,1% NP-40, M 20 2% глицерина, 2 мМ EGTA, 0,2 мкг мл -1 BSA, 250 мкМ АТФ и 500 нМ Cks1. К реакциям, содержащим Cks1, добавляли мутант дикого типа или фосфатсвязывающий карманный мутант Cks1 71 , а для реакций без Cks1 использовали фиктивный буфер. Для количественных анализов фосфорилирования внутри комплекса использовали 0,02 мкМ комплекса Clb5-Cdk1 и 1 мкМ рекомбинантного Sic1. В реакции, содержащие эталонный субстрат, добавляли 1 мкМ бычьего гистона h2 (Sigma-Aldrich). Для мечения фосфатом 0,5 мкКи мкл 9Радиометрическую метку 0069 -1 [γ- 32 P]-АТФ (Hartmann Analytic) добавляли через 5 мин после добавления фермента к реакционному буферу, содержащему немеченый АТФ. Наконец, реакцию инициировали добавлением смеси Sic1 или Sic1 и гистона h2.

Для количественных анализов фосфорилирования, представленных на рис. 3a, e, 4b и дополнительный рисунок 3c, d, h, концентрация фермента составляла 2 нМ, а белка субстрата — 1 мкМ. Для количественного анализа фосфатазы на рис. 3f, во-первых, внутрикомплексное фосфорилирование Sic1 с [γ- 32 Метку Р]-АТФ выполняли, как описано выше. После 6 мин реакции фосфорилирования добавляли 5 мМ ДДТ и 6 мМ MnCl 2 с последующим добавлением рекомбинантной лямбда-фосфатазы (Santa Cruz Biotechnology) в конечной концентрации 50 ед. мкл -1 . Все реакции проводили при комнатной температуре, аликвоты отбирали в буфер для образцов SDS-PAGE.

Для разделения фосфо-изоформ Sic1, 10% SDS-PAGE с добавлением 100  мкМ Phos-tag и MnCl 2 использовался согласно инструкции производителя 28 . Если не указано иное, использовали 10% SDS-PAGE. Идентификация различных фосфоизоформ Sic1 с использованием Phos-tag SDS-PAGE описана в ref. 1

После электрофореза в электрофорезе SDS гели подвергали вакуумной сушке и последующей авторадиографии с использованием экрана Amersham BAS-IP MS 2040 E, биомолекулярного имиджера Typhoon 5 (Amersham) и программного обеспечения ImageQuant TL (Amersham, версия 8.1).

Для оценки внутрикомплексной активности Clb5–Cdk1–Cks1 в единицах числа фосфатов на молекулу Sic1, связанную с комплексом, та же концентрация комплекса CDK была фосфорилирована Swe1 в параллельной реакции для сравнения. Поскольку Cdk1 монофосфорилируется Swe1, Cdk1 32 Сигнал P в эталонной смеси соответствует одному фосфату, добавленному к Sic1 на ингибированный комплекс.

Масс-спектрометрия

Для определения сайтов фосфорилирования внутрикомплекса Sic1 10 мкг очищенного рекомбинантного белка 6xHis-Sic1 фосфорилировали с использованием 20 нМ Clb5-Cdk1-Cks1. После инкубации киназной реакции в течение 6 мин при комнатной температуре реакцию останавливали в буфере для образцов SDS-PAGE. Белки разделяли с помощью 10% SDS-PAGE, гели окрашивали кумасси бриллиантовым синим G-250 (Sigma) и из гелей вырезали полосу белка Sic1. Для анализа использовали 1 мкг Sic1. Последующее расщепление в геле, разделение пептидов, МС-анализ и поиск талисмана выполняли, как описано ранее 2 .

Вестерн-блоттинг и иммунопреципитация

Для вестерн-блоттинга 10–30  мкг осажденных клеток быстро замораживали в жидком азоте и затем лизировали путем измельчения шариками кремнезема в лизирующем буфере, содержащем мочевину. Лизат очищали центрифугированием, супернатант нормализовали по общему содержанию белка, определяемому методом Бредфорда (BioRad), подвергали гель-электрофорезу. Для обнаружения эпитопа HA проводили блоттинг с использованием анти-HA (мышиный HA.11 клон 16B12 от Covance, кат. № MMS-101R, разведение 1:1000) и конъюгированного антитела против мышиного IgG-HRP (Labas AS, заказное, разведение 1:10000). Для обнаружения анти-Cdk1-антитела Cdk1 (козье анти-Cdc28-антитело yC-20, от Santa Cruz Biotechnology, кат. № sc-6709, разведение 1:1000) и конъюгированные антитела против козьего IgG HRP (Labas AS, заказное, разведение 1:10000). Для электроблоттинга гелей Phos-tag SDS-PAGE использовали сухую систему iBlot (Invitrogen). Сигнал конъюгированного HRP детектировали с использованием субстрата для вестерн-блоттинга Pierce™ ECL (Thermo Fisher Scientific).

Для проведения коиммунопреципитации комплекса Sic1–Clb5–TAP–Cdk1–Cks1 рекомбинантный CLB5–TAP в 2-мкм плазмиде был сверхэкспрессирован с использованием промотора GAL1 . Экспрессию индуцировали в штаммах, содержащих эндогенно экспрессированные Sic1-6HA или T173A-Sic1-6HA. Для коиммунопреципитации проводили очистку Clb5-TAP с использованием 5–7   г клеточного осадка, как описано выше. Присутствие Sic1-6HA и Cks1 в конечном элюате оценивали с помощью вестерн-блоттинга с использованием анти-HA (мышиный HA.11 клон 16B12 от Covance, разведение 1:1000) или анти-Cks1 (кроличье антитело от Labas AS, заказное, 1 : разведение 1000) и анти-мышиные IgG или анти-кроличьи-IgG HRP-конъюгированные антитела (Labas AS, заказное, разведение 1:10000).

Для количественного вестерн-блоттинга сигнал усиленной хемилюминесценции (ECL) был обнаружен с помощью камеры ImageQuant RT ECL Imager 3088E (Amersham) с самым высоким разрешением и переменной скоростью затвора, чтобы убедиться, что все пиксели находятся ниже порога насыщения сигнала. Необрезанные изображения сканов Typhoon, изображения ImageQuant RT ECL и все области, подвергнутые количественному анализу на этих изображениях, представлены в файлах исходных данных вместе со значениями сигнала, полученными для каждой области.

Условия культивирования

Для вестерн-блоттинга использовали культуры с логарифмической фазой, выращенные в селективной полной синтетической (SSC) или полной синтетической (SC) среде. Для синхронизации α-фактора использовали синтетический пептид α-фактора чистоты >95% (Stork Biochemicals) в виде исходного раствора 10 мг мл -1 (~5,9 мМ) в ДМСО. Конечная концентрация α-фактора составила 0,59 мкМ для штаммов bar1 и 5,9 мкМ для штаммов BAR1 + . Для ареста клеток с помощью α-фактора соответствующую концентрацию пептида добавляли при OD 0,3 на 3 часа. Арест G1 был подтвержден визуальным наблюдением шму морфология. Чтобы вызвать остановку G1 в фоновых штаммах Δcln1,2 cln3::P GAL1,10 -CLN3 путем подавления синтеза мРНК CLN3 , добавляли 2% глюкозы на 3,5 часа.

Для цейтраферной микроскопии использовали логарифмическую культуру дрожжей, выращенную в среде SC. Перед обработкой клеток микрожидкостными планшетами CellASIC ONIX типа Y04C (EMD Millipore) культуру обрабатывали ультразвуком до тех пор, пока агрегаты клеток не разделялись на отдельные клетки. Клетки загружали в чип для выращивания, как описано в онлайн-протоколе CellASIC, с использованием среды SC с добавлением 2% глюкозы. Среду, содержащую 240 или 2 нМ α-фактора, используемую в импульсных экспериментах, или среду, содержащую 2% глицерина и 1% этанола вместо глюкозы, для длительных экспериментов G1 подавали из отдельных лунок. Для экспериментов с импульсом α-фактора и глицерин-этанолом использовался ранее описанный протокол 9.0069 42,44 . Перед переходом на среду с альфа-фактором или глицерин-этанол клеткам давали спокойно расти в токе среды с 2% глюкозой подкожно в течение не менее 60 мин. В ходе эксперимента использовался постоянный поток среды под давлением 5 фунтов на квадратный дюйм.

В анализах жизнеспособности дрожжей на рис. 6d, e культуры выращивали в среде YPG до логарифмической фазы. Культуры серийно разбавляли для достижения плотности клеток3 клеток мл -1 . Затем для посева использовали 5 мкл культуры.

Количественная цейтраферная микроскопия

Интервальная визуализация клеток, растущих в микрофлюидных чипах, проводилась с помощью инвертированного микроскопа Zeiss Axio Observer Z1 с использованием моторизованного предметного столика и фазово-контрастного изображения в сочетании со светодиодным модулем Colibri для возбуждения флуоресценции mCherry, EGFP или Citrine . Для возбуждения EGFP использовался светодиод 470 нм в течение 15 мс, для Citrine 505 нм светодиод в течение 700 мс и для mCherry 555 нм светодиод в течение 750 мс при мощности 25%. Для экспериментов, содержащих Sic1-EGFP, собирали максимум 10 полей зрения. Для визуализации использовалась монохромная камера микроскопа Hamamatsu Orca ER CCD. Установка микроскопии была аналогична Dončić et al. 43 . Изображения были собраны и экспортированы в форматы растровых изображений (. JPG) с использованием программного обеспечения ZEN (Zeiss, версия 2.3, синяя версия) и подвергнуты автоматическому отслеживанию клеток и количественному анализу сигнала флуоресценции с использованием пользовательских сценариев MATLAB (совместимых с версией 2016a) как описан ранее 72 . Для количественной оценки сигнала Sic1-EGFP были внесены незначительные пользовательские изменения.

Покадровые профили флуоресценции подвергались ручной оценке отслеживания клеток и качества изображения, а также дальнейшему измерению времени 43,45 . Для количественной оценки максимальный уровень плато флуоресценции измеряли с помощью цифровой линейки. Далее определялось полумаксимальное значение сигнала и соответствующая ему точка на оси времени. Наконец, программа автоматически доставляет соответствующее значение времени в выходную таблицу. Все программное обеспечение, используемое для количественного определения и анализа микроскопических изображений, доступно по запросу.

Статистика и воспроизводимость

Было проведено не менее двух независимых экспериментов для всех анализов киназы и вестерн-блоттинга. Количество использованных количественных повторов, а также необработанные данные для количественной оценки всех проведенных экспериментов доступны в файлах исходных данных. Для всех анализов киназ и количественных вестерн-блоттингов средние значения были получены по крайней мере из двух повторных экспериментов.

При микроскопии живых клеток данные по каждому штамму собирали, по крайней мере, из двух независимых клеточных колоний. На графиках распределения времени деградации Sic1 показаны медианные значения, а также значения доверительного интервала 95%. Кроме того, 95% доверительные интервалы медиан в сводном виде представлены в дополнительной таблице 1.

Ссылки

  1. Koivomagi, M. et al. Каскады мультисайтового фосфорилирования контролируют разрушение Sic1 в начале S фазы. Природа 480 , 128–131 (2011).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ пабмед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  2. Койвомаги М. и др. Мультисайтовые сети фосфорилирования как сигнальные процессоры для Cdk1. Нац. Структура Мол. биол. 20 , 1415–1424 (2013).

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  3. Valk, E. et al. Многоступенчатые системы фосфорилирования: настраиваемые компоненты биологических сигнальных цепей. Мол. биол. Cell 25 , 3456–3460 (2014).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  4. Ван Рой, К., Гибсон, Т.Дж. и Дэйви, Н.Е. Переключатели мотивов: принятие решений в клеточной регуляции. Курс. мнение Структура биол. 22 , 378–385 (2012).

    ПабМед Статья КАС Google ученый

  5. Gutierrez-Escribano, P. & Nurse, P. Одного комплекса циклин-CDK достаточно как для митотической, так и для мейотической прогрессии у делящихся дрожжей. Нац. коммун. 6 , 6871 (2015).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья Google ученый

  6. Swaffer, M.P., Jones, A.W., Flynn, HR, Snijders, A.P. & Nurse, P. Фосфорилирование субстрата CDK и упорядочение клеточного цикла. Cell 167 , 1750–1761.e16 (2016).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  7. Swaffer, M.P., Jones, A.W., Flynn, HR, Snijders, A. P. & Nurse, P. Количественная фосфопротеомика показывает динамику передачи сигналов киназ клеточного цикла у делящихся дрожжей Schizosaccharomyces pombe . Cell Rep. 24 , 503–514 (2018).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  8. Каменц Дж. и Феррелл Дж. Э. Дж. Временной порядок фосфорилирования клеточного цикла. Мол. Cell 65 , 371–373 (2017).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  9. Энсеринк, Дж. М. и Колоднер, Р. Д. Обзор целей и процессов, контролируемых Cdk1. Сотовый отдел. 5 , 11 (2010).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  10. Орд, М. и Луг, М. Как тикают часы клеточного цикла. Мол. биол. Ячейка 30 , 169–172 (2019).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  11. Орд, М. и др. Многосайтовый код фосфорилирования CDK. Нац. Структура Мол. биол. 26 , 649–658 (2019).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  12. Örd, M., Venta, R., Möll, K., Valk, E. & Loog, M. Механизмы стыковки, специфичные для циклина, раскрывают сложность функции M-CDK в клеточном цикле. Мол. Cell 75 , 76–89.e3 (2019).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  13. Holt, L. J. et al. Общий анализ сайтов фосфорилирования субстрата Cdk1 дает представление об эволюции. Наука 325 , 1682–1686 (2009).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  14. Schwob, E., Bohm, T., Mendenhall, M.D. & Nasmyth, K. Ингибитор циклинкиназы B-типа p40SIC1 контролирует переход G1 в S у S. cerevisiae. Сотовый 79 , 233–244 (1994).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  15. Huang, Y., Yoon, M.-K., Otieno, S., Lelli, M. & Kriwacki, R. W. Активность и стабильность семейства внутренне неупорядоченных белков Cip/Kip регулируются нерецепторным тирозином. киназы. Дж. Мол. биол. 427 , 371–386 (2015).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  16. Lengronne, A. & Schwob, E. Ингибитор CDK дрожжей Sic1 предотвращает нестабильность генома, способствуя лицензированию начала репликации в конце G1. Мол. Клетка. 9 , 1067–1078 (2002).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  17. Verma, R., Feldman, R. M. & Deshaies, R. J. SIC1 убиквитинируется in vitro путем, который требует активности CDC4, CDC34 и циклина/CDK. Мол. биол. Cell 8 , 1427–1437 (1997).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  18. Feldman, R.M.R., Correll, C.C., Kaplan, K.B. & Deshaies, R.J. Комплекс Cdc4p, Skp1p и Cdc53p/cullin катализирует убиквитинирование фосфорилированного ингибитора CDK Sic1p*, физиологические реакции убиквитинирования требуют E3s, и все ли E3s будут участвуют непосредственно в обоих субстратах. Cell 91 , 221–230 (1997).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  19. Джейкобсон, Л. и др. Естественная изменчивость образца арабидопсиса Cvi-0 указывает на важную роль MPK12 в CO 9 замыкающих клеток.0734 2 сигнализация. PLoS Биол. 14 , e2000322 (2016).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  20. Verma, R., McDonald, H., Yates, J. R. 3rd & Deshaies, R. J. Селективная деградация убиквитинированного Sic1 очищенной 26S протеасомой дает активный S-фазный циклин-Cdk. Мол. Cell 8 , 439–448 (2001).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  21. Кэнтли, Л., Хантер, Т., Торнер, Дж., Север, Р. Преобразование сигналов: принципы, пути и процессы (CSHL Press, Нью-Йорк, 2016).

  22. Вента, Р., Валк, Э., Койвомаги, М. и Луг, М. Двойная отрицательная обратная связь между S-фазным циклином-CDK и CKI создает резкость в переключении G1/S. Фронт. Физиол. 3 , 459 (2012).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  23. Schneider, B.L., Yang, Q.H. & Futcher, AB. Связь репликации с запуском ингибитором Cdk Sic1. Наука 272 , 560–562 (1996).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья Google ученый

  24. Escote, X., Zapater, M., Clotet, J. & Posas, F. Hog1 опосредует остановку клеточного цикла в фазе G1 за счет двойного нацеливания на Sic1. Нац. Клеточная биол. 6 , 997–1002 (2004).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  25. Zinzalla, V., Graziola, M., Mastriani, A., Vanoni, M. & Alberghina, L. Опосредованная рапамицином остановка G1 включает регуляцию ингибитора Cdk Sic1 в Saccharomyces cerevisiae . Мол. микробиол. 63 , 1482–1494 (2007).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  26. Moreno-Torres, M., Jaquenoud, M. & De Virgilio, C. TORC1 контролирует переход клеточного цикла G1-S у дрожжей через Mpk1 и путь киназы великой стены. Нац. коммун. 6 , 8256 (2015).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ пабмед Статья Google ученый

  27. McGrath, D. A. et al. Cks придает специфичность зависимым от фосфорилирования сигнальным путям CDK. Нац. Структура Мол. биол. 20 , 1407–1414 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  28. Кросс Ф. Р., Юсте-Рохас М., Грей С. и Джейкобсон М. Д. Специализация и нацеливание на циклины B-типа. Мол. Cell 4 , 11–19 (1999).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  29. Кросс, Ф. Р. и Якобсон, М. Д. Консервация и функция потенциального субстрат-связывающего домена в дрожжевом циклине Clb5 B-типа. Мол. Клетка. биол. 20 , 4782–4790 (2000).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  30. Такеда, Д.Ю., Вольшлегель, Дж.А. и Датта, А. Двусторонний мотив узнавания субстрата для циклинзависимых киназ. J. Biol. хим. 276 , 1993–1997 (2001).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  31. Wohlschlegel, J. A., Dwyer, B. T., Takeda, D. Y. & Dutta, A. Мутационный анализ мотива Cy из p21 выявил вырожденность последовательности и специфичность для различных циклинзависимых киназ. Мол. Клетка. биол. 21 , 4868–4874 (2001).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  32. Tyers, M., Tokiwa, G. & Futcher, B. Сравнение Saccharomyces cerevisiae Циклины G1: Cln3 может быть предшествующим активатором Cln1, Cln2 и других циклинов. EMBO J. 12 , 1955–1968 (1993).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  33. Mcinerny, CJ, Partridge, JF, Mikesell, G.E., Creemer, D. P. & Breeden, L.L. Новые Mcml-зависимые промоторы CDC4S7 активируют M/Gi-специфическую транскрипцию. Гены Дев. 11 , 1277–1288 (1997).

  34. Элион, Э. А., Брилл, Дж. А. и Финк, Г. Р. FUS3 репрессирует CLN1 и CLN2 и вместе с KSS1 способствует передаче сигнала. Проц. Натл акад. науч. США 88 , 9392–9396 (1991).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  35. Скотхейм, Дж. М., Ди Талия, С., Сиггия, Э. Д. и Кросс, Ф. Р. Положительная обратная связь циклинов G1 обеспечивает когерентный вход в клеточный цикл. Природа 454 , 291–296 (2008).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  36. Doncic, A., Falleur-Fettig, M. & Skothheim, J.M. Различные взаимодействия выбирают и поддерживают специфическую клеточную судьбу. Мол. Cell 43 , 528–539 ​​(2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  37. Doncic, A. & Skothheim, J.M. Упреждающее регулирование обеспечивает стабильность и быструю обратимость клеточного состояния. Мол. Cell 50 , 856–868 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  38. Дончич, А. и др. Разделение бистабильного переключателя позволяет памяти преодолевать переход, управляемый обратной связью. Сотовый 160 , 1182–1195 (2015).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  39. Койвомаги М. и др. Динамика субстратной специфичности Cdk1 в течение клеточного цикла. Мол. Cell 42 , 610–623 (2011).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый

  40. Strickfaden, S.C. et al. Механизм регуляции клеточного цикла передачи сигналов киназы MAP в пути дифференцировки дрожжей. Cell 128 , 519–531 (2007).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  41. Repetto, M.V. et al. CDK и MAPK синергически регулируют динамику передачи сигналов через общую многосайтовую область фосфорилирования на каркасном белке Ste5. Мол. Cell 69 , 938–952.e6 (2018).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  42. Кнапп, Д., Бхойт, Л., Стиллман, Д. Дж. и Насмит, К. Фактор транскрипции Swi5 регулирует экспрессию ингибитора циклинкиназы p40SIC1. Мол. Клетка. биол. 16 , 5701–5707 (1996).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  43. Amoussouvi, A. et al. Время транскрипции и шум регуляторов клеточного цикла дрожжей — подход с одной клеткой и одной молекулой. NPJ Сист. биол. заявл. 4 , 17 (2018).

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  44. Росси Р.Л., Зинзалла В., Мастриани А., Ванони М. и Альбергина Л. Субклеточная локализация ингибитора циклинзависимой киназы Sic1 модулируется источником углерода у почкующихся дрожжей. Клеточный цикл 4 , 1798–1807 (2005).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  45. Галеа, К.А. и др. Роль внутренней гибкости в передаче сигнала, опосредованного регулятором клеточного цикла p27 Kip1. Дж. Мол. биол. 376 , 827–838 (2008).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  46. Chu, I. et al. Фосфорилирование p27 с помощью Src регулирует ингибирование циклина E-Cdk2. Cell 128 , 281–294 (2007).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  47. Оу, Л. и др. Неполная укладка при связывании опосредует активацию комплекса Cdk4/циклин D за счет тирозинового фосфорилирования белка-ингибитора p27. J. Biol. хим. 286 , 30142–30151 (2011).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  48. Ou, L., Waddell, M.B. & Kriwacki, R.W. Механизм входа в клеточный цикл, опосредованный внутренне неупорядоченным белком p27 (Kip1). ACS Хим. биол. 7 , 678–682 (2012).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  49. Pope, P. A. & Pryciak, P. M. Функциональное перекрытие между различными путями ингибирования G1/S позволяет надежно блокировать G1 феромонами спаривания дрожжей. Мол. биол. Cell 24 , 3675–3688 (2013).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  50. Дас, Р. К., Хуанг, Ю., Филлипс, А. Х., Кривацки, Р. В. и Паппу, Р. В. Особенности загадочной последовательности в неупорядоченном белке p27Kip1 регулируют передачу сигналов клеточного цикла. Проц. Натл акад. науч. США 113 , 5616–5621 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый

  51. Гриммлер, М. и др. Cdk-ингибирующая активность и стабильность p27Kip1 напрямую регулируются онкогенными тирозинкиназами. Cell 128 , 269–280 (2007).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  52. Барберис, М. и др. Ингибитор циклин-зависимой киназы дрожжей Sic1 и p27Kip1 млекопитающих являются функциональными гомологами со структурно консервативным ингибиторным доменом. Биохим. J. 387 , 639–647 (2005).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  53. Барберис, М. Молекулярно-системная биология Sic1 в регуляции клеточного цикла дрожжей посредством многомасштабного моделирования. Доп. Эксп. Мед. биол. 736 , 135–167 (2012).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  54. Longtine, M. S. et al. Дополнительные модули для универсальной и экономичной делеции и модификации генов на основе ПЦР в Saccharomyces cerevisiae . Дрожжи 14 , 953–961 (1998).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  55. Janke, C. et al. Универсальный набор инструментов для мечения генов дрожжей на основе ПЦР: новые флуоресцентные белки, дополнительные маркеры и промоторные кассеты. Дрожжи 21 , 947–962 (2004).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  56. Гиавер Г. и др. Функциональное профилирование генома Saccharomyces cerevisiae . Природа 418 , 387–391 (2002).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья Google ученый

  57. Puig, O. et al. Метод тандемной аффинной очистки (ТАП): общая процедура очистки белковых комплексов. Methods 24 , 218–229 (2001).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  58. Ubersax, J. A. et al. Мишени циклинзависимой киназы Cdk1. Природа 425 , 859–864 (2003).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед Статья Google ученый

  59. McCusker, D. et al. Cdk1 координирует рост клеточной поверхности с клеточным циклом. Нац. Клеточная биол. 9 , 506–515 (2007).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  60. Reynard, G.J., Reynolds, W., Verma, R. & Deshaies, R.J. Cks1 необходим для активности G(1) циклин-циклинзависимой киназы у почкующихся дрожжей. Мол. Клетка. биол. 20 , 5858–5864 (2000).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  61. Bourne, Y. et al. Кристаллическая структура и мутационный анализ регуляторного белка Cks1 клеточного цикла Saccharomyces cerevisiae : значение для замены доменов, связывания анионов и белковых взаимодействий. Структура 8 , 841–850 (2000).

    КАС пабмед Статья Google ученый

  62. Дончич А. , Эсер У., Атай О. и Скоттейм Дж. М. Алгоритм для автоматизации сегментации и отслеживания дрожжей. PLoS ONE 8 , e57970 (2013 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

Загрузить ссылки

14 Fantastic New Stays Around The World

  • Путешествия


    Slide Nr 1

    Даже несмотря на всю неопределенность индустрии путешествий, особенно в гостиничном бизнесе последних двух лет сцена никогда не переставала развиваться. Наоборот: длинный список совершенно новых объектов добавляет что-то свежее и оригинальное в туристический ландшафт. Мы отследили некоторые из самых захватывающих и долгожданных открытий отелей в этом году, поэтому, когда вы будете готовы отправиться в путь, у вас также будет звездное новое место, где можно отдохнуть.

    По Мария Элиза Гомес Соса

  • Путешествия

    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 2

    Если вы планируете по-настоящему захватывающее путешествие во время вашего следующего отпуска, Бали ждет вас с его новейшим отелем Buahan, A Banyan Tree Escape. Стремясь к развитию местного сообщества и защите окружающей среды, они создали инновационную концепцию «без стен и дверей», в которой комнаты (или balés ) — это открытые пространства, где только занавеска отделяет гостей от окружающей природы. Просыпайтесь под звуки Бали, наслаждайтесь 180-градусным панорамным видом, наслаждайтесь едой от фермы к столу и сбегайте из суетливого человеческого мира, воссоединяясь с природой.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 3

    В этом месяце на японском острове Наосима открылась первая традиционная гостиница. ROKA ориентирована на искусство ryokan для всех любителей искусства, с галереями в японском стиле, демонстрирующими работы подающих надежды местных талантов, и расположенный всего в нескольких минутах от самых знаковых художественных достопримечательностей острова. Когда вы закончите день, насладитесь широким выбором свежих устриц, рыбы сетути и веганских блюд в ресторане, а также погрузитесь в дзен-состояние ума и тела в частной ванне под открытым небом rotenburo , которая есть в каждом номере. [Фото предоставлено The Ryokan Collection]

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 4

    В Южной Африке, примерно в 4 часах езды к юго-востоку от Йоханнесбурга, The Homestead открывает свои двери в заповеднике Намбити этим летом как роскошный эко-коттедж, сочетающий в себе комфорт, экологичность и близость к природе. Лодж с 12 люксами сочетает в себе инновационную архитектуру с местами обитания животных, что позволяет гостям испытать роскошь и дикую природу из первых рук. Концепция питания, тем временем, основана на местных продуктах, и отель предлагает широкий спектр мероприятий от уроков фотографии животных до кемпинга, походов в горы Дракенсберг и объединения усилий по сохранению, что обеспечивает минимальное воздействие на экосистему.

  • Путешествия


    Сейчас открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 5

    Панк-рок встречается с винтажной готикой и роскошью. На лондонской улице Дания, когда-то славившейся гостеприимством таких икон, как The Rolling Stones, Sex Pistols, Дэвида Боуи и Элтона Джона, теперь находится новый отель Chateau Denmark. Этот роскошный отель отсылает к панк- и рок-музыке, смешанной с преувеличенной эстетикой 60-х и 70-х годов. Подумайте: макси-бары вместо мини-баров, мебель с граффити, вызывающие воспоминания обои, красный бархат и мраморные ванные комнаты. Для поклонников классического рок-н-ролла этот отель стоит того, чтобы разориться.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 6

    В июне этого года шеф-повар Кристоф Хэй, обладатель двух звезд Мишлен, откроет новый отель в своем родном городе Блуа в потрясающей французской Долине Луары. по крайней мере. Но помимо невероятного гастрономического опыта, Хэй выбрал резиденцию французского короля для Fleur de Loire, пятизвездочный отель с тщательно спроектированными помещениями, а также 1,5 гектара земли для выращивания свежих ингредиентов и внедрения экологически чистых методов, которые приносят гостям ближе к природе и наследию региона. Его киоск со свежей выпечкой — просто вишенка на торте…

  • Путешествия

    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 7

    Вы когда-нибудь хотели остановиться в отеле, вдохновленном «Аббатством Даунтон»? Отправляйтесь во дворец Кашел в Типперэри, Ирландия. Когда-то резиденция архиепископа, дворец был впервые превращен в отель в 1960 году и принимал таких гостей, как Джеки Кеннеди и Элизабет Тейлор. Теперь он снова открылся как интимное, очаровательное и историческое место. Прогуляйтесь по пышным садам площадью 3 акра и плодородным землям, исследуйте легендарную скалу Кашел и завершите свой день в баре Guinness отеля, где вам предложат настоящий ирландский тост.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 8

    Солнечная погода, мощеные улицы, красочные здания, дружелюбные местные жители – в португальскую столицу легко влюбиться. Если вы планируете поездку в Лиссабон, добавьте очарования своей поездке, остановившись в новом отеле Sublime Lisboa. Таунхаус 20 900 69 900 70 веков превратился в роскошный бутик-отель. Sublime Lisboa — рай для любителей дизайна. С уникальной атмосферой и тщательно подобранным интерьером в каждом номере, рестораном средиземноморской кухни, который должен стать следующей достопримечательностью города, в окружении исторических памятников, красивых садов и музеев, это идеальное место для отдыха в этом сказочном городе.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 9

    Если вместо этого вы направляетесь этим летом в Центральную Европу, сделайте остановку в Городе классической музыки и остановитесь в новом отеле Rosewood Vienna, который откроется в июле. Расположенный в историческом здании на знаменитой площади Петерсплац, отель может похвастаться интригующим сочетанием очаровательной европейской архитектуры с ультрасовременными элементами. Выпейте напиток в баре на крыше, любуясь потрясающим видом на город, поужинайте в ресторане на террасе в саду, расслабьтесь в спа-салоне мирового класса Sense или просто погрузитесь в богатую историю и культуру австрийской столицы.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 10

    На венецианские каникулы нужно ехать в Венецию – а может и нет? В хорватском приморском городе Новиграде, на противоположной стороне Адриатического моря, находится Палаццо Райниса в итальянском стиле. Поместье, когда-то принадлежавшее венецианцу Джованни Райнису, было реконструировано и превращено в бутик-отель, сохранивший дизайн и гламур дворца в стиле неоренессанс. Пребывание в этих почти итальянских виллах подарит вам вкус la bella vita: прекрасный вид на море, средиземноморская роскошь и современная современность, дополненные концепцией ресторана изысканной кухни и баром, где подают лучшие истрийские вина и ликеры.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 11

    Совершите часовой перелет из Сиднея, и вы приземлитесь в скрытой жемчужине Австралии: приморский город Ямба долгие годы хранился в строжайшем секрете, но открытие его первого бутик-отель The Surf Yamba может стать новым популярным местом отдыха для местных жителей и путешественников из других стран. С бассейном на крыше, откуда открываются потрясающие виды на побережье, а также с интерьером номеров в скандинавском стиле и красивыми окрестностями, это идеальное место для тех, кто хочет почувствовать настоящую австралийскую культуру серфинга… или просто расслабиться у бассейна.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 12

    На высоте 3600 метров над уровнем моря с видом на Анды находится новейший бутик-отель в Ла-Пасе: MET La Paz. Расположенный в оживленном районе Калькото и полностью заботящийся об окружающей среде и местных сообществах, отель питается от солнечной энергии, избегает одноразовых бумажных и пластиковых предметов и по возможности использует дождевую воду. И помимо их экологических мер, они также являются домом для первого и единственного в городе бара на крыше с панорамным видом, а также интерьеров, украшенных кураторскими коллекциями произведений искусства и произведениями местных художников и ремесленников.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 13

    В самом оживленном и престижном районе Мехико вы найдете Casa Polanco, удобно расположенную колониальную резиденцию 1940-х годов, превращенную в роскошный пятизвездочный отель. Украшенный современным мексиканским искусством и традиционным антиквариатом 30-х и 40-х годов, отель включает в себя библиотеку, спа-центр и террасу, а также вид на сад в каждом номере и идеальное сочетание неоколониального и современного дизайна. Шикарная, роскошная дань уважения мексиканской культуре и наследию.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 14

    В таком исторически значимом городе имеет смысл бронировать проживание только в национальной исторической достопримечательности, а провести ночь в отеле Guild House в Филадельфии — это само собой разумеется. Здание когда-то было местом встречи гильдии New Century, группы женщин-активисток, борющихся за гендерное равенство, избирательное право женщин и реформу рабочей силы, и каждая из 12 комнат названа в честь одного из этих вдохновляющих членов гильдии. И если чествования прогрессивных женщин недостаточно, этот бутик-отель, принадлежащий женщинам, также является роскошной мечтой с его уникальной мебелью, роскошными постельными принадлежностями и очаровательными обоями.

  • Путешествия


    Открыто: 14 фантастических новых туров по всему миру.


    Slide Nr 15

    По всей стране, в Лос-Анджелесе, вы найдете недавно открывшийся Alsace LA. Этот бутик-отель, расположенный в Вест-Адамсе, одном из старейших районов города, является идеальным местом для путешественников, которые хотят почувствовать себя настоящими местными жителями. Номера украшены произведениями современного искусства и имеют игривый дизайн из дерева, ротанга и латуни с визуальным повествованием в стиле ретро, ​​яркой архитектурой и безмятежной атмосферой. Сочетание Южной Калифорнии и Средиземноморья, этот отель олицетворяет собой сердце Лос-Анджелеса – художественное, беззаботное и непринужденно крутое.


Латвия | Балтийское упорство

Флаг Латвии

Чтобы начать этот раздел о Латвия , посмотрите этот 7-минутный документальный фильм Добро пожаловать в Ригу | Латвия.

Язык, география и кухня

Статуя Рижского порта, фото Эйлин Кунклер

Латвия расположена на берегу Балтийского моря и Рижского залива, граничит на севере с Эстонией, на востоке с Россией, на юго-востоке с Беларусью, и Литва на юге. Многие реки Латвии впадают в Балтийское море. Крупнейшая из них — Западная Двина, которую местные жители называют Даугавой (общая длина в Латвии — 222 мили). Также есть Гауя (русский: Гауя), Вента и Лиелупе. Важно помнить, что балто-славянские языки являются ветвью индоевропейской языковой семьи. У них есть несколько общих языковых черт, которых нет ни в одной другой индоевропейской ветви, что указывает на период общего развития. Хотя понятие балто-славянского единства оспаривалось (отчасти из-за политических разногласий), в настоящее время среди специалистов по индоевропейской лингвистике существует консенсус относительно классификации балтийских и славянских языков в единую ветвь. Лесистые холмы скрывают множество озер, площадь некоторых из которых достигает 12 квадратных миль. Почвы Латвии преимущественно подзолистые. Заболоченные участки находятся в Восточной низменности. Климат Латвии находится под влиянием юго-западных ветров, дующих с Атлантики. Лето часто бывает прохладным, а зима обычно длится с середины декабря до середины марта. Более половины территории Латвии покрыто лесами, лугами, пастбищами, болотами и пустырями. Леса составляют более одной трети общей площади, и около одной десятой части лесов являются культурными, где наиболее популярны сосны и ели. Однако широко распространены также березы, осины и ольхи. К самым популярным животным Латвии относятся белки, лисы, зайцы, рыси и барсуки. В то время как катание на лодках является одним из любимых видов спорта в Эстонии, в Латвии очень популярна охота. Строго лицензированные двух-трехдневные охотничьи походы являются одними из самых популярных видов отдыха и занятий спортом в Латвии. В 19В 80-х годах, когда несколько видов оказались на грани исчезновения, были начаты меры по сохранению, в результате которых увеличилось количество оленей и лосей, а бобры были вновь интродуцированы. Население птиц страны включает соловья, иволгу, черного дрозда, дятла, сову, тетерева, куропатку, зяблика, синицу, перепела и жаворонка. Аисты и цапли обычно встречаются на болотах и ​​лугах (1).

Фото Элины Далберги на Unsplash

Латышская кухня типична для Прибалтики и северных стран. Еда с высоким содержанием масла и жира. Обычно используемые специи включают черный перец и укроп, а также различные семена злаков. Латышская кухня восходит к крестьянской культуре с такими популярными продуктами, как рожь, пшеница, овес, горох, свекла, капуста и картофель. Одним из самых популярных видов мяса является свинина. Латыши традиционно используют большое разнообразие молочных продуктов — творог (biezpiens), сметану (skabais krejums), простоквашу (ruguspiens) и сыры. Популярные блюда, перенятые со времен советской оккупации, включают пельмени (вареники) со сметаной и уксусом. На завтрак латыши часто едят творог со сметаной и джемом или свежими ягодами. Супы обычно готовят с овощами и бульоном или молоком. Холодный суп (auksta zupa), рыбный суп (zivju zupa), суп из щавеля (skabeņu zupa) и грибной суп (seņu zupa) также являются фаворитами латышей. Жареный ржаной хлеб с чесноком (ķiploku grauzdiņi) и майонезом часто подают в качестве закуски в ресторанах и барах (2). С древних времен латыши варили пиво (alus), медовуху (miestiņš) и медовое пиво (medalus) до 13 века как для праздничных мероприятий, так и для повседневного употребления. Латыши любят свое пиво; однако национальный ликер, который туристы часто покупают в качестве сувенира, — это рижский черный бальзам. В Латвии существуют древние традиции приготовления различных съедобных грибов. В Латвии насчитывается около 4100 видов грибов, из которых ¼ съедобны. Из грибов, лука, чеснока, сладкой или сметанной, а иногда и грудинки делают грибной соус, который обычно едят с отварным картофелем и малосольными огурцами (3).

Латышский фольклор и мифология

Примеры национальных костюмов, фото Марии Игнатьевой

Латышская культура относится к древнейшим из сохранившихся индоевропейских культур. Большая часть его символики, например, крест-громовержец, пришла из глубокой древности. Латышская племенная жизнь, преимущественно аграрная, оказала влияние на божества и праздники. Умерших звали Вели, и считалось, что они посещали свои старые дома между днем ​​Микели, 29 сентября, и днем ​​Мартини, 10 ноября. Их души были приглашены на пир. Еду для умерших оставляли в банях, на кладбищах и в амбарах со свечами, которые оставляли гореть, чтобы мертвые могли видеть еду. Умерших приглашали помыться в баню (сауну). Подобный обычай существовал в древней Финляндии и Эстонии, где во время празднования Кекри и Мардипаев семьи устраивали баню для душ. После пира умершие души прогоняли, а дома тщательно убирали. ​Оборотни – распространенные фигуры в фольклоре всех стран Балтии. В Латвии человека, который мог превратиться в волка, называли vilkaci (волк по-русски). Этот оборотень не сможет снова стать человеком, пока кто-нибудь не коснется его одежды. Еще одним популярным мифическим персонажем является дракон Пукис. Самым распространенным объяснением огненных драконов являются метеориты, которые наблюдались аборигенами в древние времена. Даже в христианских праздниках прослеживается наследие латышского фольклора и мифологии. Например, Вербное воскресенье называется Pupolsvetdiena, что означает Вербное воскресенье, а маленьких детей часто будят по утрам ритуальные удары ивовой ветки и восклицание: «Апалс ка пуполс, веселс ка пуполс!» – «Круглая, как верба, здоровая, как верба!» Одним из самых больших фольклорных праздников, который отмечается всем народом, является празднование летнего солнцестояния, называемое Лиго (4).

А теперь, , посмотрите этот танец , который иллюстрирует сильное присутствие дохристианских элементов в латышской культуре: https://www.youtube.com/watch?v=J-YrR0gLpBU.

Проверка знаний


  1. Каково географическое положение Латвии по сравнению с Эстонией?
  2. Чем отличаются языки – латышский и эстонский? Принадлежат ли они к одной языковой группе?
  3. Какая страна ближе к Литве: Эстония или Латвия?
  4. Пожалуйста, сравните и сопоставьте двух фольклорных существ из эстонской и латышской мифологии.
  5. Опишите одно латвийское кулинарное направление, которое несколько отличалось бы от эстонского.

История

Дом Черноголовых, Рига, Латвия, фото Марии Игнатьевой

Латыши составляют видную часть древней группы народов, известных как балты. Как писал Андрес Касекамп, «Первый крестовый поход против язычников, живших на побережье Балтийского моря, был начат… в 1147 году. После этого Генрих Лев, герцог Саксонии, основал Любек как первый немецкий город на Балтийском море» (5). . К концу 13 века это название распространилось на большую часть современной Эстонии и Латвии, завоеванных во время Ливонского крестового похода (119 г.).3–1290) ливонскими меченосцами. Ливония после отступления Дании в 1346 г. простиралась до Финского залива на севере, Чудского озера и России на востоке и Литвы на юге. После завоевания немцы образовали так называемую Ливонскую конфедерацию, просуществовавшую три века. Это феодальное общество состояло из трех частей: Тевтонского ордена, Рижского архиепископства и вольного города Риги. Все трое находились в постоянном несогласии друг с другом. В 1282 году латыши очень выиграли от присоединения Риги к Ганзейскому союзу. Хотя немцы относились к латышам как к гражданам второго сорта, торговля лиги приносила некоторое процветание всем, кто занимался торговлей. В 1561 году территория Латвии была разделена. Курляндия, расположенная к югу от Западной Двины, стала автономным герцогством под сюзеренитетом литовского князя, а север Ливонии также был присоединен к Литве. Рига стала частью Речи Посполитой в 1581 году. В 1621 году она была завоевана Густавом II Адольфом из Швеции. Русский царь Иван Грозный пытался расширить территорию России до Балтийского моря, но потерпел неудачу. Царь Алексей Романов, отец Петра Великого, проиграл войны со Швецией и Польшей (1653–67). Наконец, именно Петр Великий прорубил окно в Европу, как писал великий русский поэт Александр Пушкин в поэме «Медный всадник». В 1710 году во время Второй Северной войны Петр Великий захватил Ригу. По Ништадтскому мирному договору (1721 г. ) северный латвийский регион Видземе стал российским. Латгалия была присоединена к России в 1772 г., а Курляндия была приобретена в 179 г.5. Таким образом, к концу 18 века вся Латвия стала западной частью Российской империи. Как писал Анатолий Ливен, «Первые сто пятьдесят лет русского правления были во многом золотым веком балтийско-немецкой знати. Их контроль над местной администрацией был навечно гарантирован Петром Великим Ништадтским мирным договором (1721 г.)» (6). Хотя крепостное право в Латвии было отменено почти за 40 лет до освободительного акта Александра II (в Курляндии в 1817 г. и в Видземе в 1819 г.), крестьянам не разрешалось покупать землю до освобождения крепостных во всей империи в 1861 году.

Проверка знаний

  1. Как Ганзейский союз улучшил латвийскую торговлю?
  2. Почему балтийские крестьяне, как эстонские, так и латышские, предпочитали шведское правление русскому?
  3. Почему Петр I отдавал предпочтение немецким баронам Латвии?

Чтобы закончить этот подраздел, пожалуйста, прочитайте краткую биографию Петра Великого.

 Национальное пробуждение

Рижский магазин национальной одежды, фото Марии Игнатьевой

Отмена крепостного права в трех прибалтийских губерниях, пусть и неполная, привела к двум важным социально-экономическим факторам. Во-первых, это возможность крестьян постепенно приобретать земельные участки, которые они ранее арендовали. Вторым было переселение крестьян из деревень в большие города, Таллинн в Эстонии и Ригу в Латвии. В течение следующих пятидесяти лет производственный сектор города расширился и включал в себя машиностроительные заводы, судостроительные заводы и фабрики по производству железнодорожных вагонов, электроприборов, химикатов, а с начала 1900-е годы, автомобили и самолеты. В 1872 году через Даугаву был построен железнодорожный мост. Благодаря железным дорогам латыши могли путешествовать по стране на первый латышский национальный праздник песни, организованный в 1873 году Рижским латышским музыкальным обществом. Телеграф (1852 г.) и телефон (1882 г.) связали Ригу с миром. Он мог похвастаться модернизированной инфраструктурой, такой как газовый завод (1862 г.) и централизованное электроснабжение (1905 г.). Официальную политику насильственной русификации, продвигаемую Александром II и особенно активно Александром III, можно было бы признать контрпродуктивной. Это дало возможность аборигенам искать различные способы выражения своей национальной идентичности, будь то музыка, литература, искусство или театр. Латыши называют себя народом исполнителей народных песен. Через традиции фольклора, коллективного пения и танцев во время национальных праздников их самоидентификация начала формироваться в середине-конце 19 века.век. Латышская народная песня, или дайна , является самой важной частью латышской культуры. По сей день дайн из остаются источником коллективного вдохновения для латвийского народа, раскрывая богатое культурное наследие страны. Дайны , каждая из которых обычно состоит из четырех строк, рассказывают истории семьи или любви или связаны с мифами. Самые старые из сохранившихся письменных свидетельств латышских народных песен датируются 1584 и 1632 годами. Первые сборники латышских народных песен, составленные немецкими священнослужителями Г. Бергманном и Ф. Варом, были изданы в 1807 году. пробуждение, Кришьянис Баронс (1835-1923) завершил антологию латышских народных песен. Между 1895 и 1915 годами он опубликовал шесть томов и восемь книг, содержащих 217 996 текстов латышских народных песен. « Дайну Скапис – Кабинет народных песен» – документальное наследие, представленное Латвией и рекомендованное для включения в реестр «Память мира» в 2001 году (7). Сегодня коллекция выросла примерно до 1,2 миллиона текстов и более 30 000 различных мелодий. Как однажды сказала бывший президент Латвии, а также фольклорист Вайра Вике-Фрейберга: «Латышу дайн – это больше, чем литературная традиция. Они являются воплощением его культурного наследия, оставленного предками, которым история отказала в других, более осязаемых формах выражения. Таким образом, эти песни составляют основу латышской идентичности, а пение становится одним из отличительных качеств латыша» (8). В последней четверти 19 века дух национального возрождения захлестнул всю территорию Латвии.

Пожалуйста, посмотрите, как Присцилла Эрнандес исполняет типичную песню Лиго.

Проверка знаний


  1. Как традиция пения способствовала формированию латышского национального самосознания? Пожалуйста, объясните значение дайна .
  2. Почему, на ваш взгляд, политика русификации, навязанная Российской империей, была контрпродуктивной?

Развитие искусства и театра

Янис Плиексанс

Рижский латышский театр был основан в 1868 году, почти одновременно с эстонским театром Ванемуйме. Поэзия, проза и драматургия переплелись в творчестве самого известного латышского писателя Яниса Райниса (псевдоним Яниса Плиексанса, родился 11 сентября 1865 года, Варшавани, Латвия, Российская империя — умер 12 сентября 19 года). 29, Майори, Латвия). Райнис учился в Рижской городской гимназии. В школьные годы он перевел стихи и драматические произведения Александра Пушкина, среди них «Тощий рыцарь» и «Борис Годунов» . В 1884 году Райнис стал студентом юридического факультета Петербургского университета. Там, кроме права, он посещал лекции по филологии, истории и даже химии. По окончании учебы зимой 1889 г. он принял должность кандидата юстиции и секретаря Виленского окружного суда (Литва). В свободное время Райнис продолжал писать стихи и статьи на разные темы для латвийской газеты 9.1679 Ежедневный листок . Увлеченно изучал русский и латышский фольклор. В 1893 году Райнис посетил Международный социалистический и рабочий конгресс в Цюрихе. Его вдохновляли социалистические идеи и мечты о независимой Латвии. После своего преобразования в Цюрихе в 1895 году он написал стихи «Холодная душа» , «Гордая душа» и «Глубочайшие мысли» и впервые подписал их как Райнис. В 1896 году Райнис был арестован за участие в социалистической деятельности и отправлен в Паневежскую тюрьму в Литве. В тюрьме Райнис перевел г. «Фауст » И. В. Гёте, изданный в 1898 г. Признанный виновным в антиправительственной деятельности, сослан сначала в Псков, а затем в 1899 г. выслан в Вятскую губернию России. Находясь в эмиграции, Райнис продолжал переводить пьесы, среди которых были такие шедевры, как «Король Лир» Шекспира , «Прометей» Гете, «Мария Стюарт» и «Вильгельм Телль » Ф. Шиллера. Также он писал очерки на самые разные темы для латвийских газет. Его поэтический сборник 9Книга 1679 г. «Отдаленные намеки голубым вечером» г. ярко выразила волнение, волнение, надежды и отчаяние на рубеже веков и стала открытым призывом к социальным изменениям. В 1903 году Райнису разрешили вернуться в Латвию. Райнис активно участвовал в революции 1905 года. Он выступал перед толпой на различных светских мероприятиях и присутствовал на конференции учителей Латвии. Райнис надеялся, что революция 1905 года станет частью общей борьбы за освобождение и независимость Латвии. Его символическая пьеса, написанная в то же время и, несомненно, под влиянием гетевской Фауст – самое страстное посвящение революции 1905 года в латышской культуре (9).

В 1903 году Музыкальный комитет Рижского латышского музыкального общества объявил конкурс на лучшее оперное либретто. Райнис решил в нем участвовать, но, неожиданно для себя, написал полнометражную пьесу под названием « Огонь и ночь ». В основу сюжета легла эпическая поэма Андрея Пумпурса Убийца медведей ( Лачплесис ). Цвета, звуки и символы сплелись в эпической драме Райниса. Огонь и ночь стал одним из самых важных примеров символизма в латышской литературе. Райнис писал, что «…задолго до того, как была написана пьеса, я был… занят изучением народных легенд, рассказывающих истории о латышских героях…» Критик Гунтис Берелис уточнил: «Как уже видно из названия, Райнис, убежденный диалектик, разделил его характеры на абсолютные противоположности. С одной стороны, силы света: Медвежатники (символизирующие латышский народ и его стремление к свободе), Лаймдота (символизирующие Латвию) и Латышские правители. С другой стороны, есть силы тьмы: Черный Рыцарь, немецкие захватчики и предатели, Кангары и Ликчепуре» (10). Один из персонажей, Спидола, резюмирует мантру Райниса: «Только изменив себя, можно перехитрить свою судьбу!» Не было до 1911, через шесть лет после того, как было написано, что пьеса впервые поставлена ​​в Новом Рижском театре. Драма Огонь и ночь переведена на эстонский, английский, французский, русский и белорусский языки.

Аспазия

В декабре 1905 года Райнис и его жена Аспазия уехали из Латвии в Швейцарию. Живя в добровольной ссылке, он продолжал писать. Его пьесы, такие как Золотая лошадь (1909), Индулис и Ария (1912) и Дуй, ветер! (1914) произведены в Латвии (11). В 1920 году Райнис с женой вернулись в Латвию. Их приветствовали тысячи поклонников. Вскоре после приезда со сцены Латвийской национальной оперы Райнис обратился к нации, призвав людей бороться за политические свободы и права человека. Как кандидат от Социал-демократической партии Райнис был избран депутатом Латвийского парламента. Райнис был одним из основателей Художественного театра «Дайлес театрис» (1920) и его первым директором (до 1921). Он был директором Национального театра с 1921 по 1925 год. В качестве министра просвещения (1926-1928 годы) он регулярно посещал школы по всей Латвии. Райнис написал несколько сборников стихов для детей, которые сейчас считаются классикой детской поэзии. Среди пьес Райниса 20-х годов — об Илье Муромце ( Илья Мурометис , 1928) — ироническая басня о русском народном богатыре, не понимающем адекватно происходящего вокруг. В другой его пьесе под названием «Рижская ведьма» ( Rigas ragana , опубликовано и исполнено в 1928 году) Райнис изобразил Петра Великого тираном и злым захватчиком. Янис Райнис скончался 12 сентября 1929 года на даче в Майори и был похоронен на Новом кладбище в Риге, позже переименованном в его честь (12).

Проверка знаний


  1. Почему до революции 1905 года Янис Райнис так много времени уделял художественным переводам?
  2. В стихах и пьесах Райниса смешаны фольклорные образы с символикой, народное культурное течение конца XIX в. го и начала 20 веков в Европе. Какая из работ Райниса могла бы служить лучшим примером вышеприведенного утверждения?
  3. Какими были обязанности и деятельность Райниса на посту министра образования Латвии?

Годы независимости: 1918-1940

Памятник Свободы в Риге, фото Эйлин Кунклер

Латвия была одной из наиболее индустриально развитых частей Российской империи до Октябрьской социалистической революции 1917 года, а Рига была одним из пяти ее крупнейших городов . Благодаря продвинутой индустриализации в Латвии развилось сильное рабочее движение, и их симпатии разделились между латышской борьбой за независимость и большевизмом. Военнослужащие исторически известных латышских стрелковых полков, сформированных царским правительством в 1915 для борьбы с немцами во время Первой мировой войны, также были разделены, и некоторые из них присоединились к Красной Армии. К 1920 году как немецкие, так и советские попытки захватить Латвию потерпели неудачу. Передел земли произошел в Латвии в то же время, что и в Эстонии. Хотя на перестройку промышленности, торговли и сельского хозяйства, нормализацию экспорта и импорта ушло 8-10 лет, Латвия наконец стала независимой. Среди самых влиятельных латвийских политиков того времени был Карлис Улманис, и он заслуживает нашего особого внимания.

Карлис Улманис

Родился в 1877 году на хуторе Пиксас, в 1897 году переехал в Ригу, где работал управляющим молочной фермой. Изучал сельское хозяйство в Цюрихском и Лейпцигском университетах. Как и многие его соотечественники, он участвовал в революции 1905 года, воодушевленный идеями освобождения Латвии. Улманиса арестовали и посадили в тюрьму, где он содержался до 1906 года. Он был освобожден из тюрьмы и уехал из Латвии в добровольную ссылку в США. Он прошел дополнительные курсы по сельскому хозяйству и экономическому бизнесу в США, после чего устроился преподавателем в Университет Небраски. После царской амнистии пленным 19 в.05 революции 1913 года Улманис вернулся в Латвию и стал соучредителем Латвийского крестьянского союза. В 1918 году он был избран премьер-министром и выбран членами правительства. Не желая идти на компромисс и имея много врагов, в 1919 и 1920 годах Улманис пережил два покушения. Он служил в правительстве на различных должностях, пока не организовал переворот и не стал премьер-министром с 1934 по 1940 год. Позже он добавил должность государственного президента к премьер-министру и объявил себя лидером народа. Улманис сформировал новое правительство без проведения референдума. Под предлогом г. Латинизация г. некоторые из крупных предприятий, принадлежащих немцам и евреям, были национализированы. Улманис, в свою очередь, был вынужден Советами отказаться от своей власти после пакта Молотова-Риббентропа. Он был депортирован в СССР 22 июля 1940 года. Жил в особняке на Ворошиловске в качестве почетного гостя до вторжения нацистов в июне 1941 года. После начала Великой Отечественной войны (термин, которым русские называют Второй мировой войны) Улманис был арестован как враг народа за интернациональную контрреволюционную деятельность. Умер в тюрьме в Красноводске 19 сентября.42 . Жизнь Карлиса Улманиса символически и трагически повторяет путь многих руководителей СССР: революционеров и борцов за свободу до 1917 года, ставших влиятельными политическими фигурами в 20-х и 30-х годах, чтобы быть убитыми в конце 30-х и 40-х годах, в эпоху сталинских репрессий. (13).

Проверка знаний

  1. Карлис Улмнанис преподавал в Университете Небраски. Почему он временно иммигрировал из Латвии?
  2. Объясните, почему на смену демократическому правительству в Латвии пришел авторитарный режим.
  3. Как авторитарный режим повлиял на латышскую национальную культуру?

После пакта Молотова-Риббентропа

Скандальный памятник латышскому стрелку Первой мировой войны в Риге. Фото Эйлин Канклер

После заключения пакта Молотова-Риббентропа в октябре 1939 года Советский Союз разместил в Латвии 30 000 военнослужащих. Одновременно с Эстонией началась массовая репатриация немецкого населения из Латвии. В июне 1940 года Молотов направил в страны Балтии меморандумы, в которых обвинял их в антисоветском союзе и требовал формирования новых правительств для соблюдения договоров СССР. В Риге мастерски была организована просоветская демонстрация. Советский крейсер доставил в качестве участников 25 000 человек из России, многие из которых недавно были освобождены из плена. Следуя «желанию масс», были сформированы народные правительства, «поддержанные толпой», которая, в свою очередь, потребовала присоединения Латвии к СССР (14). 5 августа Латвия подала прошение о вхождении в состав СССР, которое было ратифицировано Верховным Советом. Сразу после этого все политические институты приступили к реализации решений, продиктованных Москвой. Единственной официальной партией, оставшейся в Латвии, была коммунистическая партия. 19 июня40 началась экспроприация собственности. Валюта была несправедливо отрегулирована, и латвийский лат, который до аннексии был обменен по 10 к рублю, после этого стал 1 к 1. В Латвии начались насильственные выселения и депортации, подобные тем, что происходили в Эстонии и Литве. Были введены суровые сталинские законы о труде, а профсоюзы лишились власти или были распущены. Например, рабочему не разрешалось увольняться без одобрения начальника, а если рабочий все же увольнялся, он мог провести в тюрьме от 2 до 4 месяцев. Начался и земельный передел: «В Латвии землю получили 52 000 безземельных крестьян, увеличились размеры 23 000 мелких хозяйств» (15). Считая идеологические баталии важнейшей частью борьбы за власть, все издательства, типографии и магазины были захвачены Советами и объединены в одно целое. Лишь нескольким крупным газетам разрешили продолжить работу, но их передовицы стали отражать взгляды Кремля. За очень короткий период латвийская система образования была реструктурирована, отражая советскую. Более 4000 книг были запрещены, изъяты из библиотек, а кое-где – сожжены. Число депортированных превысило 15 000 человек, в том числе детей. Неудивительно, что в 1919 году многие латыши приветствовали немцев как освободителей. 41. Полное осознание того, что такое гитлеризм, придет позже.

Проверка знаний


  1. Почему Советы объединили различные латышские издательства в одно большое издательство?
  2. Почему в 1940 году Советы запретили в Латвии 4000 книг?
  3. Почему некоторые латыши приветствовали приход нацистов?

Годы войны: 1941-1945

[Антикоммунистический, антисемитский плакат, 1941] Бундесархив, Bild 101I-765-0596-24/Kurschat/CC-BY-SA 3.0, via Wikimedia CommonsХотя многие латыши, опустошенные сталинскими депортациями своих друзей и семей, надеялись, что новый нацистский режим вернет их собственность и статус, немцы «расценивали прибалтийские территории как оккупированный регион, открытый для максимальной эксплуатации своих ресурсов для общего ведения войны, а балтийцы рассматривались прежде всего как поставщики сельскохозяйственных продуктов и рабочей силы» (16). Однако, в отличие от Советов, агрессивно проводивших политику советизации всего региона, немцы осуществляли лишь общую идеологическую цензуру. Они позволили сохранить латышскую традиционную культурную жизнь, хотя Гёте Фауст , переведенный на латышский язык Янисом Райнисом, был запрещен. Несмотря на то, что Рижский университет был закрыт в 1941 году, он вновь открылся в 1942 году, одновременно с Тартуским университетом в Эстонии. По мере продолжения войны и продвижения Советов нацисты начали насильно вербовать местных жителей, отправляя их в Германию, чтобы пополнить рабочую силу военного времени. Этническая чистка в Латвии была частью нацистской политики «чистой расы». Было убито около 3000 латвийских цыган. В 1939 году еврейское население оценивалось в 9 человек.3000. Около 5000 евреев были депортированы Советским Союзом. Около 18 000 латвийских евреев были призваны в Красную Армию или эвакуированы Советами. Из примерно 70 000 евреев, оставшихся в Латвии после отступления Советов, к моменту разгрома нацистов в живых осталось только 4 000 (17). В конце 1944 года латыши, как и эстонцы и литовцы, оказались между молотом и наковальней. Нацисты ушли, но Советы вернулись и вновь оккупировали их территории.

Проверка знаний


  1. Пожалуйста, сравните политику по отношению к местному населению, проводимую двумя режимами, советским и нацистской Германией. Найдите два основных отличия и два существенных сходства.
  2. Пожалуйста, сравните Холокост в Эстонии и Латвии.

Послевоенная Латвия

Пассивное и активное сопротивление восстановлению Советской власти сопровождало советские планы послевоенного восстановления экономики, индустриализации и коллективизации. В Латвии, хотя точных цифр никто не знает, предполагалось, что в лесах между 19 и 20 веками находилось до 15 000 человек.45 и 1953 в составе сопротивления. Многие группы считали, что получат немедленную поддержку Запада после 1945 года, которой, как известно, так и не последовало. В массовом порядке происходила коллективизация сельского хозяйства, сопровождавшаяся ликвидацией средних или зажиточных крестьянских хозяйств. В 1949 г. из Латвии в Сибирь или Казахстан было депортировано 50 000 крестьян (18). Многих из них забрали посреди ночи, разрешили собрать только необходимые предметы домашнего обихода и одежду, после чего отвезли на грузовиках на вокзалы и погрузили в вагоны для скота. В то же время в Латвию из 19с 45 по 1959 г. Коллективизация сельского хозяйства была завершена в 1947–50 гг. (19).

Оттепель и возрождение национальной культуры (1956-1968)

«BS276 Рига, Латвия» С.К. LO имеет лицензию CC BY-NC 2.0

После начала оттепели в 1956 году политическая и социальная атмосфера в Латвии начала меняться к лучшему. Депортированные возвращались, и коренное население увеличилось, достигнув 62% по данным переписи населения Латвии 1959 г. (20). Празднование летнего солнцестояния, которое всегда было главным национальным праздником в Латвии, снова было разрешено советскими властями. Среди первых литературных возрождений был поэт Аспазия (1868-1919 гг.).43), муза, коллега и жена Яниса Райниса. Непреодолимая национальная тяга к латышской классике привела к массовому переизданию ее классических авторов, среди которых были Эрикс Адамсонс, Вероника Стрелерте и Янис Меденис. В 1957 году лауреат Сталинской премии по литературе 1946 года Андрейус Упитс открыл кампанию против примитивного понимания социалистического реализма в искусстве и литературе. Однако, как писал Андрес Касекампс, «пределы «оттепели» наиболее резко проявились в Латвии, где на первый план выступила группа молодых, энергичных, идеалистически настроенных туземных партийцев… Они искренне верили, что построение коммунизма в Латвии удастся, если посланные из России научились общаться на латышском языке» (21). «Латинизация» и стремление к более самостоятельному политическому управлению в республике были подавлены Москвой и закончились чистками. В отличие от сталинских чисток, жертв не казнили, а либо понижали в должности, либо исключали из коммунистической партии. К 1961 было исключено несколько тысяч членов партии. Чистка затронула не только Коммунистическую партию, но и комсомол, средства массовой информации. Холод, который принесла чистка 1959 г., существенно изменил культурную атмосферу в республике. Поэзия Аспасии снова была запрещена после нескольких нападок на «нефильтрованное» латышское литературное наследие в «Правде» (одной из крупнейших газет СССР). Лишь в 1968 году, после того как многие известные латышские критики выступили против грубого обращения с национальной литературой, произведения Аспазии были переизданы. Несмотря на неудачи и требования цензуры, латышская национальная литература и искусство продолжали расти и процветать в различных жанрах.

Среди наиболее заметных латышских авторов того времени был Альбертс Белс . Альбертс Белс (урожденный Янис Цирулиус, 1938) — писатель психологических романов и рассказов, видный интеллектуал, почетный член Академии наук. Белс пробовал разные профессии. Например, с 1955 по 1956 год он был студентом Московского училища циркового искусства. Он изучал электротехнику, служил в армии, а также учился на Мастерских курсах сценаристов и режиссеров в Москве. Первый роман Белса, г. «Исследователь » получил высокую оценку за новаторство в прозе. Однако его второй роман, Bezmiegs ( Бессонница) , написанный в 1967 году, был запрещен к публикации до Гласности и Перестройки и был опубликован в 1987 году. — активный деятель советской реалистической литературы. Он человек покорный, без семьи… его работа… бесполезный, мертвящий ужас. Он хочет, чтобы жизнь проходила над ним, как прозрачная, струящаяся вода… Побег невозможен ни в частном, ни в государственном надзоре Латвийской Советской Социалистической Республики в целом. … Герои Бела принимают единственную оставшуюся форму освобождения — они обращаются внутрь, в память, в поток сознания и, что всего интригующее, в языческие леса XIII века» (22). Многие романы Белса были экранизированы, самый известный из них — «9».1679 г. Нападение на тайную полицию и Выстрел в лесу . Белс был награжден многочисленными наградами и премиями. Награжден орденом Трех Звезд 3-й степени (2000 г. ) и знаком отличия за участие в баррикадах 1991 г. (23).

Добросовестное использование, https://lv.wikipedia.org/w/index.php?curid=245352

Карьера культового латышского драматурга Гунарс Приеде (произносится как Pree-ye-de) (1928–2000) , началось с Оттепели (24). Его первые пять пьес были написаны в конце 50-х годов. Они вывели на сцену новое поколение латышей с надеждами, ожиданиями, успехами и падениями. Это поколение росло и взрослело в латышском советском общественно-политическом строе. Yhey достиг совершеннолетия в конце 1950-е годы они смутно помнили ВОВ и годы независимости. Для них советская действительность и советская школа были единственным, что они знали. Однако советская система поставила их перед серьезными моральными дилеммами: готовы ли они пожертвовать даже ограниченной свободой творчества ради карьеры? Как можно было реализовать свои мечты в советское время, где настоящий профессиональный успех гарантирует только членство в коммунистической партии? Некоторые пьесы Приеде подвергались скрупулезной советской цензуре. В его пьесе Тава Лаба Слава ( Your Good Reputation , 1964) музыкант стоит перед выбором между официальным признанием и правом свободно творить, оставаясь неизвестным. Спектакль Ugunskurs leja pie stacijas ( Пожар на станции ) был поставлен Адольфом Шапиро в Рижском ТЮЗе в ноябре 1973 года. Спектакль был заморожен на шесть месяцев группой цензоров из Министерства Культура и ЦК Латвийской коммунистической партии. Борьба с цензурой вынудила Гунарса Приеде не писать пьес в течение десяти лет. Он вернулся к написанию пьес в 80-х и 9-х годах.0s и написал некоторые из своих лучших пьес.

Последние десять лет советского режима

Одним из самых важных вкладов в культуру Латвии до распада СССР были фильмы Юриса Подниекса (1950-1992) (25). Подниекс получил диплом оператора Московского института кинематографии. С 1967 года работал на Рижской киностудии сначала ассистентом оператора, затем оператором и режиссером-документалистом. Его самый известный документальный фильм « Легко ли быть молодым ? был завершен в 1986 году.

Легко ли быть молодым? Легко ли быть молодым?

В 1985 году Подниекс снимал рок-концерт. Он не знал, что после концерта по дороге домой группа молодых людей разгромит поезд. Позднее «хулиганы» были задержаны. Подниекс запросил у властей разрешение на интервью с арестованными подростками и получил разрешение. Собрав воедино кадры концерта, интервью с арестованными подростками и их друзьями, фильм Подниекса стал первым в своем роде документальным фильмом, в котором были показаны беседы с молодежью без цензуры. Подниекс расспросил их об их жизни: подростки честно рассказали об обманутых ожиданиях, лицемерии советского общества с его ложными и реальными ценностями, наркотиках и войне в Афганистане. Афганская война, начавшаяся в 1979, коснулись их лично: несколько их одноклассников были призваны и либо умерли там, либо вернулись инвалидами. Премьера фильма состоялась в Москве и Риге в начале 1987 года. Генеральный секретарь ЦК КПСС Михаил Горбачев лично «разрешил» фильм и разрешил его показ в Доме кинематографистов в Москве. Фильм стал настолько популярным в Советском Союзе (отчасти из-за его ограниченного распространения), что люди часами стояли в длинных очередях, чтобы получить билет. Юрис Подниекс трагически погиб в 1992. В своем некрологе Юрис Каза написал: «…Как-то в тот день, когда латыши празднуют праздник середины лета Лиго с кострами, весельем и песнями, Подниекс взял у друга акваланг и поехал на озеро Звиргзду возле Алсунги, в западной Латвии, как сообщается, для подводной охоты. Он не вернулся, и его тело было обнаружено 1 июля. Латвийские власти все еще расследуют точную причину смерти. Друзья в Риге назвали «идиотской» смерть всемирно известного режиссера, который побывал во многих опасных ситуациях, снимая эпические документальные фильмы о борьбе Латвии за национальную независимость, а также о предсмертных муках и крахе советской империи. «Ужасный, трагический круг с Юрисом замкнулся после смерти Слапиньша и Звайгзне», — сказал Аугустс Сукутс, президент Рижского международного центра нового кино, одним из основателей которого был Подниекс. …» (26).

Пожалуйста, посмотрите ЛЕГКО БЫТЬ МОЛОДЫМ? . Продолжительность фильма 1 час 20 минут.

Баррикада на улице Екаба, Рига, Apdency, CC BY-SA 3.0, via Wikimedia Commons

В 1987 году экологические проблемы вызвали массовые демонстрации и были первыми собраниями, которые не были организованы правительством с послевоенных времен. Латвийский народный фронт, основанный в 1988 году, одержал победу на выборах 1990 года. 8 мая 1990 года Верховный Совет Латвийской Советской Социалистической Республики принял декларацию о восстановлении независимости Латвийской Республики. Советские усилия по восстановлению прежнего строя завершились насильственными инцидентами в Риге 19 января.91. После неудавшегося переворота в Москве в августе того же года законодательный орган Латвии провозгласил полную независимость. В годы советской оккупации, несмотря на коммунистические чистки и жесткую цензуру, латышская культура выжила, тем самым сохранив национальную идентичность людей и обеспечив независимое будущее страны.

Теперь о третьей прибалтийской стране в нашем последнем разделе, Литва !

 

Перестраиваемые нановолокна TiO2–BN–Pd за счет сочетания электроформования и осаждения атомных слоев для усиления фотодеградации ацетаминофена

Выпуск 7, 2022 г.

Из журнала:

Дальтон Транзакции


Настраиваемые нановолокна TiO

2 –BN–Pd за счет сочетания электроформования и осаждения атомных слоев для усиления фотодеградации ацетаминофена†

Сыреина Сайех, ab Фида Танос, или Амр Нада, ac Жоффруа Лесаж, и Франсуа Зависка, и Эдди Пети, и Винсент Руссак, и Игорь Яцунский, д Эмерсон Кой, д Римский Витер, иф Дайна Дамберга, и Матьё Вебер, г Антонио Раззук, b Джульетта Стефан б а также Михаил Бечелани * и

Принадлежности автора

* Соответствующие авторы

и Европейский институт мембран, IEM UMR 5635, Университет Монпелье, CNRS, ENSCM Place Eugène Bataillon, 34095 Montpellier cedex 5, Франция
Электронная почта: mikhael. bechelany@umontpellier.fr

б Laboratoire d’Analyses Chimiques, LAC – Ливанский университет, факультет естественных наук, Дждейдет , Ливан

с Департамент анализа и оценки, Египетский институт нефтяных исследований, Каир, Египет

д Нанобиомедицинский центр, Университет Адама Мицкевича, Wszechnicy Piastowskiej 3, 61-614 Познань, Польша

и Институт атомной физики и спектроскопии Латвийского университета, бульвар Райниса, Рига, Латвия

ф Центр коллективного пользования научным оборудованием Сумского государственного университета, ул. Санаторная, 31, 40018 Сумы, Украина

г ун-т Гренобль-Альпы, CNRS, Grenoble INP, LMGP, F-38000 Гренобль, Франция

Аннотация

Спрос на источники пресной и чистой воды во всем мире растет, поэтому необходимо разработать новые способы устранения микрозагрязнителей и других вредных веществ из воды. Фотокатализ — многообещающая альтернативная «зеленая» технология, которая показала отличные результаты в разложении стойких загрязнителей. Диоксид титана является наиболее часто используемым катализатором из-за его привлекательных физико-химических свойств, но этот полупроводник имеет ограничения в процессе фотокатализа из-за большой ширины запрещенной зоны и быстрой рекомбинации фотогенерированных носителей. Здесь был разработан новый фотокатализатор на основе нановолокон диоксида титана (TiO 2 НФ), синтезированные методом электропрядения. NF TiO 2 были покрыты методом атомно-слоевого осаждения (ALD) для выращивания нитрида бора (BN) и палладия (Pd) на их поверхности. Измерения УФ-видимой спектроскопии подтвердили увеличение ширины запрещенной зоны и распространение спектрального отклика на видимый диапазон. Затем полученные нановолокна TiO 2 /BN/Pd были испытаны на фотокатализ и показали резкое увеличение деградации ацетаминофена (ACT) (>90%), по сравнению с разложением всего лишь на 20%, полученным с чистым TiO 2 после 4 часов облучения видимым светом. Высокая фотокаталитическая активность объясняется хорошей дисперсией НЧ Pd на нановолокнах TiO 2 –BN, что приводит к более высокому переносу фотовозбужденных дырочных носителей и уменьшению фотогенерированной электронно-зарядовой рекомбинации. Чтобы подтвердить возможность повторного использования, были проведены испытания гибридного фотокатализатора TiO 2 /BN/Pd на переработку, показавшие хорошую стабильность в течение 5 циклов в УФ и видимом свете. Кроме того, были проведены тесты на токсичность, а также тесты на гашение для проверки токсичности образующихся побочных продуктов и определения активных частиц, ответственных за разложение. Результаты, представленные в этой работе, демонстрируют потенциал TiO 2 /BN/Pd наноматериалы и открывают новые перспективы для получения перестраиваемых фотокатализаторов.

  • Эта статья является частью тематического сборника: Коллекция Spotlight: осаждение атомных и молекулярных слоев

Варианты загрузки Пожалуйста, подождите. ..

Дополнительные файлы

  • Дополнительная информация PDF (108K)

Информация о артикуле

ДОИ
https://doi.org/10.1039/D1DT03715C

Тип изделия
Бумага

Отправлено
02 ноя 2021

Принято
06 января 2022

Впервые опубликовано
06 янв. 2022

Эта статья находится в открытом доступе

Скачать цитату

Dalton Trans. , 2022, 51 , 2674-2695

BibTexEndNoteMEDLINEProCiteReferenceManagerRefWorksRIS

Разрешения

Запросить разрешения

Социальная деятельность

Получение данных из CrossRef.
Загрузка может занять некоторое время.

Прожектор

Объявления

Concord-Carlisle – MassHSHockey

Перейти к содержимому

Записи команды

тип вон потерял связаны гс га баллов% побед
Лига/Конференция 6 8 0 34 48 12 0,429
Общий 10 10 0 53 60 20 0,500
Отборочный турнир штата
Рекорд государственного турнира

Тренерский штаб

ФИО заголовок телефон электронная почта
Райан Мюррей Главный тренер 339-927-0480 [электронная почта защищена]
Майкл Дж. Маструлло Главный
Эйдан Кэмпбелл Помощник тренера
Майк Куломб Помощник тренера
Эван Барбер Помощник тренера

Состав

Фигурист

# Игрок Позиция Год Город ГП Г А Очки
2 Крис Чиарочи Вперед 2025 1
3 Эйдан Дауд (К) Вперед 2022 1 2 8 10
4 Боде Райс Защита 2023 1
5 Дэвис Ламберт Вперед 2022 1
6 Маркус Брасерас Защита 2023 1 5 5
7 Бен Меган Вперед 2023 1
8 Кэм Дейли Вперед 2024 1 2 5 7
9 Картер О’Брайен (A) Вперед 2022 1 10 11 21
10 Люк Райнис Защита 2024 1 1 1
11 Оливер Эрстон Вперед 2025 1
12 Дерек Лабадини Вперед 2024 1 6 5 11
13 Тедди МакКаун Вперед 2023 1 2 2
14 Джек Вебстер (A) Вперед 2022 1 2 13 15
15 Лукас Демарко Вперед 2022 1
15 Кэл Лонерган Защита 2024 1
17 Итан Торп Защита 2024 1
19 Вятт Джеймс Вперед 2023 1
20 Мика Беннетт Защита 2023 1 2 2
21 Бен Оганян Защита 2025 1 1 10 11
22 Джей Картер Вперед 2024 1 14 12 26
23 Стоддард Хили Вперед 2025 1 1 2 3
25 Гуннар Лайонс Вперед 2025 1
27 Ной Торп (A) Вперед 2023 1 13 11 24

Вратарь

# Игрок Позиция Год Город А Г. А. СВ% Мин ГАА
1 Джейсон Суэйм Вратарь 2025 27 0,903 490 2,48
30 Си Джей Бейли Вратарь 2024 23 0,869 350 2,96

График команды

Примечания: Battle Road Classic

Примечания: Battle Road Classic

Примечания: CONCORD-CARLISLE WINS в OT

999 444444444444444.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.